相关专题 细胞器总览 人们原认为线粒体 的外膜只是渗透膜，对线粒体 的功能没什么影响。但1976年，在线粒体外膜上存在电压依赖性阴离子通道蛋白(voltage dependent anion channel，VDAC)首次得到确认，使人们对以前的看法提出了质疑(Scheinetal.1976)。自此，多种VDAC蛋白被发现，它们的功能用体外重组 和基因敲除的方法得到了证明。 大量事实证明VDAC参与介导了促凋亡蛋白的释放，并且Bcl-2家族蛋白司·直接作用于VDAC调控凋亡(Shimizu et al.]999)，如Bax/Bak/Bim可促使VDAC孔道开放，导致内外膜之间存在的蛋白释放，而BcI-2/BclXL可抑制这——过程。氧自由基可直接打开VDACl孔道而允许细胞色素c释放，并且氧自由基扪‘开VDAC孔道与Bax/Bak无关(Madeshetd.2001)。高浓度C沪可打开PTP孔道，{氏浓度Ca2’可促进其他因子对PTP的开放作用，这种作用已被确定也有VDAC的参与(Tsujilmoto et al.2002)。

相关专题 肝细胞凋亡 (apoptosis)为自身程控性细胞死亡，多属于生理过程：肝细胞通过嗜酸性变而发生固缩，胞体变小，胞质变致密，核浓缩以致消失，形成嗜酸性小体。这种死亡是主动的，耗能的单个细胞坏死 ，胞浆不呈现适应性反应。而肝细胞坏死 多见于肝脏损伤性病变中，肝细胞严重水变性而高度肿胀，发生气球样变，进而细胞膜 溶解和核破裂，核溶解。 有人形象地把肝细胞凋亡比喻为秋叶凋落，秋天树叶脱落是为了保存水分以备来年生长，而肝细胞凋亡是为了肝细胞的再生，是为维持内环境稳定的一种自主性的自杀现象。因此肝细胞凋亡不同于肝细胞坏死。但在同一肝炎患者的肝穿刺组织中，可以见到细胞坏死和细胞凋亡同时存在。 细胞凋亡概述 细胞凋亡(apoptosis)是细胞死亡形式之一，它以细胞DNA发生特异性的降解，形态上表现为核固缩、胞膜发泡和凋亡小体形成为特征，是由特定的基因调控，无明显细胞溶解的自杀过程。诸多生理及病理过程均有凋亡参与调节。近来大量的研究表明，细胞凋亡在肝细胞损伤过程中发挥重要作用。 肝细胞凋亡是目前

相关专题 细胞的作用 雷蒙德.戴维斯( R aymond Davis Jr)，美国，美国宾州大学物理天文系1914年生于美国。 小柴昌俊( M asatoshi Koshiba)，日本日本东京大学国际基本粒子物理中心1926年生于日本。 里卡尔多.贾科尼( R iccardo Giacconi),美国美国华盛顿特区联合大学公司( A sso ciated Universities Inc.)1931年生于意大利。 H?罗伯特?霍维茨于1947年5月8日出生于美国芝加哥。先后于1972年和1974年取得哈佛大学生物学硕士和博士学位，后历任麻省理工学院助理教授、副教授、教授。霍维茨得知自己获奖时正在法国度假，他表示“这太令人高兴了，我一会儿要在午餐前干一杯香槟。再也没有比得知自己的发现被应用到治疗人类的疾病上而让我高兴的事了。” 约翰? E?苏尔斯顿生于1942年3月27日，1963年获英国剑桥大学学士学位，1966年获剑桥大学博士学位。1969年加盟布伦纳在剑桥大

相关专题 细胞凋亡专题 先前科学家们认为，动物和植物 细胞死亡的遗传学过程是不同的。现在，一国际研究团队发现，植物 和动物中决定细胞程序性死亡 的遗传学过程实际上是进化 相关的，并且用相同的方式执行功能。 这项研究结果发布在10月11日的Nature Cell Biology上。 对于植物、动物，以及人类来说，细胞的生长和死亡同样都受到严格控制。这些过程中，细胞死亡是以程序性细胞死亡的形式进行的。该过程的破坏会导致严重疾病的发生，比如癌症，帕金森氏症。 动物细胞的蛋白酶属于一个叫caspases的蛋白家族，而植物中没有caspases，取而代之的是meta-caspases，其被认为是caspases的祖先，能降解TUDOR-SN。 科学家首次证实蛋白TUDOR-SN是被一种类似的蛋白激酶所降解的，而这种蛋白激酶在植物和动物细胞中都存在。因此研究人员在植物和动物之间发现了一个进一步的关联。这项研究结果将对未来这类重要的蛋白家族的研究产生重要影响。 研究人员表示，缺少TUDOR-SN的细胞经常会

相关专题 一、微载体 培养应用 此技术于1967年被用于动物细胞大规模培养。经过三十余年的发展，该技术目前已渐日趋完善和成熟，并广泛应用于生产疫苗、基因工程 产品等。微载体 培养是目前公认的最有发展前途的一种动物细胞大规模培养技术，其兼具悬浮培养和贴壁培养的优点，放大容易。目前微载体培养广泛用于培养各种类型细胞，生产疫苗、蛋白质产品，如293细胞 、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞。 使用较多的反应器有两种：贝朗公司的BIOSTAT?B反应器，使用双桨叶无气泡通气搅拌系统;NBS 公司的Cell iGen、Cell iGen PlusTM和Bioflo3000反应器，使用Cell-lift双筛网搅拌系统。两种系统都能实现培养细胞和收获产物的有效分离。 二、微载体 是指直径在60-250μm，能适用于贴壁细胞生长的微珠。一般是由天然葡聚糖或者各种合成的聚合物组成。自Van Wezel用DEAE-Sephadex A 50 研制的第一种微载体问世以来，国际市场上出售的微载体商品的类型已经达十几种以上，包括液体微载

相关专题 细胞的作用 自从1972年Kerr等首次提出凋亡的概念以来，人们对这一大多数细胞所经历的基因控制的程序性死亡过程进行了深入的研究。明确了其组织学改变包括形态生化等方面的特征及其检测方法，并在其影响因素以及遗传学和分子 机制等方面也取得了很大进展。许多组织的凋亡失调可引起相应的疾病。而脂肪组织由于其细胞核 -浆比值较小，且细胞浆中的大量脂滴可阻止与凋亡有关的胞浆的改变(如皱缩以及凋亡小体形成)，用现有的方法很难检测出少量的脂肪细胞的凋亡并进行比较，故对脂肪组织凋亡的研究起步甚晚。本文拟对近年来脂肪细胞凋亡 研究进展及其与肥胖的关系作一综述。 早在1983年Sjostro和Miller等就提出明显的体重下降不仅包括脂肪细胞体积的减小，也包括脂肪细胞数目的减少，但并未证明细胞数目减少通过何种机制发生。1994年Prins等首次证明人类的脂肪细胞在体外培养时可由于生长因子缺乏或轻微热损伤而导致凋亡，由此阐明了正常的脂肪细胞在体内数目减少的可能的分子机制。1997年Prins等再次证明前脂肪细胞在体外经肿瘤坏死因子α(TNF-α)

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 注意事项 1. 干粉不包含的成分，常见的有NaHCO3、谷氨酰胺、丙酮酸钠、HEPES等。这些成分有些是必须添加的，如NaHCO3、谷氨酰胺，有些根据实验需要决定。 2. 配制是要保证充分溶解，NaHCO3、谷氨酰胺等物质都要等培养基完全溶解之后才能添加。 3. 配制所用的水应是三蒸水，离子浓度很低。 4. 所用器皿应严格消毒。 5. 配制好的培养基应马上过滤，无菌保存于4度。 6. 液体培养基主要是为了科研工作的方便而设计的培养基，它是一种灭菌后保证无菌的溶液，必要时可制成无内毒素等的溶液，可节省科研人员的工作量。 配制方法 1. 在一个尽可能接近总体积的容器中加入比预期培养基总体积少5%的双蒸水。 2. 在室温(20℃到30℃)的水中加入干粉培养基，轻轻搅拌，不要加热。 3. 水洗包装袋的内部，转移全部的痕量干粉到容器内。 4. 加NaHCO3到培养基中。 5. 用双蒸水稀释到想要的体积，搅拌溶解。注意不

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 目的要求 1.掌握一般培养基制备的原则和要求。 2.熟悉一般培养基制备的过程。 操作步骤 一、培养基的制备原则和要求 培养基是根据各类微生物 生长繁殖的需要，用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时，应掌握如下原则和要求： (一)培养基必须含有细菌 生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称取的份量务必准确。 (二)培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6，呈弱碱性。 (三)培养基的灭菌时间和温度，应按照各种培养基的规定进行，以保证灭菌效果及不损失培养基的必需营养成分。培养基经灭菌后，必须置37℃温箱中培养24小时，无菌生长者方可应用。 (四)所用器皿须洁净，忌用铁或钢质器皿，要求没有抑制细菌生长的物质存在。 (五)制成的培养基应该是

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 培养基配制通常先根据各组分性质，配制成较浓的母液(母液浓度为培养基浓度的若干倍如50或100倍)，贮存在冰箱中备用，以后配制培养基时根据用量量取。由于培养基成分较多，如果每配制一次即进行多次称量(不少成分用量较微)，不仅会造成较大的误差，而且会增加工作量，因而配制母液可使培养基配制方便准确。配制大量成分母液通常为原培养基浓度的20、50或100倍，倍数不宜过高。MS培养基母液及培养基配方法参考表2。 大量成分母液经常将CaCl2·2H2O单独配制保存，以免长期贮存发生沉淀。若将全部大量成分配在一起时，为防止在混合时发生沉淀，须在各药品充分溶解后，按表1.2中化合物出现顺序混合，氯化钙最后加入，以免与硫酸镁形成沉淀.大量成分称量溶解后，在1000 ml容量瓶中定 容，然后移入磨口瓶中，贴上标签，置于普通冰箱(4℃)贮存。 微量元素母液配制时，由于培养基中微量元素用量甚微，浓度为0.l~0.0001mg/l，所以母液浓度宜为原培养基配方中用量的100倍。一般将微量元素分别称量溶解，定容在10

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 一、无蛋白培养基（protein free midium,PFM）:即不含有动物蛋白的培养基。无血清培养基仍含有较多的动物蛋白，如胰岛素，转铁蛋白、牛血清白蛋白等。从生物技术发展的趋势来看，不含动物蛋白的培养基又广泛的应用前景，许多利用基因工程 技术重组 的蛋白质最终要应用于人体，如果再生长过程中使用了含有动物蛋白质的培养基，纯化过程就比较复杂，最终要达到一定的质量标准也有一定的难度。无蛋白培养基就是为了适应这发展趋势而出现的，许多无蛋白培养基添加了植物 水解物以替代动物激素、生长因子的作用。市场上已有适合多种细胞生长的无蛋白培养基。 二、限定化学成分培养基(chemical defined medium,CDM):是指培养基中的素有成分都是明确的，它同样不含有动物蛋白，同样也不是添加了植物水解物，而是使用了一些已知结构与功能的小分子 化合物，如短肽、植物激素等。这种培养基更有利于分析细胞的分泌产物。目前已经有适合于293细胞 、CHO细胞、杂交瘤细胞生长的CDM问世，上海恒利安生

相关专题 细胞器总览 细胞的作用 细胞凋亡 信号的整合主要是通过Bcl-2家族蛋白(Bcl-2familyprotem)在线粒体 膜上相互作用来实现的。Bcl-2首先由Tsujmmto等(1984)在淋巴瘤细胞中克隆 ，后被证明是线虫凋亡基因CED-9的同源类似物。Bcl-2家族包括近30种不同蛋白分手，其中包括7种病毒蛋白。基于功能和结构的不同，Bcl-2家族蛋白可以被进一步分成3个亚家族(Reed et al.1998，Tsulmloto et al.2000)：(1)抗凋亡蛋白家族，包括Bcl-2、Bcl-XL、Bcl-w、Mci-l、Al(Bfl-1)、NR-13、Boo(Div功等真核细胞蛋白以及EIB—19K、BHRF1、KS-Bcl-2、ORFl6、LMW5-HL等病毒蛋白，它们至少含有BHl、BH2两种结构域，具有抗凋亡能力;(2)促凋亡蛋白家族，促凋亡家族蛋白又进一步分为Bax亚家族(包括Bax、Bak和Bok等);(3)BH3-only亚家族，包括Bid、Bad.Bim，.Bik、Blk、Hrk(DP5)、Bnip3.

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 HEPES是一种非离子两性缓冲液,其在pH 7.2 - 7.4 范围内具有较好的缓冲能力。其最大优点是在开放式培养或细胞观察时能维持较恒定的PH值.在这种培养条件下,细胞培养 瓶的盖子应拧紧,以防止培养液中所需的少量碳酸盐散入空气中.大多数培养液中含有酚红作为pH指示剂,酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色.HEPES有些昂贵,在高浓度时对一些细胞可能有毒. 原则上,HEPES作为缓冲剂可用来代替碳酸氢盐，以解除需要高浓度CO2培养环境的限制.实际操作中并非如此简单. 溶解的CO2与碳酸氢盐对良好的细胞生长也是很重要的。 化学名：2-[4-(2-Hydroxyethyl)-1-piperazinyl]ethanesulfonic acid 中文名：羟乙基哌嗪乙硫磺酸 分子 式：C8H18N2O4S HEPES使用方法有两种： (1)HEPES可按所需的浓度直接加入到配制的培养液中,再过滤除菌.每1000ml培养液中加入2.38克HEPES,待溶后用lN Na

相关专题 细胞培养基的配制 加州大学圣地亚哥分校的研究人员开发出了一种所谓的“智能培养基”。这种培养基能用于快速筛选会发生毒性相互作用的新药物或鉴定出患者血液中初期癌变的细胞。这项研究的结果公布在6月20日的Langmuir上。 这项发明利用聚苯乙烯填充的多孔硅晶体检测细胞尺寸和形状的细微变化。开发任何新药时需要考虑的一个重要问题就是药物的毒性。由于肝脏是清洁血液的器官，当一种毒素进入身体时，肝脏细胞尤其对毒素敏感。因此，药物公司希望能在初期就知道一种药物对肝脏的影响。但是要在生活动物身上筛选每个可能药物候选毒性非常昂贵。如果能只用几个肝脏细胞来代替整个动物的话，那么筛选的成本就会大大降低。 这种新的培养基还能鉴定患者血液中的转移性癌细胞：将患者的血液样本放在这种晶体上，并将它们与正常血液样本进行比较。 在发明这种晶体时，研究人员在首先构建出具有纳米级孔的硅晶体，从而形成一种能控制光的光子晶体——类似半导体利用计算机芯片传递电流的方式。通过将大鼠的肝脏细胞粘连到晶体中的聚苯乙烯上并用一种灵敏的光度计测量光的散射，研究人员

相关专题 细胞培养基的配制 俄亥俄州立大学研究人员研制出一种大批量生产胚胎干细胞 (mass-producing embryonic stem cells)的新方法。 美国联邦政府条款规定，禁止政府对没有经过“美国国立卫生研究院人类胚胎干细胞注册”的人类胚胎干细胞系研究进行资助。目前已经有22种胚胎干细胞系经过注册，并且对这些细胞的需求正在稳步上升。俄亥俄州立大学化学和分子 生物工程学教授杨尚添(Shang-Tian Yang，音译)评论说：用传统的实验室方法生产干细胞不仅价格高，最主要的是不能满足日益增长的对人类胚胎干细胞的需要。“我们必须找到一种能够大批量生产的方法。” 杨和化学工程博士研究生Anli Ouyang合作，在一种生物反应器(bioreactor)中培养小鼠胚胎干细胞。细胞数量在15天内扩增了193倍，实验尾期的细胞密度——反应器中的细胞数是用实验室传统方法得到的10-100倍，也就意味着多出数亿的干细胞。并且检测结果显示，bioreactor中的干细胞未分化程度更高，寿命更长。 杨说，这种类型的大批

相关专题 细胞培养相关用品 细胞培养专题 1.酶标板 酶标板是一种配在酶标仪 上做酶联免疫 实验用的板子，常用的为96孔，主要是为了配合酶标仪 所设计，另外还有48孔的，但不常用。在酶联免疫 实验中，抗原 、抗体和其它生物分子 通过多种机制吸附至酶标板表面，然后于受检样本和酶标抗原 或抗体按不同的步骤进行反应，通过酶标仪来进行检测。 2.培养板 培养板是用来培养细胞或者细菌 的，有6孔、12孔、24孔、48孔、96孔之分。和透明的酶标板样子差不多，但是用途却相差很大。在培养板的孔中加入适量的培养液，然后在适合的环境下进行细胞培养 。一般的培养板都是平底的，适合细胞和组织的悬浮培养，另外还有U型底和V型底。在经过了表面改性处理之后，可以使其具有细胞贴壁培养和生长性能。 3.PCR 板 PCR板是配在PCR仪 里面用的,和酶标板配合酶标仪用一样，就是作为一个固相载体 ，让样品在其中进行PCR反应，然后利用PCR仪 进行检测。其实简单的说，PCR板就是许多PCR管的组合，一般为96孔。

相关专题 细胞培养相关用品 细胞培养专题 超声波细胞破碎仪是利用超声波在液体中的分散效应,使液体产生空化的作用,从而使液体中的固体颗粒或细胞组织破碎。常规使用方法是把要破碎的材料放到烧杯中，开电源设定时间(震动时间和间歇时间)，将破碎仪的探头放到材料中。使用过程中，超声波发生器电路将50/60Hz的市电转换成18-21KHz的高频高压电能，因此破碎过程中会大量产热，一般在冰浴下破碎。 超声波细胞破碎仪由超声波发生器和换能器两大部分组成(有的配置有隔音箱): 1、超声波发生器：工作原理：由信号发生器来产生一个特定频率的信号，这个特定频率就是换能器的频率，一般应用在超声波设备中的超声波频率为20KHz、25KHz、28KHz、33KHz、40KHz、60KHz。 2、换能器组件：换能器组件主要由换能器和变幅杆组成。 3、隔音箱：可以有效地的降低工作过程中的所发出的噪音，保持实验室安静。 超声波细胞破碎仪在我国的行业推广已进入成熟阶段，而应用仍不够普及!该仪器(设备)应用范围非常广泛，这是其它仪器设备 所不能

相关专题 细胞培养相关用品 细胞培养专题 需要明确了解生物安全柜与通风柜/超净工作台的区分。通风柜和超净工作台不属于生物安全柜，不可使用在涉及微生物 材料的实验或生产过程中。 生物安全柜(Biological safety cabinets，BSCs)是为操作原代培养 物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护工作人员、实验室环境以及实验品，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。WHO出版的《实验室生物安全手册》中明确说明：“生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染，生物安全柜同时也能保护工作环境”。当然，安全柜有效工作的前提是选购合格的安全柜和正确使用安全柜。 通风柜(通风橱)是为在化学实验过程中清除腐蚀性化学气体和有毒烟雾而设计的。由于没有装备HEPA过滤器 ，通风柜不能有效清除微生物介质。放置在通风柜内微生物样品会散播到柜外，污染实验室环境。 超净工作台(超净台)是为了保护试验品或产品而设计的，通过吹过工作区域的垂直或水平层流空气防

相关专题 细胞培养相关用品 细胞培养专题 由于现在国内的细胞库资料不是很充足，而且比较零散，包括建株时的技术层面不一，没有比较严格统一的操作规范，所以在遇到比较重要的实验项目时，一般都比较倾向于购买国外的细胞株，但购买国外细胞株需要考虑的因素有如下几点： 1、细胞株的生物等级，由于有些细胞株及菌株属于管制品，所以从国外购货比较麻烦。 2、在购买国外细胞株时，需交待国外加比较多的干冰(一般在13公斤以上，采用比较密封的泡沫盒加套纸箱。 3、报关时尽量提供比较充足的证明材料，以免担搁时间而导致干冰挥发完细胞株死亡，甚至于被退回给发货人。 4、如果通过国外细胞株在国内的代理商购买的话，合同中需注明以下一些内容： a.明确的到货时间，这个时间需注明的是工作日，还是普通日。 b.采用什么样的运输方法? c.如果属于技术外的因素而细胞株无法培养活，供方需负什么样的责任? d.细胞株的详细资料，以及细胞株的代数，其中，ATCC的细胞株一般都在几十代,这个需要与国外确认，IST-Banca可与他们

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养相关用品 细胞培养专题 绝大多数培养基是建立在平衡盐溶液(BSS)基础上，添加了氨基酸、维生素和其它与血清中浓度相似的营养物质。最广泛应用的培养基是 Eearle`s MEM 的混合物，其中含有13种必须氨基酸、8种维生素。而Ham`s F12 也包括非必须氨基酸，维生素的范围亦很广，另外常规含有无机盐和代谢添加剂(例如核苷酸 )。MEM/F12 这两种培养基各取1/2，形成神经生物学最通用的培养基。Dulbecco`s改良培养基——DMEM ，现应用于快速生长的细胞，同MEM含有相同的营养成分，但浓度高出2~4倍。选择某种培养基，应仔细了解成分表，应知道大多数情形下培养基都有不足。例如，有些培养基在氨基酸中包括有谷氨酸，而这种培养基虽广泛用于神经生物学领域，但它对某些对谷氨酸敏感的可能有细胞外毒性损伤的神经元而言，则并非最佳选择，特别是如果神经元生长在缺乏胶质的环境中时。 F12中含有硫酸亚铁，据报道也有神经毒效应。 在所有这些培养基中，谷氨酸比其他氨基酸有更高的浓度，这是因为它具有不稳定性以及

相关专题 细胞培养基的配制 细胞培养专题 血清必须贮存于–20～-70℃,若存放于4℃,请勿超过一个月。如果一次无法用完一瓶,可将40～45ml分装于无菌50ml离心管中,由于血清结冻时体积会增加约10%,必须预留此膨胀体积之空间,否则易发生污染或容器冻裂之情形。2.一般厂商提供之血清为无菌,不需再无菌过滤。若发现血清有许多悬浮物,则可将血清加入培养基内一起过滤,勿直接过滤血清。3.瓶装(500ml)血清解冻步骤(逐步解冻法-20℃或–70℃至4℃冰箱溶解一天,至室温下全溶后再分装,一般以50ml无菌离心管可分装40～45ml。在溶解过程中须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一,减少沈淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沈淀。):4.heat-inactivation是指56℃,30分钟加热已完全解冻之血清。加热过程中须规则摇晃均匀。此热处理之目的是使血清中之补体成份(complement)去活化。除非必须,一般不建议作此热处理,因为会造成沈淀物之显著增多,且会影响血清之品质。补体参与