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薄层层析的特点与发展历程

相关专题 薄层层析(TLC)技术 一、薄层色谱技术的特点 薄层色谱技术具有其他色谱技术共同的特征,即利用样品中各组成成分的不同物理特性把它们分离开来。这些物理特性包括分子 大小、形状、所带电荷、挥发性、溶解性及吸附性等。 1.薄层色谱系统的组成部分 固定相:可以是一种固体、凝胶或固定化的液体,或起支撑作用的基质。 色谱板:把固定相薄薄涂布在玻璃或塑料板上。 流动相:又称展开剂,起溶剂作用的液体,用于协助样品在固定相表面以不同速度进行迁移。 运送系统:用来促使流动相通过色谱床。薄层色谱的运送过程是借助毛细管作用、压力或者离心力等设备。 检测系统:用于检测所分离的物质。 2.薄层色谱技术的特点 ①色谱系统所用器材简单,价格低廉,操作技术易学,容易在一般实验室推广。 ②不受样品种类的限制,适用范围较广。不仅可用于复杂成分的分离,还可用于未知成分的分离和检测。并且检测可用的手段选择性多,较为方便。 ③具有多路柱效应,可同时进行多个样品的分离,且灵敏度高、检测速度快

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薄层层析法的起源及发展三个阶段

相关专题 薄层层析(TLC)技术 薄层色谱技术又称为薄层层析 法,是20世纪50年代从经典柱色谱法及纸色谱法的基础上发展起来的一种平面色谱技术;至20世纪60年代后,人们对薄层色谱法在使用器材的规格、操作方法及术语使用的标准化等方面进行了大量的工作,使该方法日趋成熟和完善,广泛地应用于中药及其制剂中各类化学物质的定性与定量分析。近20年来,人们对薄层色谱法在缩短分离时间、提高分离效率、提高检测灵敏度、保证定量精度及扩大应用范围等方面不断进行研究,取得很大进展。近几年发展起来的现代薄层色谱借助于高科技与计算机技术已发展到仪器化、自动化、计算机化和与其他色谱技术联机化的阶段,可以说是目前众多色谱技术中应用最广、发展最快的一种分离技术。总结薄层色谱技术产生和发展的过程,可以将其分为以下3个阶段。 1.起步阶段 薄层色谱法的起源可以追溯到19世纪末,当时,有人曾用明胶薄层分离盐酸和硫酸,也有人分离酶。其后于1938年由N.A.Izmailor和M.S.Schraiber首次使用在显微镜载玻片上涂布的氧化铝薄层用微量圆环技术分离了多种植

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核酸碱基薄层层析及双波色谱扫描分析准确度验证

相关专题 薄层层析(TLC)技术 核酸组成成分及衍生物的分析除常用的电泳、纸层析和薄层层析 洗脱比色法外,近年来又出现了双波长色谱扫描法和高压液相层析法。但已报道的双波长色谱扫描法测定的碱基种类不多,在测定DNA (G + C)克分子外方面,尚未见报道。我们在实验中摸索出分离核酸碱基效果好的硅胶薄层析,并考查了双波长色谱扫描分析法的准确度。 材料和方法 (一)主要试剂及仪器 1.试剂碱基A, G, C, T 和U,均为层析纯,含量>98多;A, U德国产,C为BDH产,G, T分别为上海东海制药厂和恒信化工厂产。小牛胸腺DNA为上海牛奶公司产。薄层层析 用硅胶H,为青岛海洋化工厂产。薄层层 析用纤维素(Cell ulo sepulverM N300UV254),德国产。狡甲基纤维素钠为上海化学试剂厂产。 其他试剂为AR,水为重蒸水。 2.仪器日本岛律CS-910双波长色谱扫描仪。 (二)分析方法 1.薄层层析 分离(1)制板: 取16.28硅胶H, 1.8 g MN3

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层析柱的概念及其作用原理

相关专题 层析柱的类型及作用 层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。凝胶过滤层析是利用一定大小孔隙的具有网状结构的凝胶作层析介质(如葡聚糖凝胶、琼脂 糖凝胶、聚丙烯酰胺凝胶等),根据被分离物质的分子大小、形状不同扩散到凝胶孔隙内的速度不同,因而通过层析柱的快慢不同而分离的一种层析法。 层析柱 层析柱 是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或有机玻璃管。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。此外, 直径加大,洗脱液体体积增大,样品稀释度大。分离度取决于柱高,为分离不同组分,凝胶柱床必须有适宜的高度,分离度与柱高的平方根相关,但由于软凝胶柱过高挤压变形阻塞,一般不超过1米。分族分离时用短柱,一般凝胶柱长20-30厘米,柱高与直径的比较5:1─10:1,凝胶床体积为样品溶液体积的4-10倍。 分级分离时柱高与直径之线为20:1─100:1,常用凝胶柱有50×25厘米,10×25厘米。层析柱滤板下的死体积应尽可能的小,

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离子层析柱的使用心得总结

相关专题 在培养细胞的同时,一直在进行多糖的纯化工作,由于刚开始也是进行离子层析纯化的摸索工作,所以一直都进行的不太顺利,问题很多,其中遇到的问题解决了不少,目前为止,进展还是一切顺利!现总结了离子层析柱 的基本操作方法和经验总结如下: 我使用的是DEAE-Sepharose FF(DEAE琼脂 糖凝胶)。新胶在处理时,主要是为了除掉保护液20%的乙醇,可以用蒸馏水在抽滤时进行反复的冲洗,直至洗至中性为止,在洗的过程中胶会有很多气泡,可以用真空或超声波进行脱气,静止,就可以进行装柱了。 (1) 凝胶柱的装填 将层析柱 (Φ2.6×20cm)于地面垂直固定在架子上,下端流出口用夹子夹紧,柱顶可安装一个带有搅拌装置的较大容器,柱内充满洗脱液,将溶胀后的DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶调成较稀薄的浆液盛于柱顶的容器中,然后在轻微搅拌下使凝胶下沉于柱内,这样凝胶粒水平上升,直到所需高度为止,拆除柱顶装置,稍放置一段时间,再开始流动平衡,流速应低于层析时所需的流速。在平衡过程中逐渐增加到层析的流速。平

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层析类型之吸附层析(吸附色谱)

相关专题 层析柱的类型及作用 吸附色谱仪 吸附色谱 adsorption chromatography 吸附色谱系色谱法之一种,利用固定相吸附中对物质分子 吸附能力的差异实现对混合物的分离,吸附色谱的色谱过程是流动相分子与物质分子竞争固定相吸附中心的过程。 吸附按物质状态可分为:固液吸附与固气吸附,但一般指固液吸附;按吸附手段可分为:物理吸附、半化学吸附、化学吸附。 分配系数 吸附色谱的分配系数表达式如下 : Ka=[Xa]╱[Xm] 其中[Xa]表示被吸附于固定相活性中心的组分分子 含量,[Xm]表示游离于流动相中的组分分子含量。分配系数对于计算待分离物质组分的保留时间有很重要的意义。 试剂 吸附剂 吸附剂的吸附力强弱,是由能否有效地接受或供给电子,或提供和接受活泼氢来决定。被吸附物的化学结构如与吸附剂有相似的电子特性,吸附就更牢固。常用吸附剂的吸附力的强弱顺序为:活性炭>氧化铝>硅胶>氧化镁>碳酸钙>磷酸钙>石

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层析类型之分配层析(分配色谱)

相关专题 层析柱的类型及作用 定义 色谱 partition chromatography 分配色谱系色谱法之一种,利用固定相与流动相之间对待分离组分溶解度的差异来实现分离。分配色谱的固定相一般为液相的溶剂,依靠图布、键合、吸附等手段分布于色谱柱或者担体表面。分配色谱过程本质上是组分分子 在固定相和流动相之间不断达到溶解平衡的过程。 历史 1938年,阿切尔·约翰·波特·马丁和理查德·劳伦斯·米林顿·辛格准备利用氨基酸在水和有机溶剂中的溶解度差异分离不同种类的氨基酸,马丁早期曾经设计了逆流萃取系统以分离维生素,马丁和辛格准备用两种逆向流动的溶剂分离氨基酸,但是没有获得成功。后来他们将水吸附在固相的硅胶上,以氯仿冲洗,成功地分离了氨基酸,这就是现在常用的分配色谱。在获得成功之后,马丁和辛格的方法被广泛应用于各种有机物的分离。 分配系数 分配色谱的狭义分配系数表达式如下: K=Cs╱Cm=(Xs/Vs)╱(Xm/Vm) 式中Cs代表组分分子 在固定相液体中的溶解度,Cm代表组分分子

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玻璃层析柱

相关专题 层析柱的类型及作用 实验室中所用的玻璃层析柱 有两种形式:一是下部带有活塞的玻璃管,活塞的芯最好是聚四氟乙烯制作的,这样可以不涂真空油脂,以免污染产品。如果使用普通的玻璃活塞,则真空油脂要小心地涂薄涂匀。另一种是将玻璃管下端拉细,套上一段弹性良好的管子。这段管子必须是不能被淋洗剂溶解的,普通橡皮管一般不可充作此用,因为橡皮易被氯仿、苯、THF等溶剂溶胀,而聚乙烯管子对大多数溶剂是惰性的,所以常常使用。用一只螺旋夹控制流速,此外,薄膜塑料柱因使用方便、节省淋洗剂、减少蒸发量等优点,应用日趋广泛。薄膜塑料柱总是以扁平成卷保存的,两侧常有很深的折痕。使用前需将裁取的一段薄膜管一端扎紧,另一端套在一段玻璃管上并用棉线扎紧。将这段玻璃管穿过一个单孔塞。然后将薄膜管放进一根又粗又长,下端拉细了的玻璃管内,使塞子塞紧大玻璃管的口。用水泵自大玻璃管下端抽气,薄膜柱即因内部压强大于外部而自行展圆。待装入吸附剂后在其下部扎几个小孔即可使用。 层析柱 的尺寸根据被分离物的量来确定,其直径与高度之比则根据被分离混合物的分离难易而定,一般在1∶8到

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单克隆抗体(McAb)亲和层析柱纯化重组人α2a干扰素

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什么是固相萃取

相关专题 固相萃取(SPE)—用途广泛的样品前处理技术 固相萃取 (SPE) 一、概述 固相萃取 (Solid-Phase Extraction,简称SPE)是近年发展起来一种样品预处理技术,由液固萃取和液相色谱技术相结合发展而来,主要用于样品的分离、纯化和浓缩,与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率,更有效的将分析物与干扰组分分离,减少样品预处理过程,操作简单、省时、省力。广泛的应用在医药、食品、环境、商检、化工等领域。 二、SPE的原理与分离模式 固相萃取 是基于液-固相色谱理论,采用选择性吸附、选择性洗脱的方式对样品进行富集、分离、纯化,是一种包括液相和固相的物理萃取过程。SPE根据其相似相溶机理可分为四种:反相SPE、正相SPE、离子交换SPE、吸附SPE。 反相SPE中吸附剂(固定相)属于非极性或弱极性,如硅胶键合C18,C8, C4,C2,-苯基等。 正相SPE中吸附剂(固定相)属于极性键合相和极性吸附剂,如硅胶键合-NH2、-CN,-Diol(二醇基)、(A-,N-,B

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固相微萃取技术(SPME)及其应用

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固相微萃取装置(SPME)操作规程

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葡聚糖凝胶过滤法测定蛋白质分子量方法

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测定高分子分子量的8种方法

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NBS在苄位溴化的反应中的问题

相关专题 NBS溴化试剂与溴化反应 我最近的实验有一个是用NBS 在苄位溴化的反应。条件是:NBS 1.05eq. 四氯化碳溶剂,回流,TLC跟踪,引发剂是AIBN,加入量是NBS的1/10(质量)。做了几次发现几个问题,请大家帮帮: (1)TLC 上看不到新点,有可能是产物(苄位一溴取代)的点和原料跑在一起,这样的情况多吗?后来我打个质谱确定过了,的确是反应了。 (2) 并不是每次都能顺利引发反应,这是十分头痛的,我的体系直到最后都还是四氯化碳底下沉着一堆白色固体,哪怕整个溶液都已经变成暗红色了。理论上应该是反应产生的丁二酰亚胺浮在四氯化碳上面,从这个现象可以推断反应没有进行,由于TLC 看不出来,所以我又经质谱确证过,确实是没反应。 问题就来了,为什么有时能引发反应,有时却不能?这里面有什么不对的地方? AIBN不是引发剂吗?我不知道加了AIBN之后还需不需要光照来引发?难道是AIBN并没引发反应? 如何判断反应是否结束,反应时间,以及三氯甲烷是否可行(文献中大都用四氯化碳,苯等),加料比及顺序

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胰蛋白酶活性测定的方法与步骤

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毛细管电泳分离实验的特点及应用

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利用荧光分光光度法定量维生素B2的操作小技巧

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经典的Real-time PCR定量的四种方法

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