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【求助】ISGF3的检测

frank595 请问各位老师:JAK-STAT信号转导途径中的ISGF3可以使用Western Blot检测吗?如果可以如何检测?多谢!yhwangcams Activated Stat2 forms a heterodimer with Stat1 and translocates to the nucleus. There, it associates with the DNA-binding protein p48 and forms the transcriptional activator comple ...

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【求助】信号传导中钙离子测定

licycrystal :D 有两个问题请各位大虾帮忙一下啊:1, 我做的是药理实验想了解Pkc与细胞内钙离子浓度的关系,我知道现在很多人用的是钙敏感性显微荧光测定,就是加个fura什么的,这个具体步骤怎么做的呢,是不是要用到共聚焦啊?2,请问有人做过细胞膜钙离子通道表达的吗 ,比如western ,这个难做出吗?dai88 好像还有一种染料,主要利用与钙结合后,激发波长不一致引起的,好像需要特殊激发显微镜吧,我想测定整体动物的钙离 ...

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【求助】怎样从活体上去组织,然后检测基因多态性

chichao0000 小弟是个出做实验的新兵,问一个比较初级的问题:计划从活体上去组织,然后检测基因多态性,全部检测,不是针对某个基因,请问各位战友,怎么做呀,是用DNA测序吗?是不是得很贵呀?望各位战友解答!感谢!西门飘脸 基因多态性检测没必要用测序的啊不是很明白你说的是什么意思多态性检测,还全部检测,好矛盾啊suny0354 你是要寻找新突变,还是检测已知的突变,如果是发现新突变可以测序,如果是已知的,也不一定用测序cp ...

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【求助】抗体名称Ab-33是什么意思?

dongreyuan 有的抗体名称上面写着Ab-33,比如,β-catenin(Ab-33)antibody,请问,Ab-33是什么意思?bettyzyj 这个抗体是非磷酸化的抗体non-phospho-antibody ,33 代表的是基因位点dongreyuan 谢谢了yhwangcams bettyzyj wrote:这个抗体是非磷酸化的抗体non-phospho-antibody ,33 代表的是基因位点感觉不应该说“33 代表的是基因位点”,准 ...

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【求助】用放射性同位素标记法测PKG活性,有哪位老师给予大致的说说是怎么样的实验步骤,谢谢了

紫藤星 现在想通过放射性同位素标记法测PKG活性,可是文献关于这方面的不多,所以想请教做过这方面的老师能给些大致的指导和提示下?谢谢了yhwangcams 查到一个日本公司提供检测PKG活性的试剂盒。https://ruo.mbl.co.jp/gtf/1/1/CY-1161.pdf说明书有详细介绍。紫藤星 谢谢yhwangcams 老师的帮助了本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为 ...

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【求助】求助成功,谢谢yhwangcams

panglizi 请教一下,substrate trapping mutant是什么意思啊?yhwangcams substrate trapping mutant通常是指保留特异的底物结合能力而丢失催化底物能力的突变体。就是说STM可以结合底物但不能处理底物,可以用来发现如某些磷酸酶的底物。Substrate-trapping mutants (STMs) are phosphatases mutated to retain specific binding ac ...

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【求助】有没有哪位前辈用过cAMP的ELISA试剂盒?

cathy12303 有没有哪位前辈用过cAMP的ELISA试剂盒?dianaofyezi 我 有问题可以站内消息或者QQ52187644联系。白大褂2009 你好,我是新手,你用过的ELISA试剂在哪买的,哪个公司的比较好啊?还有,测定大鼠脑组织里的cAMP,放免法和ELISA法各有什么优缺点啊?谢谢回复!!songdianwei 我在 R&D公司买的,测细胞内的CAMP的含量,但是结果一直不理想。你可以给我发站内信,我们一起努力做好 ...

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【求助】如何用免疫沉淀法测定PI3K活性?

yys700714 请问如何用免疫沉淀法测PI3K活性呢?我查到相关文献,写得很清楚的,不过还是不太懂,不知需要准备什么试剂,需要什么仪器测定,TLC是什么啊,是不是需要荧光图像仪?很多疑问,请求做过的高手给予指点。多谢!!yhwangcams 建议可以使用Echelon的PI3-K ELISA试剂盒。http://www.echelon-inc.com/ccp1231-pi3-k-elisa-kit-k-1000.htm原理参见试剂盒 ...

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【求助】求含有CRE重组酶序列的载体

lwjssry 求含有CRE重组酶序列的载体,有如下质粒可交换,或积分交换表达载体:pcDNA3.1(+)pcDNA3.1/GSpcDNA4HisMax BpIRES2-EGFPpAAV-IRES-hrGFPpBudCE4.1pEGFP-C1pEGFP-N1pCMV-DsRed腺病毒载体pADeasy-1,pShuttle,包括菌种BJ5183报告基因载体PGL3-BasicPGL3-Promotorstratagene公司 ...

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【求助】文献上细胞给药剂量用10um是10um/ml还是10um/L啊?

haohuaiyong 大家好啊,我现在想用AG490处理细胞,干扰JAK-STAT3信号通路,查了相关文献,有的给药10Um,但是不知道(呵呵,我比较菜),是10um/ml还是10um/L,还请战友帮忙解答一下。付文献截图xdb86 人家的m是大写的M,M就是mol/L,10uM就是10×10-6mol/L。uM已经是一个浓度单位了,所以没有你说的:是10um/ml还是10um/L。haohuaiyong 谢谢版主啦,10×10-6m ...

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【求助】检测哪些指标可以将凋亡的两条途径区分开

月朗渔 我的试验是要先感染动物,再从动物体内取出待检测的细胞,测定细胞的凋亡。我现在做的有吉姆萨染色观察细胞形态、上流式检测早期和晚期细胞凋亡率。正准备做的有电镜观察细胞亚单位形态变化,caspase-9、caspase-3和细胞色素C释放的检测。因为我做的是线粒体途径的凋亡,所以选了这些指标,不知道是否合适?如果要排除死亡受体途径不知道还要检测哪些指标?还请各位高手指点一二。月朗渔 怎么没人回啊?还请做过凋亡检测的朋友 ...

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【求助】询问一些入门问题~~~

l20 1 要是我想做某一个组织的正常细胞/肿瘤细胞,我怎么查找/去哪里查找现在都有哪些细胞系,怎样可以买到这些细胞系...要是有个细胞系查阅库就好了...2 怎样知道各种实验动物的特点:比如我要种瘤,在什么小鼠上能长,要多就能长出来...也有实验动物特点一览表之类的么....亲们谁能回答一下~~~谢谢了!!!colindream5 第一个问题答案:多看看有关你所研究的肿瘤细胞的论文,看看他们的细胞出自哪里,有的论文上提得不是很清楚的,你可以 ...

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【求助】Neuregulin (NRG) 有几种类型?

bigqi 我正在做一个蛋白的研究,多篇文章提到它可以作用于NRG,有NRG 1,有NRG beta 1.我搞不清楚到底beta 1属于那种NRG。我查了综述,是将NRG分为1、2、3、4的,没有找到NRG beta,请问beta=2吗?还是beta 1=1 beta?感觉都不太像。当然也可能是看的太快,又是英文的综述,漏掉了作者的解释。NRG不是我要研究的内容,不想花更多时间了,请问能否有人可以帮我,我就想知道我的蛋白可以作用于几个NRG。bigqi ...

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【求助】western检测肿瘤细胞的 nf-kb p65表达时用的转膜条件是什么

yangcroom 请问大家,用western检测肿瘤细胞的 nf-kb p65表达时用的转膜条件是什么?多少V多少分钟?一抗二抗孵多久?我用的是中杉分装的nf-kb p65的抗体。还要注意些什么?yangcroom 顶一下!shichong 100v2h,一抗4°过夜,二抗1hyangcroom 谢谢 shichong ,我准备提总蛋白做的NF-KB,这样能做出来吗?同学转膜用15V30min做MMP-9也做出来了的,请问下转膜的条件和抗体有关吗? ...

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【求助】急求文献一篇

xk010882521 Interleukin 15: a proinflammatory role in rheumatoid arthritis synovitis!希望有好心人能帮忙!谢谢!happycoco 我下载到了这篇文章,给我你的联系方式xk010882521 哦!邮箱:kun_ling@126.com 谢谢哈xk010882521 已经收到!非常感谢!本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你,都可以成为师兄的 ...

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【求助】IL-1等炎性因子介导的JAK/STAT通路作用的靶基因有IL-10吗?

xueer1108 各位老师好:想请教一下:IL-1、IL-6等这些炎性因子介导的JAK/STAT通路中,在核内stat作用的靶基因有哪些?有IL-10吗?十分谢谢!nickandjn 有Bcl-XL,Cyclin D1,p21WAF1/CIP1,c-Myc等,不过不知道有没有IL-10.zfyyzz00 IL-10是STAT的靶基因。文献见Novakova Z,ect.Cytokine expression and signaling in drug-ind ...

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【求助】转染入目的基因后细胞有成团成长倾向。

river33617 大家好,学生我最近做悬浮细胞的转染。转染入对照质粒的细胞生长正常,但表达目的基因的细胞渐渐成团生长。初步考虑是该目的基因激活了黏附因子的表达,请问高手们这些黏附因子有哪些啊? 如果能提供一两篇综述就更感激了。谢谢。river33617 顶一个,继续求助,谢谢了。jing3324 做个芯片去GO分析,这样还能有很多意外收获。lwjssry 这个课题非常有意思啊river33617 lwjssry wrote:这个课题非 ...

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【求助】继续求助免疫荧光检测NF-kB移位

g_zxlin 最近做NF-kB免疫荧光,做出来对照老是核区也着色,没有明显的空核,不知是怎么回事,请各位大虾指导指导:第一二张图是正常对照细胞:g_zxlin 这一张也是对照:g_zxlin 这一张是LPS刺激后的巨噬细胞:g_zxlin LPS刺激:zfyyzz00 由于NF-kb采用免疫荧光检测可能会出现非特异性结合,一般转核观察NF-kb采用荧光效果欠佳,建议是否考虑采用激光共聚焦检测,其效果要比前者好多了。供参考。本文由丁香园 ...

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【求助】ERK & NOTCH的问题。谢谢各位!

zhanghaopeng 有几个问题想在此请教。1.在做免疫组化和Western时,观察ERK分子的变化是不是要先测定总ERK,而后在分别测定pERK1/2呢?可否推荐一款可以做组化和Western的一抗(我做的是小鼠)。2.关于Notch通路的研究如果受到条件、经费的限制是否可以单纯观测NICD的表达,以证明Notch的活化?3.看到Notch通路的阻断剂有很多,例如DAPT、LY411575等等,可否推荐一下哪款 ...

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【求助】磷酸化STAT3检测

haohuaiyong 各位战友,最近我在做磷酸化STAT3的检测,用cell signaling公司的磷酸化检测抗体与总STAT3抗体做WB,实验组(bFGF+EGF)与阳性对照的磷酸化水平是有增加的,但总STAT3在实验组是减少的而在对照组是强表达的,我看别人的文献都是将总STAT3作为阳性内参一样,应该是不变化的啊,为什么我做了好多次都是不均一的啊?实在是搞不明白,请做过这方面的战友帮忙!谢谢!dzhzh 你的灌注胶 ...

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