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【求助】急急急 请教战友单核苷酸多态性的意思

MENGSG 请教各位战友单核苷酸多态性(SNP)的含义。如CTLA +49(A/G),是指一个基因位点碱基A换成了G;那么CTLA +49基因型 AA,是什么意思,是一个基因位点还是两个,还是指A没有换成G,仍然是A?其他如AG,GG是什么意思?很困惑!song333 SNP: "S" means single, one nucleotide, not two.AA: both allele is AAG: one allele is A, another allele is GGG: both allele is GMENGSG ...

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【求助】AMPK激活时间

daydayupmj 最近做了加入刺激因素后细胞AMPK的激活情况,我选择了0,30min ,60min,120min,240min提取蛋白,结果发现在60min 时总AMPK和P-AMPK表达都很弱,有几点不清楚,信号表达会在某个时间点突然降低,然后再回升吗,非磷酸化的蛋白也会随时间变化而变化吗,再有活化情况该如何比较daydayupmj 还有细胞在加入处理因素前需要同步化处理吗07yhguan daydayupmj wrote: ...

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【求助】茎环结构miRNA逆转录,是混合逆转录好,还是单管逆转录好?

twinkling0 请教一下,我是新手,刚开始做miRNA荧光定量。内参是5sRNA,3个待测miRNA。逆转录用的茎环引物。请教,逆转录的时候,是将4种逆转录引物混合在一起,还是单管逆转录?混合逆转录,之前做预实验的时候,与单管相比差了2-3个CT。但是单管的话,会不会因为每管的逆转录效率不同,荧光PCR时,待测 miRNA和内参失去了可比性?另外,如果可以用混合逆转录的话,有没有什么逆转录酶或者盒子推荐?万分感谢!超马 单管 ...

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【求助】组蛋白乙酰化技术求助

perpetuity_love 求助关于组蛋白乙酰化的技术,用于RNAa,最好能有相关文献支持,做一个课题需要。54wws 你好!我近期也在做组蛋白乙酰化,买的是Epigentek公司的Epi Quik Tissue Acetyl-Histone H3 ChIP Kit(cat.#P-2012-48)。已经做了两个多月了,用了两个试剂盒,都没有结果,包括input。我用试剂盒提取出来的DNA产物跑胶、进行PCR,都没有结果(引物和体系用其他方法提取的 ...

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【讨论】求高手指点如何把抗性基因从载体上克隆下来~

haina_w 想把卡那基因从pET8b上克隆下来用作其他基因的筛选标记,但是有点儿不明白怎么克隆,引物该从哪个地方开始设计~是从pET8b的图谱上指示的那个kan基因的起始开始吗,那启动子是包含在里面的吗??doctoryubing 如果新载体上有启动子,应该不需要包含启动子,只需要在kan基因的两端设计引物即可j19s87x 楼上说的没错,但是新载体上要是能启动卡那的启动子!本文由丁香园论坛提供,想了解更多有用的、有 ...

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【求助】有关wnt信号通路

谁似我醉扬州 我做的是与wnt信号通路有关的,想了解某种药物诱导成骨是否和wnt信号通路有关,如果加药后β-catenin,LEF、CyclinD增加可否说明wnt信号通路被激活?β-catenin用的是western blot方法测定核内的,LEF、CyclinD用的是PCR的方法,这样设计实验合理吗?各位高手请帮帮忙,谢谢!谁似我醉扬州 怎么没人回答呢?丁香园不是很多高手吗?自己顶!ghy0601 现在所谓的核蛋白提取试剂盒 ...

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【求助】哪里能买到含有人干扰素alpha-2b cDNA序列的质粒pBV889

baiguo861029 各位前辈好 本人是个新手,听很多师兄师姐说丁香园很好,这儿的人都很热情帮助他人。我现在研究生在读,因为课题需要,急需购买这个质粒pBV889,试了好多方法都没找到。这个质粒含有人干扰素alpha-2b编码序列,即cDNA序列。非常希望知道的前辈给予我帮助,非常感谢!!woxingwosu 用google搜索了一下,发现很多文章都有,国内发表的也很多。其实你或者你老板可以写信去要一下就方便多了,还不用 ...

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【求助】我的人全血D提取DNA后跑的凝胶电泳图是怎么啦?

花樱雨 :~)我用进口试剂盒提取人新鲜全血的DNA 放置-20℃保存了2天后 室温下解冻 进行琼脂糖凝胶电泳,结果做了几次都出下一下的情况:1.maker总是出现类似月牙的牙齿形状 两边比较高 中间是空的 不知道是怎么回事?请高手指点我一下 不胜感激2.maker 最高的条带是2000bp 人DNA跑胶的结果总是比maker最高条带高一点的 大家有没有正确的人类DNA跑胶的照片 能不能发给小妹看看 我真是急死了以下附带我的电泳图zjubell 你的DNA提的没 ...

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【求助】PD98059如何稀释

hexi1985 各位战友,我想请教下PD98059使用问题。本人准备做大鼠动物实验,使用PD98059干预,但是参照文献都说1mg/kg溶解于DMSO中,分装保存,用时再用PBS稀释。可是文献里又提到DMSO浓度不超过0.1%容积比率。如果我按照文献以1mgPD溶解于1ml纯DMSO中,再稀释稀释1000倍来达到DMSO的0.1%浓度,就根本达不到我想要的50微mol/l的终浓度了,而且总的液体量达到1升,每只大鼠我 ...

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【求助】关于microRNA转染的MTT实验

wuxinkaoyan 大家好: 我有几个关于实验的问题向您请教下!希望您给予指导!谢谢!1、简单介绍下我现在要做的实验,我们用的是micrRNA,序列如下:microRNA-15-a: 5'-UAGCAGCACAUAAUGGUUUGUG-3'microRNA-16-1: 5'-UAGCAGCACGUAAAUAUUGGCG-3’按照文献上说的,为了增强稳定性,我们合成了其互补链,做转染的时候用的是双链,转染到细胞质后,其会自动降解成单链,然 ...

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【求助】所有的mRNA都在细胞浆里吗?

refrigritor2005 弱弱地问:所有的mRNA都在细胞浆里吗?即使其翻译(?)的蛋白质位于细胞核内?woxingwosu mRNA本身应该是在细胞核中合成的(少量在线粒体中),成熟后才转运到细胞浆(cytoplasm)里面去,所以说不可能所有的mRNA都在细胞浆里面。而且真核的mRNA必须通过核孔转运到细胞浆并且在细胞浆才能进行翻译。翻译的蛋白质能在细胞核中有一部分是由于这个蛋白质含有核定位序列(NLS, nucl ...

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【讨论】抗体和那些不能说的"秘密"-抗体选择的PASS标准 (请加精)

znsdavid 抗体,是我们非常熟悉的一种生物试剂, 但我们对抗体的鉴定,选择又了解多少呢某著名抗体公司的科学家在行业内提出全新的抗体选择标准“PASS”。通过客观的参数指标和专家的观点,科研人员只需要仔细的阅读抗体的说明书,再结合 “PASS”的抗体选择标准,就可以在一定程度上自己鉴定选择抗体的品质。“PASS”抗体选择标准是指科研人员在选择抗体的时候,应留意抗体说明书中抗体纯化工艺(Purification),抗原信息( ...

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【求助】如何由已知蛋白查询其调控的基因?

霍一刀hxs 如何由已知蛋白查询其调控的基因?已知一个蛋白质,通过哪些方法可以查询其调控的基因?谢谢。woxingwosu 比较直接的是察看看这个蛋白是否含有与潜在的DNA结合(特别是promoter)的区域,然后做一下real time或reporter assay等验证一下,有效果就可以通过点突变等进一步验证。如果要大范围的筛选受其调控的基因,需要microarray或者2D吧,我想。zjubell 呵呵,这个是最典型的免疫 ...

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【求助】MAPK抑制剂如何使用

zhaozhuozhao 各位老师,MAPK抑制剂如何使用,是在刺激因子之前预孵育一段时间后弃去再加刺激or在刺激因子之前预孵育一段时间不弃去直接加刺激orS直接与刺激共孵育?感谢您的解答,谢谢!kern6549 同时加就可以。zhaozhuozhao 请问一下哪种效果更好呢?因为我的刺激要持续24h,我怕先用抑制剂孵育完后弃去再加刺激24h,抑制剂的作用早就没了,您说呢?kern6549 不是说了同时加吗?zhaozhuo ...

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【讨论】如何确定删选miRNA对靶基因的影响

taijiwu 给一个靶基因,经证实已发现有一种及其以上的miRNA可以调控此靶基因,如何根据这几种miRNA及其靶基因来删选新的miRNA!以减少假阳性率!纠结中,还请高人帮忙!woxingwosu 如果不多的话,就一个个试?taijiwu 二楼的方法不好,一个一个试得花多长时间啊,等找到相关的miRNAb别人可能文章都出几篇了,况且还浪费那么多的资金!不可取LoftyMan LZ有毛病?二楼的方法是截至现在唯一实用的方法, ...

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【求助】我扩增的质粒泡椒怎么是这样?

陆军鱼 小弟通过转化感受态扩增pGL-3 Basic、control,pRL-SV40三种购买来的质粒,小提后电泳检验一下扩增的成果,结果让我不太理解,为什么质粒大条带后面还有“杂带”呢?12道,34道,56道都是从一块板上挑的两个单克隆,两个道的质粒在相应的位置都有杂带感受态经抗生素板检验没有污染不知道这样的杂带怎么解释?woxingwosu 这个可能是正常的吧(除了3和4有点怪怪的以外,建议再重新跑胶或者重新提质粒看看) ...

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【求助】如何设计整个基因的克隆引物?

gaoxiaomeng :^)woxingwosu 基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止?如果是这样,那就没有多少选择,直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNNNN (注意要互补的~~)zjubell woxingwosu wrote:基因是不是可以简单理解为从ATG到终止密码子为止?如果是这样,那就没有多少选择,直接就是Forward: ATGNNNNNNReverse: STOP CODON NNN ...

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【求助】谁能帮我解释一下这种酵母基因型的含义啊?

tianjiaoya PJ694α (MATa trp1-901 leu2-3,112, ura3-52, his3-200, gal4Δ, gal80Δ, LYS2 ∷GAL1-HIS3, GAL2-ADE2, met2∷GAL7-lacZ).gingivalis Check here:http://www.yeastgenome.org/alleletable.shtml%22dnazyme 对,分段查看就懂了,例如,MATa是结合型, Δ意味着缺失突变。本文由丁香园论坛提供,想了解更多 ...

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【求助】JNK抑制剂SP600125

whiteswan 本人按文章要求,将1mg SP600125溶于125ul DMSO成透明溶液,然后将上述125ul溶液添加于1375ul PBS,有絮状沉淀析出,请高手帮忙指点解决该沉淀析出问题,谢谢!whiteswan 似乎应该xiemengxipan 请问楼主的实验做完了没,能否传授点经验给我呀,我也在做这个实验,方便的话留个QQ交流下。不安分得土壤 xiemengxipan wrote:请问楼主的实验做完了没,能否传授点经验给我呀 ...

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【求助】酵母的GLA4转录因子能调控质粒上蛋白的表达吗?

tianjiaoya 我想构建一个真核表达质粒,用这个真核表达质粒来表达绿色荧光蛋白,但是我想让绿色荧光蛋白的表达受酵母菌GLA4转录因子的调控,也就是说有GLA4存在,这个质粒就表达绿色荧光蛋白,没有GLA4存在,就不表达绿色荧光蛋白。当然需要对真核表达质粒上的启动子做相应的调整,但是我现在的问题是,转录因子GLA4能不能对质粒上有相应调控元件的表达盒,进行调控?据说GLA4上有核定位元件,要是将这个核定位序列 ...

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