实验前应明确的问题1. 选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96 孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有 105 个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行 MTT 试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证 MTT 结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2. 药物浓度的设定。一定要多看文献，参考别人的结果再定个比较大的范围先初筛。根据自己初筛的结果缩小浓度和时间范围再细筛。切记！否则，可能你用的时间和浓度根本不是药物的有效浓度和时间。3. 时间点的设定。在不同时间点的测定 OD 值，输入 excel 表，最后得到不同时间点的抑制率变化情况，画出变化的曲线，曲线什么时候变得平坦了（到了平台期）那个时间点应该就是最好的时间点（因为这个时候的细胞增殖抑制表现的最明显）。4. 培养时间。200ul 的培养液对于 10 的 4～5 次方的增殖期细胞来说，很难维持 68 h，如果营养不够的话，细胞会由增殖期渐渐趋向 G0 期而趋于静止，影

① Lancet 子刊：警惕！体内多余的脂肪或会诱发心血管疾病和 2 型糖尿病发生！体内脂肪的积累通常发生于重要器官周围，其也被认为是内脏或腹腔内脂肪，这些脂肪的积累会增加肝脏、心脏、胰腺及骨骼肌中脂肪的储存，过量的内脏和异位脂肪反而会影响机体的代谢，从而诱发心血管疾病和 2 型糖尿病，测定这些脂肪的含量或能改善上述两种疾病的预测、疗法和预防策略。日前，一项刊登在国际杂志 The Lancet Diabetes & Endocrinology 上的研究报告中，来自英国萨里大学的科学家们通过研究表示，体内多余的脂肪或是心血管疾病和 2 型糖尿病发生的关键驱动因素。文章中，研究人员回顾了内脏脂肪和异位脂肪在疾病病理生理学中的作用，并提出了在实践中测定这些类型脂肪的建议。在临床实践中，研究人员往往并未对患者内脏肥胖进行很好地评估，因为大多数临床医生都依赖于 BMI 来评估患者超重/肥胖的风险，基于本文研究结果，研究人员希望后期科学家们应进行更多深入的研究来阐明内脏肥胖引发多种疾病风险增加的分子机制和原因。原文检索： Visceral and ectopic fat, atherosc

大家有没有想过，我们应该在什么时候开始写 paper？可能几乎所有人都会回答：「当然是做完实验，收集足够 data 了，才开始写 paper 呀。」很多研究生甚至从没想过这个问题，因为他们的任务就只是「做实验收集 data」，所以他的回答可能是 「导师让我写 paper 的时候，或者我要毕业的时候，就是应该写 paper 的时候。」其实……论文写作的开始实际上远远发生在你实际写 manuscript 之前。这句话怎么理解呢？Paper 并不仅是用于「记录」一个已完结的研究，也是随着一个研究的进行而不断演变的计划构造。理解到这层涵义，会对你的研究很有帮助，因为你可以在组织、计划、和开展你的研究工作中，不断地更新你的 paper，从而达到「Better Papers Faster」的效果。今天告诉大家两件在写 paper 之前需要做好的事。越早开始做这两点，你就越早地开启了你的论文写作，你不仅花在写 paper 上的时间会大大减少，你课题开展的效率也有可能大大加快。1. 思考你这个研究的发表价值在研究的刚开始阶段，你就应该问自己下面这些问题：我做的东西新颖和有趣吗？我的研究中有没有富有挑战

身边的同学和同事纷纷投入到科研的怀抱，而你却还在彷徨。大学花去很多时间学习基础医学 、临床医学和临床实践，并没有系统地学习过科研思维和方法，所以科研迟迟未能上手。很多人习惯于抱怨说，学校没有教，我就不会做。其实，更多知识和经验是在学校之外学的。最近听到一个故事：一个离开学校在临床工作了好几年的医生，除了大学时候的实验课，几乎没有接触过科研和实验。他利用自己业余时间在丁香公开课自学，按照临床科研大牛的方法和套路，独立完成了科研课题设计，还在不到一年的时间内发表了核心期刊论文。这样故事，在临床实习时候，我听到了太多太多。接触了很多临床医生，做了很多调查，我们深刻明白临床医生和研究生对医学科研、临床科研的需求有别于专门做基础科研的研究生。其实，学习科研和做科研也是有规律可循的。那么，临床医生如何做科研最有效呢？有效利用碎片时间临床工作繁忙，学习和科研的时间少之又少，谁能最有效利用碎片时间谁就是赢家。放下临床工作，花一大段时间回到学校上课几乎很难实现。几乎没有固定周末，更别说利用周末参加线下训练营、辅导班。所以，线上课程几乎是唯一的选择，在自己空余的零碎时间，掏出手机，随时随地观看课程，学习。

周一，柚子酱的科研资讯来报道啦～ ① Science：肠道中少了这种细菌，你就会变胖肥胖，也许与遗传有关，也许与饮食有关，其实还与肠道菌有关。犹他大学医学院的研究人员近日在肠道中发现了一类特定的细菌，能够防止小鼠变得肥胖。这些微生物也许同样能控制人类的体重。这项成果于 7 月 26 日发表在《Science》杂志上。梭菌（Clostridia）便是这类对减肥有奇效的细菌。新研究表明，健康的小鼠有足够的梭菌，但免疫系统受损的小鼠随着年龄的增长会失去这种微生物。即使投喂健康饮食，小鼠也会不可避免地变得肥胖。将这类微生物重新引入动物体内，可让它们保持苗条。犹他大学医学院的病理学系副教授 June Round 博士表示：「既然我们找到了这种具有减肥效果的细菌，那么我们有望了解生物体在做什么，以及它们是否具有治疗价值。」原文检索：T cell–mediated regulation of the microbiota protects against obesity ② 靶向 CCR5，科学家揭示艾滋病毒感染新机制艾滋病毒仍然是公共卫生的主要负担。仅在美国，就有一百多万人感染了艾滋病毒。每年报告

吹空调，看资讯，做实验！ ① 第一个完全人造的蛋白质开关，在细胞里活了！科学家们发明了第一个完全人造的蛋白质开关，它可在活细胞内工作，从而改变甚至征用细胞内复杂的电路。该开关被称为「LOCKR」。 7 月 24 日发表在 Nature 杂志上的相关论文描述了 LOCKR 的设计，并演示了该技术的几种实际应用。这项工作是由华盛顿大学（UW）蛋白质设计医学研究所的 David Baker 和旧金山分校的 Hana El Samad 率领的生物工程团队完成的。科学家们表明，LOCKR 可被「编程」来改变基因表达，重新定向细胞运输，降解特定的蛋白质，并控制蛋白质结合的相互作用。研究人员还利用 LOCKR 构建了新的生物电路，其工作原理类似于自主传感器。这些电路检测来自细胞内部或外部环境的信号，并通过改变细胞作出反应。这类似于恒温器感应环境温度的方式，一旦达到所需的温度，就会引导加热或冷却系统自动关闭。原文检索：De novo design of bioactive protein switches ② Science 子刊封面 「致命脂肪细胞」「黑色素瘤『醒来』后会致命，癌细胞会转移到表皮下的

周二，继续看看柚子酱的科研资讯吧～ ① 韩春雨、高峰发表新论文，报道新型活细胞 RNA 成像工具RNA 功能繁多，近年来备受关注。可视化活细胞中的分离 RNA 可以提示它的基本功能。目前主要有两种活细胞 RNA 成像系统：MS2 系统和 Cas13a 系统。 韩春雨团队在 BioRxiv 上发表的新文章，报道了一种基于 CasE 的新型活细胞 RNA 追踪成像工具。韩春雨团队将 split Venus 荧光蛋白连接到 dCasE（即 ΔHis20）的 N 和 C 端，组合成一个实时活细胞 RNA 追踪工具 ——VN-dCasE-VC，该工具仅在目标 RNA 存在时才发出荧光，可提高信噪比。关于韩春雨团队的新发现，大多数人持观望态度。魏茨曼科学研究学院致力于蛋白质和 mRNA 在真核细胞中定位研究的 Gal Haimovich 说：「（韩的这项发现）值得检验，尽管他没能演示单分子。」原文检索：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE ② 军事医学科学院

炎热的夏天，看柚子酱的科研资讯清凉一夏哦~① 美国首次在人体内部使用 CRISPR美国公司第一次招募患者测试 「CRISPR」 体内基因编辑技术，以治愈遗传性失明。此类患者的眼睛是正常的，但缺少将光转化为信号的基因。该工作不同于去年中国贺建奎所做的有争议的研究，新工作的目标是改变不会被任何后代遗传的成人 DNA。他们在定点部位切割或 「编辑」 DNA，向患者提供他们所缺少的健康基因，以图一次治疗，永久解决致病 DNA。CRISPR 之所以吸引全球的科学家是因为它的操作非常简单，但其风险还完全不清楚。研究人员认为，它对目前还没有很好治疗方法的基因缺陷疾病具有潜力。原文检索：First CRISPR study inside the body to start in U.S. ② Nature Medicine：肠道细菌与多囊卵巢综合征有关！多囊卵巢综合征（Polycystic Ovary Syndrome, PCOS）是一种临床表现高度异质性的内分泌代谢紊乱症候群，是育龄妇女无排卵性不孕最主要的原因，以高雄激素、排卵异常和卵巢多囊样改变为特征，常伴发胰岛素抵抗。其发病机制仍不清楚，缺乏病

据统计，在全球每年提交的一万多篇论文中，60% 以上的命运是被直接拒稿，最后能有机会发表的只有一千多篇。虽然做好了被拒的心理准备，但拒稿造成的打击还是让作者手足无措。要知道稿件被拒不一定代表文章的质量低，而是由多方面的因素造成的。遭遇拒稿后如何从失落中快速恢复，将自己的文章起死回生？问一下自己这五个问题，也许可以寻找到合适的应对方案。问题一：文章在科学层面是否存在缺陷？这是一个硬伤，意味着文章要做较大幅度的修改甚至要补做一些实验。研究设计受到质疑时：笔者建议大家在修改文章时着重阐述本研究设计的优势和理由，引用参考文献指出类似设计在已发表文章中应用。当结论说服力不够时：要重新补充文章结果和讨论部分。观点的强烈程度要适当，否则会造成结论过于绝对的印象。检查文章的支撑文献，确保做到论据充足。讨论部分的内容要与文章的研究目标一致，建议将讨论部分与引言部分放在一起比对修改。研究目标不明确时：笔者认为除了在引言部分将目标陈述清楚之外，相对应的研究方法和讨论部分都要做出调整，确保研究目标与实验设计的紧密联系以及讨论部分的内容与文章研究目标的一致性。问题二：文章内容与所投期刊是否不兼容？不同的期刊专注

天再热，柚子酱的科研资讯也会准时报到滴~① Science：重磅！三维打印人类心脏不再是遥远的梦在一项新的研究中，来自美国卡内基梅隆大学的研究人员详细介绍了一种新技术，它允许任何人利用人体中一种称为胶原蛋白的主要结构蛋白对组织支架进行三维生物打印（3 -D bioprinting）。这种首创的方法使得组织工程领域更接近于能够三维打印全尺寸的成人心脏。这种称为悬浮水凝胶自由可逆嵌入（Freeform Reversible Embedding of Suspended Hydrogels, FRESH）的技术允许这些研究人员克服与现有三维生物打印方法相关的许多挑战，并使用柔软的生物材料实现前所未有的分辨率和保真度。未来，FRESH 在再生医学的许多方面都有应用，从伤口修复到器官生物工程等。原文检索：3D bioprinting of collagen to rebuild components of the human heart ② JAMA Network Open：警惕！前列腺癌激素疗法或会增加患者患阿尔兹海默病和痴呆症的风险近日，一项刊登在国际杂志 JAMA Network Ope

在科研路上遇到良师真的是非常幸运的一件事情，就拿我自己来说，如果不是遇到两位开明慈爱的导师，我现在可能在天桥下给路人贴手机膜呢。托尔斯泰说：幸福的人生总是相似，不幸的人生各有不同。想当年，这句话戳中多少人的泪点。可是从大学到博士这一路摸爬滚打过来，却发现：不好的导师总是相似，好的导师却各有不同。有导师「大众点评网」之称的导师评价网给许多学弟学妹们提供了很多可靠信息，但浏览之后，你会发现，说导师的不好，无外乎是：不舍得花钱，不信任学生，延期毕业等等。那么舍得花钱，完全信任学生，按时毕业就一定是个好导师吗？前段时间有幸听到一位国际友人的讲座，其间关于对一个好导师的思考或许能给我们一些启发。一般来讲，导师分为四种类型：教父型，慈母型，表兄型，大哥型。教父型的导师优点在于强而有力，有资源，人脉广，能够提供你需要的一切，给你清晰明确的方向。如果你能遇上这样的导师，优势是显而易见的，能够快速获得成功，为未来的发展打下坚实的基础。当然，不足也是有的，比如必须迅速回应导师的要求，而且导师的想法永远是第一位的，这种情况下自我的独立性可能慢慢就模糊了，失去了冒险的勇气和动力，可能不利于你的长远发展。慈母型

7.1 Science 颠覆「共识」的新发现！突变未必促进癌症生长7.2 PNAS：让我们来听听细胞之间的对话7.3 Cell 子刊从不同的角度看 CRISPR-Cas9：让「剪刀」卡住7.4《Nature》6 月 7 月最受关注的五篇论文7.5 Cell：第一次在单细胞水平上控制大脑的行为7.8 连接组学的里程碑 —— 第一张完整的动物神经系统接线图7.9 Science 杂志最受关注的五篇文章（7 月）7.10 完全颠覆教科书定义的施万细胞7.11 科学家首次捕捉到 Cas9 酶切割 DNA 的清晰图像7.12 一篇 Nature 文章和一块七毛五的显微镜7.15 干细胞也会「近墨者黑」？7.16 Cell 杂志最受关注的五篇文章（7 月）7.17 肥胖有救？肝脏中鉴定到新型「肥胖因子」7.18 近期阿尔兹海默病重要研究成果的解读整合！7.19 又来反转？Nature 子刊研究证实没有长寿基因更健康！7.22 打破教科书！Science 发文揭示细胞核中核仁的新功能！7.23 胆固醇到底是好是坏？这些重磅研究值得一看！7.24 争议不断！每天喝咖啡到底会不会增加癌症风险？7.25

七夕，柚子酱祝每位科研汪们实验大顺，多拿数据，多发 paper！有对象的甜甜蜜蜜，木有对象的找到只属于你的学霸对象～① 食物可以改变基因？武大学者最新研究发现动物食性转变的指示基因食物真的可以改变基因吗？对这个问题不支持的人会回一句：吃猪肉会不会变成猪？答案当然是不可能，但是食物可以改变基因，回答却是可能的，答案就藏在漫漫的进化长河中。有一种假说认为，海藻糖酶是一种二糖酶，可以特异性地降解食物成分中的海藻糖。昆虫体内含有较多的海藻糖，而脊椎动物和植物的组织基本不含或者含有很少的海藻糖。因此，海藻糖酶对于食虫哺乳动物非常重要，不可或缺；对于其它食性的哺乳动物，可能不太重要。为了检验这个假说，来自武汉大学生科院的研究人员首次发现，海藻糖酶基因与哺乳动物食性分化密不可分，能预测食性进化历史。因此，海藻糖酶基因可以作为哺乳动物食性转变的指示基因，对于动物食性的进化及其生态学意义具有重要价值。原文检索：Trehalase gene as a molecular signature of dietary diversification in mammals ② miR- 153 促进成年海马神经发

选题是科研工作的第一步，也是同学们完成毕业论文的第一步。好的选题往往是成功的一半，那么我们应该如何选题？去哪找选题灵感呢？小编认为，医学选题灵感来源主要有两个：文献和临床。从文献中选题相信大家从刚刚接触科研开始，就在导师的要求下大量阅读文献，精读好文章，这对新手而言，确实有些费劲。但是只要坚持下来，量变就会发展为质变，一开始是「看的时候啥都懂，合上就忘了讲啥」，时间长了就会「一点之见即成文」。读了那么多文献，如何让文献助自己一臂之力呢？今天，我们就来看看如何从文献中找选题，让文献成为科研路上的垫脚石。小编整理了几种方法，由易到难，一一为大家讲解。1. 照搬已发表文献这种方法有点 low，但不得不说很实用，很多低分杂志中的文章都是采用这种套路。举个例子：「某 RNA 通过抑制某蛋白磷酸化促进某肿瘤的转移」，如果这是一篇 5 分的文章，那么换一种 RNA，就是一篇新的文章。要知道 RNA 可是有很多种的！当然你要确实能做出表型，即可完全照猫画虎，思路都不用你想。这是最简单的选题方法，适用于时间紧迫、老板放养和懒癌患者。2. 参考文献思路，在自己的研究领域尝试这个方法有点抽象，还是举例上面的

① Cell 子刊：线粒体如何为癌细胞生长发育保驾护航？肿瘤细胞消耗异常高数量的葡萄糖来保证它们的快速生长。为了将这一营养物质转换为能量，相比健康细胞它们较少利用线粒体——这一胞质细胞器通过细胞呼吸作用在能量的生成和储存中发挥至关重要的作用。当前的一种治疗方法就是迫使癌细胞去利用它们的线粒体。日内瓦大学科学学院细胞生物学系教授 Jean-Claude Martinou 说：「为了能够发挥功能，这些细胞器借助于我们在 2012 年发现的一种载体 MPC 来输入丙酮酸『燃料』。」为了能够发挥功能，细胞线粒体会利用名为线粒体丙酮酸载体（Mitochondrial pyruvate carrier, MPC）的蛋白来输入「燃料」。为了确定 MPC 在恶性细胞中是否仍然起作用，Martinou 领导的一个研究小组开发出了一种生物传感器来测量它的实时活性。生物学家们观察发现相比于健康细胞，MPC 在肿瘤细胞系中显示极低的活性。随后他们用一种新型的抗肿瘤产品来处理癌细胞，恢复了 MPC 的正常活性。原文检索：Monitoring Mitochondrial Pyruvate Carrier Acti

投文章是一件「被拒才是常态」的事情。对于 Cell, Nature，和 Science 这样的 Journal，每收到 100 篇 manuscript，其中只有 3 篇能通过 Editor 这关，进入接下来的 peer review 的阶段。就算是筛选条件稍微宽松一点的（high-impact）journal， 文章被接受的机率也很少超过 30%。换句话说，你花了好几年时间做实验收集 data，又花了一两年的时间写写改改，好不容易把 paper 投出去，结果是大于 70% 的概率被那些 high-impact journal 直接拒掉。所以几乎每个投过文章的人都曾面对的一个灵魂拷问，「为什么我的文章会被拒？」前几天，《Cell》副主编 Robert Kruger 博士应邀访问 NIBS 与我们交流了一些文章发表方面的意见。 在与他午餐的时候，我就问了他这个问题：「What are the top reasons for rejecting a paper?"在回答这个问题之前，我们先看看当一个 Editor 收到一篇 manuscript 的时候，他脑子里在想些什么：1、这个发现有趣

① 中科院，复旦大学 Molecular Cell 揭示 RNA 甲基化调控母源 mRNA 稳定性机制斑马鱼母源-合子转换 (maternal-to-zygotic transition, MZT) 过程伴随着母源 RNA 和蛋白质的降解以及合子基因组的激活 (maternal-to-zygotic transition, ZGA)。已有研究表明多种关键因素通过母源和合子途径促进母源 mRNA 降解，其中包括合子转录的 microRNA miR- 430，次优密码子的使用，N6 -甲基腺苷（m6A），尿苷化等，但母源 mRNA 的稳定性维持机制尚不清楚。中国科学院北京基因组研究所杨运桂研究组、中国科学院动物研究所刘峰研究组和复旦大学麻锦彪研究组合作发现，m5C 通过新结合蛋白 Ybx1 调控母源 mRNA 的稳定性，进而调控斑马鱼母源-合子转换及早期胚胎发育进程。原文检索：RNA 5 -methylcytosine facilitates maternal-to-zygotic transition through preventing maternal mRNA decay ② i

临床医学广为大家所知的类型有五年制、七年制、八年制，或者五年制毕业了，然后考研读博等等。那么什么是 4+4 呢？在多年以前的今天，我还是一所国内排名第三的 985 院校大四毕业生，注意，大四毕业哦。自然，我是非医学专业的学生，读生物类专业，拿理学学位。比较幸运的是，在大四的时候获得了保研名额，不用在考研大军的洪流中争夺一袭座位，也是在那个时候我知道了 4+4。这是一些顶尖 985 学校开展的一个硕博连读培养项目，主要针对 211、985 获得保研名额的非医学专业学生。经面试入学后，主要进行为期 4 年的临床医学培养，前两年主要学习基础医学和临床医学知识，后两年主要进入科室轮转，最后完成毕业论文，获得临床医学博士学位和博士研究生毕业证书，可以考执业医师资格证。各位宝宝们不用怕，可以当医生，可以拿手术刀。解决了学位问题以及执业医师资格证问题后，肯定不少学生会疑惑，为什么要开展这个项目，它有什么竞争力吗？项目的优势1. 在医学领域的探索上，你拥有更广阔的视野本科四年非医学教育，会给你带来不少本科专业的思维方式，那是五年制、七年制甚至八年制医学都不会带给你的瑰宝。比如本科数学的同学，以后势必做

自从入了生物的坑，似乎看待事物的角度也变得与众不同了……前不久，实验室里一师姐出于好奇做了次基因检测，拿到结果后，实验室里的小伙伴们都围了上来。因为我们是营养学的，所以对师姐「营养能力代谢」这一项检测结果十分好奇。看完后就有人说：「师姐，你看你 CYP1A2 等相关基因位点的检测，说明你的咖啡因代谢能力有点差呀」。被封为「实验室研神」还发过多篇 GWAS 文章的师兄也开始科普：这类检测项目使用的是 CYP1A2 基因上的 1 个多态性位点，受限于当前的科学认知，该检测未能覆盖所有与咖啡因代谢相关的基因或位点，不能代表真实的咖啡因代谢情况。这是发生在我实验室的故事，基因检测发展到今天，除了最初应用于科研和临床，消费级基因检测也正在走进人们的日常生活。2017年 4 月 6 日，美国 FDA 批准了 23andMe 向消费者提供的 10 种疾病或病症检测，证明了消费级基因检测的应用前景。而国内，基因检测行业也在紧追猛赶。以被誉为中国版 23andMe 的微基因（WeGene）为例，产品上市至今两年多，已经获得超 20 万的数据用户。那么问题来了，作为具有较强专业基础的医生和科研人员，你又是

临床治疗的基础首先是需要准确的诊断，准确诊断性 Meta 分析是 Meta 分析的一个重要部分，本次想向大家推荐的是一款专用于诊断性试验的免费 Meta 分析软件，临床医学、临床检验、临床病理、临床科研人员、临床康复科及临床影像科等工作人员可用它写上一篇高大上的诊断准确性试验的 Meta 分析文章。安装软件Meta-DiSc 是一个免费的下载软件，登录 http://www.hrc.es/investigacion/metadisc_en.htm，下载安装软件，目前最新版本是 1.4 版。运行软件在试行此软件之前，必须明确和熟悉准确诊断性 Meta 分析里结果计算的经典四格表（可能不会在您所纳入的文献中出现，需要研究人自己总结并准确的填写在四格表内，不易混淆而且方便分析）。TP：True positive 表示真阳性的结果，用数字表示；FP：False positive 表示假阳性的结果，用数字表示；FN：False negative 表示假阴性的结果，用数字表示；TN：True negative 表示真阴性的结果，用数字表示。1. 打开软件，可以看到如下界面Author：第一作者名