网民会通过各种方式存储各种格式的影片视频，现如今，生物学家也不例外。研究人员通过使用微生物免疫系统 CRISPR-Cas，已成功将电影片段编码存储到大肠杆菌的基因组中。该技术成果于 2017 年 7 月 12 日 在《Nature》率先发布。美国马萨诸塞州哈佛医学院的合成生物学家 Seth Shipman 提到，将编码数据存储进细菌 DNA，有助于存储记录一系列事件的发生发展。Shipman 在过往研究脑神经发育时，因缺乏记录捕捉脑神经细胞运作的技术而受阻。当然，这也激发了他日后探索研究细胞分子水平记录系统的热情。他说到，「细胞有收集各类信息的途径和能力，我想通过细胞来记录中枢神经系统发育过程中各种分子水平的信息」。CRISPR 基因编辑然而，将电影片段刻进活细菌的 DNA 看似容易，但其实为了研发这类系统，需要建立一种可以在单个细胞中记录数百个事件的体系。Shipman 及其同事，包括哈佛医学院遗传学家 George Church，已着手运用免疫系统 CRISPR-Cas，使得诸多科研工作者可以更加准确便利地编辑基因组。Shipman 团队利用 CRISPR-Cas 可捕获入侵病毒

我做 western 的时候，发现目前的资料都很老，网上的资料也大多互相传抄，说法各异，于是综合了目前网上所能找到的资料和个人实际经验，编辑了这份 western blot 操作步骤，内容包括主要操作步骤和所需要注意的有用的细节，并附上参考文献。我按下文的步骤操作已经做出来了稳定可重复的、背景干净的 western 条带了，屡试不爽，所以相信你也行。背景蛋白质印迹的发明者是斯坦福大学 George Stark。Neal Burnette 于 1981 年所著的 Analytical Biochemistry 中首次被称为 Western Blot。最开始做印迹的是一个叫 Southern 的科学家，但印迹的对象是 DNA 链，他把这种技术称为 Southern blot，后来出现了两个过程相似，但是对象不同的印迹方法，一个针对 RNA，一个对蛋白质，人们分别把这两种技术的称为 Northern 和 Western，与这两个技术的发明人没有关系了。一：蛋白质的样品制备由于这一步方法各异，具体步骤请参考试剂盒的说明书即可。蛋白质的样品制备是 Western Blotting 的第一步，样

夏天到了，太平公主们该发愁了，我是多垫几层海绵呢，还是多吃木瓜呢，如此等等，各种丰胸办法都用上。其实要我来说，真没啥用，别浪费钱了，天生的，基因决定的。不行我们来看看 Nature 上的一篇文章《Tsc1 deficiency impairs mammarydevelopment in mice by suppression of AKT, nuclear ERα》，从标题就可以看出 Tsc1 缺失会影响小鼠发育，到底是怎么影响的呢？Tsc1 缺失下调了 AKT, nuclear ERα 的水平。图 1作者先是构建乳腺上皮细胞敲除 TSC1 小鼠动物模型，看出来了吗？妥妥的乳腺发育迟缓。具体我们看上图。图 1 中的 e、f、g 表示通过免疫印迹和免疫组织化学来验证小鼠是 TSC1 敲除。a、b、c、d 是将 6 周龄小鼠（TSC1 敲除和未敲除）的第 4 个乳腺发育对比，TSC1 敲除小鼠乳腺发育迟缓，主要是对比 TEBs 和乳腺分支。怎么办呢？图 2加入 mTORC1 抑制剂雷帕霉素 ，TSC1 敲出模型 p-S6 水平上调，乳腺重新发育，修复了 TSC1 缺失引起的发育问题。上述

今年的基金评审即将进入会审阶段，相信很多人都在等待最后宣判，有些没有上会的朋友可能已经提前知道了结果。今年和 2016 年一样，我参与了 15 项青年基金的评审，这是一项很费时、费精力的工作，今年花了我 1 个星期左右的时间，审完后有一些感想，与大家分享。心急的或者不想看文字的，可以直接拉到文末看视频教程，手把手教你《基金标书的申报与写作技巧》。不管是审标书还是论文，我都是非常认真地对待的，今年和去年相比，标书质量明显提高，这个可能和各地医院开展了大量基金培训有关（也有人因为学习了我的视频课程，标书质量提高很多），除了有 2～3 份实在是看不下去，其他的标书整体质量都不错。基金委要求通过率为 30%，在这十来份标书当中选出那么最优秀的几个挺艰难的，由此可见现在国自然的申请竞争相当大，对于每篇标书我至少要废寝忘食地读 3～4 遍。为了对申请人负责，我会反复查阅 PubMed，基本上每份标书都有大大小小的问题，我的评审意见非常详细，最多的时候评审意见超过 800 字，相信申请人在看到我的意见以后会受益匪浅，即使今年没有中标，来年准备的时候也会事半功倍。今年我审的 15 份标书中，3 份 A

你知道一个数据库的文献量有多大么？ 仅仅是万方中关于期刊的文献就有 36 000 000+ 篇，而 Pubmed 中则有 27 000 000+ 篇。每一个数据库的文献量都可以用「浩如烟海」形容。当然，你根据自己需要的主题进行检索所得的结果并没有这么多。即使如此，检索的文献量少则数十上百篇，多则上千篇，难不成你还要将所有的文献都浏览一遍，才知道哪些文章对你的研究是有帮助？即使是简单的浏览标题，也能让你两眼昏花，更何况进一步阅读摘要，甚至是全文。那么，接下来的关键就来了：如何在「多如繁星」的文献中，找到属于你的「北斗星」？如何评价哪些文献对于你整个科研思路是有意义的，哪些文献属于重量级，而更多的文献是没有太多「利用价值」的？所谓：「众里寻他千百度，蓦然回首，那人却在灯火阑珊处」。这便是科研中的利器之一：「文献筛选」。接下来，我会分篇章进行图文详细概述，如何在常见文献库中进行高质量文献的筛选，其中包括国内常见的数据库：知网、万方，以及国外的数据库 Pubmed、GoPubmed、web of science、F1000、ResearchGate……，也会详细描述通过哪些软件，对文献进行高质

参加了多少次海内外大大小小的学术会议，没个展示自我科研成果的壁报可怎么行？那么，怎样制作出一份精致出彩的壁报呢，今天就带大家共同学习一番。1 明确会议要求查看会议方对壁报的要求，包括内容题材、壁报的尺寸、具体的格式要求等。2 简练撰写报告出众的观点，良好的表述，与出彩的展示均是不可或缺的。同样是对研究内容的简明扼要展示，如果还不会写结构式摘要，建议你先掌握好摘要的写法。然后，过渡性地转化为壁报内容，做到简明清晰易懂，有结构有条理。壁报内容大致由以下部分，选择性地组成：标题 （title）、前言（introduction）、假设（hypothesis）、方法 （methods）、结果 （results）、图表（tables and figures）、结论（conclusion）、推论（implications）、参考文献 （references）、致谢（acknoledgement）。看着是不是和论文摘要有几分相似呢？3 软件制作壁报1.PPT 软件简易制作PPT 肯定是大家再熟悉不过的软件了，用它就能做出不错的学术壁报。① 打开 PPT（Office 2010），单击「设计」，再单击「

本讲要介绍的两个高级搜索指令：【filetype:pdf】-- 限定搜索结果的格式为 pdf-- 也可选用其他格式，比如 doc，ppt 等-- 注意中间的冒号「:」是英文的【site:www.fda.gov】-- 限定在 www.fda.gov 网站内进行搜索-- 也可以换成其他网站--http:// 不要加，www. 可加可不加实例 1：搜索生理学的课件1. 如何搜索网上与生理学相关的 ppt 格式的文档？百度搜索：【生理学 filetype:ppt】2. 如何搜索百度文库中与生理学相关的 ppt 格式的文档？百度搜索：【生理学 filetype:ppt site:wenku.baidu.com】百度 Google 高级搜索：方式 1：使用指令来搜索【filetype:pdf】【site:www.fda.gov】注意：百度和 Google 的高级搜索指令大部分是通用的，但也有一些是不通用的。方式 2：访问高级搜索的网址百度高级搜索：http://www.baidu.com/gaoji/advanced.htmlGoogle 高级搜索：http://www.google.com.hk

写在前面的话本文是一篇脊柱领域系统评价，成文后自我评估不甚看好，理由有三：阴性结果一般不受待见中文文献偏多纳入文献质量偏低先后投稿以下七个期刊，最终被 AOTT 接受。European Spine Journal（2.132，投稿时 IF，下同）Clinnical Orthppaedics and Related Research（3.127）International Orthopaedics（2.387）Acta Orthopaedica Belgica（0.837）PLoS one（3.057）Clinical Spine Surgery（2.291）Acta Orthopaedica et Traumatologica Turcica（0.398，AOTT）期间投稿会议 36th SICOT Orthopaedic World Congress 被录取为 E-poster，前后约 3 年。原计划整理七个期刊的投稿心得以「负能量」鼓励新手们，但由于篇幅所限，最终改为投稿过程中跟编辑部的交流心得。用一句经常用来与他人共勉的话当成标题，请原谅我这标题党：你要相信：所谓论文，只要你敢写

对于刚入门的科研小白，免疫组化步骤较为繁琐，而且一步错，步步错，有时候明明觉得自己都按照老师们提供的条件做，可惜就是没有得到预期结果，现我将自己的些许体会分享如下。关于免疫组化的定义，原理，分类，优势等不再一一介绍（丁香园等主流平台都有介绍），我只叙述我认为「比较小」的问题，但这些往往决定了成败，遗憾的是我检索了比较多的资料，都没有详细的提及这些问题。1 取材与制片① 一定要按照标本的留取要求留取，譬如某组织要求固定前要求用湿润的生理盐水纱布，用干纱布则会大大影响实验效果，导致输在起跑线上。② 制片厚度与均一程度很重要，若每张片子的厚度不同，则实验时所需条件的就会有差异，然我们不可能随意调整实验的反应时间。2 反应温度本人建议常规 4 ℃，背景浅，反应温和，但长须过夜。也有些试剂推荐 37 ℃，反应较快，最不提倡的是室温，因为波动较大，如果非得用室温，譬如 25 ℃，建议使用水浴恒温箱。3 如何取抗体以抗体 1:1000 稀释为例，枪头吸取 0.5 ul，首先这个很难观察到底取了多少，误差太大，假设不小心枪头外周沾了一抗很难察觉，所以建议梯度稀释法较妥，建议在不影响实验可换别的试剂，譬

今天小张就先介绍三篇最近很火的发文章的套路：不做实验，只挖掘数据库就发表文章。第一篇：影响因子 1.7 分第一篇是今年 5 月份刚发的文章，杂志是 Pathol Oncol Res，影响因子 1.7 分，研究团队是伊朗的科学家。文章主要通过 cBioportal 对 TCGA 数据中肝癌的数据进行挖掘，结果找到了一条 lncRNA SNHG6 作为肝癌的分子标志物。结果如下：感觉做了好多东西，其实就说了两件事：lncRNA SNHG6 等 3 条 lncRNA 在肝癌患者中基因组水平的改变和表达情况；lncRNA SNHG6 与患者预后相关；关键是只用了一个 TCGA 使用工具：cBioportal，而这个工具使用起来也非常简单，就这么挖掘下数据库一篇 1.7 分的文章就发出来了。第二篇：影响因子 3.2 分这篇文章是国内团队 3 月底发的，杂志 International Journal of Molecular Sciences，影响因子 3.2，分数已经突破 3 分了，文章说的是通过生物信息学分析鉴定结直肠癌关键候选基因和信号通路。下面我们看研究内容：第一印象：图好漂亮，不过分析

「看通知！科研处规定了，发表费用报销封顶就是 4 000」「那我这发文章超的费用咋整？」「问老板去！老板没法报，就自己垫吧。」你拼了命地做实验，多次拒稿、重投、大修、小修，好不容易文章被接收了，最后你还得花钱……但你有没有想过为啥别的行业投稿要给作者稿费，而在科研领域你还得交钱？这是因为学术出版业独特的运营方法，由于历史原因，大部分作者已经习惯于不计酬劳地为出版社撰写文章（其实是求名不求利），当稿子发给出版社后，开始进行同行评议（注意这个工作，同行们一样是免费进行工作），接着你就需要对这些评议意见进行相应的修改。在你庆祝文章被接受，这时你老板也已将自己理应自己保留的版权无私地让给了出版社，而不像大多职业作家签订的报酬合同。此外，出版社还可能要求作者「按页收费」的形式或因加印、以及诸如彩照等特殊服务支付费用。同时因为每一个科学研究都有其独到的特征和发现，又因科研人员对他们的新发现的原始描述只发表一次，所以，所有学术期刊都包含了没有在其他地方发表过的文章。想想吧，学术出版可是有与生俱来的垄断性 —— 对同一内容没有可以相互竞争的期刊。因此，如果是需要的信息，又不能从其他地方得到，出版社当然

我们先看图 1，这张散点图上，红色圆圈为致敏组，蓝色为非致敏组；圆圈（圆心）垂直位置为发生率；圆圈面积为相对血液浓度；背景颜色分三种，从左到右依次为动物组，蔬菜组，吸入组。总共有四个不同的概念同时集中于一张图中，这张图内容丰富，却非常直观，同时也节省了版面，这种图形是比较受杂志社与编辑欢迎的（选自由我导师和同事完成的论文，这张图是主要成果，发表于 2016 年的 JACI 杂志，影响因子 12.485）。图形貌似非常复杂，有四个参数，但其实只需利用 Excel 和 PowerPoint（以下简称 PPT），用不了几步就能完美实现，Office 版本为 2013。为了突出制作流程，我们先简化数据，在动物，蔬菜和吸入组中只选取 2 个来源，数据见图 2。表中每一行表示一个来源，每个数据列分别表示非致敏组发生率（%）、非致敏组浓度、致敏组发生率（%）和致敏组浓度。圆圈置顶或者置底可以通过调整致敏与非致敏组「数据列」的前后位置来实现，以免置顶大圈圈覆盖掉置底小圈圈。步骤一在每一行数据上下都插入一个空行。原因：有些数据较大，导致它在图形里面的圆圈面积很大，如果相邻两个圆圈都很大，就会重叠。一般空

几乎地球上所有的生命都基于 DNA 复制或被复制。对 DNA 复制过程的了解带来生物和医学领域很多重大发现。现在科学家们首次看到单个 DNA 复制的全部步骤，有了一些惊人的发现 ——DNA 复制的随机性比我们想象得还要多。1. 惊人的发现加利福尼亚大学戴维斯分校和加州大学戴维斯分校综合癌症研究中心的微生物学和分子遗传学杰出教授 Stephen Kowalczykowski 说：换一种方式看 DNA 复制带来了新的发现。该作品于 6 月 15 日刊登在 Cell 上，题目为《Independent and Stochastic Action of DNA Polymerases in the Replisome》，期刊共同作者 James Graham 是加州大学戴维斯分校、斯隆凯特琳癌症中心博士后研究员。研究人员凭借复杂的成像技术和大量的耐心，观察大肠杆菌的 DNA，测量了酶机制对不同链条的作用有多快。他们创奇迹般的摄录了单个 DNA 分子复制的近距离高清无码影像。2. DNA 复制基础DNA 双螺旋结构是由反向互补的两条链制成。每条链由一系列碱基 A，T，C 和 G 组成，其在链之间

2010 年 Environmental Microbiology 杂志刊登了一部分杂志的审稿意见，以下是我摘出的 10 个史上最狠的评审意见。让大家在学术研究严肃、认真的前提下，体会一下审稿人的幽默与诙谐，有的审稿意见甚至让人啼笑皆非。1. This paper is desperate. Please reject it completely and then block the author’s email ID so they can’t use the online system in future.这文章太不给力了… 万万不可发表。此外，建议锁定该作者的电子邮件 ID，避免此人日后继续投稿。2. The writing and data presentation are so bad that I had to leave work and go home early and then spend time to wonder what life is about.这小子的写作水平和数据呈现能力也是无敌了，哥还是提前下班回家，花时间思考下人活着是为了虾米......3. R

每年的 6 月份除了高考以外，对于科研狗们最重要的日子莫过于「路透社」揭榜新的 SCI 影响因子了。大部分同学可能也就看看自己发表的文章分数是升还是降，如果仅仅如此，未免太埋没 JCR 的作用了。发过 SCI 的同学往往还会选择继续深造，人往高处走，那么如何判断某某医院某某专业的学术水平高低呢？JCR 可以说就是这样的一盏指路明灯，通过 JCR 查询和判断医院专科的学术水平，选择自己下一站的深造地点，可以说是个不错的策略。好了，废话不多说，下面上干货：首先，你需要知道医院的英语名字，这个可以上医院网站的官网就能看见，不可自作聪明自己去翻译哦，你翻译的不一定是别人投稿用的英文名称。然后进入 web of knowledge，选 SCI 子集，选高级检索，然后用 AD 地址检索，如下图：我们以四川大学华西医院麻醉科来做个例子，因为华西医院麻醉科可谓麻醉领域的翘楚，学术方面自然是顶呱呱的，我们就来看看到底是有多牛。输入检索式：AD=（Sichuan Univ SAME West China Hosp SAME anes*），时间限定在 2016 年，得到检索结果 61 条，可知在 2016

对于每一个进入生物领域的人，基本都避免不了分子克隆（认知的同胞除外），当然就需要一个称手的 DNA 比对软件。今天给大家强烈推荐一款 DNA 比对软件，APE（a plasmid editor）。这款软件不仅能做 DNA 序列比对，DNA 序列翻译，还能够做引物设计，酶切位点设计，质粒图谱构建（这个还是 snapgene 更好用，不过人家是收费的），ORF 查找等非常多的实用功能，下面我来详细介绍一下这几个常用的功能。先发个软件的链接，需要的小伙伴可以去下载使用☟http://biologylabs.utah.edu/jorgensen/wayned/ape/1. DNA 序列比对在对话框中粘贴序列，工具栏有反向互补的工具，图标为双向箭头，当反向测序时可用。再新建另一个文件，将所需序列粘贴，即可进行比对，如下图。在 Tools 中选择 Align Two Sequence 进行双序列的比对，结果一目了然，mismatch 都被红色标注清楚，双击想看的位置可进入到对话框中，方便找到突变的位置。2. 对 DNA 序列进行翻译选中你想翻译的序列，ctrl+T 即可进行对 DNA 序列翻译成蛋

关于 SCI 拼图的经验介绍很多，但对于强迫症的山姆大叔来说，并没能找到完全满足自己要求的教程，面临多个问题：- 原始图片尺寸大小不一，拼图时大大小小很闹心- 图片不清晰，分辨率不够，条带看不清，色彩不好看- 图片对齐困难，每个分图内的图片间距也不好统一- 图拼好了，但发现原图要改，又得从头来一遍一番摸索，发现还是 PS 和 AI 双刀齐上来得快，而且这个操作不仅适用于 Western 拼图，SCI 文章内的图片均可以轻松解决。原则：PS 修图，AI 拼图（均为 CS6 版本）以 Western 的条带为例：图 1这是一张丑的不能再丑的原始图片，而且因为使用的是国产曝光机的缘故，分辨率也只有可怜的 300 dpi，离大部分杂志要求的 500 dpi 都有距离，接下来就是 PS 大显神通的时候。第一刀：PS 修图① 右键点击左侧功能区第六个选项卡，选择「标尺工具」② 沿着条带的方向拉一条线段，然后在上方状态栏选择拉直图层③ 条带拉直图 2④ 根据 10 孔、15 孔的泳道宽窄，选择左侧功能区第二个选项卡的矩形选择工具（见 1-①），在上方状态栏选择固定比例，这里以 5：2 为例，将目的条

老板给了一个课题，不知道如何下手啊。文献那么多，我该看哪一篇呢？世界那么大，挖掘机技术哪家强呢？应该找那个师傅比较好呢？生物医学发展日新月异，文献层出不穷，我该如何快速掌握呢？来来，走过路过，不要错过。老夫看你骨骼惊奇，实乃科研之奇才，老夫这有一个神技，传授于你，如何？先亮出我的神器 ——HistciteHistcite = history of cite，即引文历史，又叫引文图谱分析。该软件是 SCI 发明人加菲尔德开发创作的，用图示的方式展示某一领域不同文献之间的关系，简单地说，就是我们平常顺藤摸瓜，从一篇文献的参考文献中再去找相关的其他文献数据的来源。目前，该软件用于分析的文献信息只能来源于 WEB OF SCIENCE，不过基本足够了。数据库它可以帮助我们快速了解一个领域的发展历史，定位该领域的重要文献和最新的重要文献。那么这么好的神器在哪里？别急......1. 软件下载回复 软件 003，直接下载，就是这么简单粗暴。2. 登陆数据库3. 输入关键词4. 搜索结果分析5. 保存文献信息注意：由于版本的问题，可能还需要你对保存的 TXT 文档手动修改以下信息。6. 开始使用神器

最近我在帮助我们学校的毕业生修改论文的格式，所以对于毕业论文的格式制作还是稍有心得，在这里和大家分享一下，因为前段时间有人出了 Office 的操作，看下面留言有想要 WPS 的操作的，所以，这次以 WPS 的操作系统以及重庆医科大学的毕业论文要求为主。在修改论文期间发现，同学们出现问题的地方主要集中在页眉、页脚、分节符、目录、参考文献、表格、图片。下面我们依次来说一下。一. 页眉我根据不同的几个问题给出相应的解答。1. 插入页眉WPS 的一些操作相对简单，点击插入 - 页眉和页脚。或直接鼠标左键双击页眉的位置，都会显示如下图。输入「重庆医科大学硕士研究生学位论文」，宋体，小五，加黑，不赘述。但是页眉下面有一横线，这要怎么解决？选中上面输入的文字，点击开始 - 边框 - 下框线。页眉下面就有了横线，所以类似的，想要去除页眉下面的横线类似原理，将边框选择无框线就可以了。2. 删除页眉我们的页眉是从「英汉缩略词对照」才开始有的，但是有的同学设置的是从第一张就有页眉，双击页眉删除掉文字，后面的也全都删掉了，这个时候该怎么办呢？这就要用到我们神奇的分节符了，插入了分节符，分节符前后的内容格式才

蛋白质是生命活动的体现者，其结构决定着功能。由线性氨基酸组成的蛋白质需要折叠成特定的空间结构才具有相应的生理活性和生物学功能。解析蛋白质的空间结构对于认识蛋白质的功能、功能的执行、生物大分子间的相互作用，以及医学和药学的发展「如药物靶点的设计等」具有重要意义。为了更快速地了解蛋白质功能,不能只等待蛋白质的测定结果，尤其是对未知蛋白质开展研究之前,通过对蛋白质结构进行预测具有明显的优势。理论基础蛋白质的高级结构由其一级结构序列决定，蛋白质可以自发地折叠成它们的天然结构，特别是结构简单的蛋白质小分子。序列相似的蛋白质具有相似的三维结构；不同的蛋白质中相同的结构域(domain)具有相似的功能。蛋白质结构预测流程一、蛋白质理化性质和一级结构分析1. 分析蛋白质的 pI、Mw、氨基酸组成、消光系数、稳定系数等「1」进入 Expasy 主页：http://web.expasy.org/protparam/ 「2」点击 Resource A…...Z「3」查找「ProtParam」「protein physical and chemical parameters」「4」粘贴序列进行分析。2. 分析