免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation）是以抗体和抗原之间的专一性作用为基础的用于研究蛋白质相互作用的经典方法。它可以：测定两种目标蛋白质是否在体内结合；确定一种特定蛋白质的新的作用搭档；分离得到天然状态的相互作用蛋白复合物。实验原理当细胞在非变性条件下被裂解时，完整细胞内存在的许多蛋白质－蛋白质间的相互作用被保留了下来。如果用蛋白质 X 的抗体免疫沉淀 X，那么与 X 在体内结合的蛋白质 Y 也能沉淀下来。目前多用精制的 prorein A 预先结合固化在 argarose 的 beads 上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads 上的 prorein A 就能吸附抗原达到精制的目的。这种方法常用于测定两种目标蛋白质是否在体内结合；也可用于确定一种特定蛋白质的新的作用搭档。实验步骤一、试剂准备二、免疫共沉淀反应1. 转染后 24～48 h 可收获细胞，加入适量细胞裂解缓冲液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解 30 min，细胞裂解液于 4 °C，最大转速离心 30 min 后取上清。2. 取少量裂解液以备 Western blot 分析，剩余裂解液加 1 μg 相

在《如何查找核心文献（一）：知网高级检索》、《如何查找核心文献（二）：文献管理软件》中，我们已经详细了解了如何通过网站配合软件查找到核心文献。然而，对于外文的文献检索，仍有着不方便之处，正如我们想到检索中文文献就会想到 CNKI 一样，一想起外文文献检索，PubMed 肯定是首选。凭借着其庞大的文献量，对于写作医学类论文有着很大的便捷之处。然而，在检索界面，我们除了文献摘要外，并不能获得更多关于可以用于评价文献质量方面的提示（图 1）。图 1接下来，我们就来进一步了解你所不知道的「PubMed」一面。强大的「Filter：筛选器」Filter：顾名思义，就是筛选器，在 PubMed 中，这个 Filter 可谓功能强大。我们此次教程便是基于「Filter」。主要是基于 PubMed 中自带的筛选器，以及根据 SCI 影响因子大小分类制作筛选器。图 2 框 1 中的显示所展示的界面便是我们本次学习的筛选器界面，点击框 2，便可以开启我们的筛选器制作之旅……图 2当然，若要完成筛选器的制作，需要在 PubMed 中注册账号。第一步：注册 PubMed首先，我们需要完成在 PubMed 中的

统计图，和科研领域里的大多数图像数据伴生，是一种大家喜闻乐见的，直观表现数据结果的形式。周围的 Lab 不管是做免疫，还是发育，或者肿瘤，都涉及到要做免疫荧光（Immunofluorescence, IF）或者免疫组化（Immunohistochemistry， IHC），而在拍完了图之后，直接给老板 show 漂亮的 images 时并不能让 TA 百分百满意，总是想要一个 bar 图，那就需要统计了。而手动点数细胞太费时，所以向大家介绍一个有用的软件 IMARIS，可以自动数细胞。Imaris 使用起来轻松快捷，显示信息也很全面：区域内细胞总数 A，单个通道在 A 里的数量，某个特定区域细胞数，单个细胞的直径，大小，坐标等等。而这还只是此软件最最基础的功能，一起先来看看吧。1. 打开软件，可以看见如下界面，第一行的标题栏有 Slice，Surpass，Animation 等，Slice/Surpass 可以用来在打开的 images 上操作，Animation 可以将连续的 images 做成 moive。2. 打开一张图片，界面就自动变成如下。如浮动窗口 Display Adju

我们大家都知道，OpenBUGS 是进行贝叶斯统计分析的得力工具，它不仅能做统计分析，详情请戳手把手教你用 OpenBUGS 做统计，还可以绘制疾病地图，下面告诉大家如何利用 OpenBUGS 绘制疾病地图。需要准备的材料1. 需要绘制的目标地区地图，一般从中国地理信息系统网站上可以下载到（.shp）格式的中国及各省份的地图。2. 数据，需要目标地区各个行政区域上某种疾病的发病率或患病率，并能计算出疾病的期望发病或者期望死亡数据。3. 需要在电脑客户端安装 OpenBUGS3.2.3 软件。具体操作步骤以西北五省（新疆、甘肃、青海、宁夏和陕西）某年腹泻患病率数据为例1. 生成 GeoBUGS 格式的地图：目前分析用的地图普遍采用。shp 格式，而 GeoBUGS 只能识别自带的地图，因此将 .shp 格式的地图需要进行适当的转化才能应用到 GeoBUGS 中。可以通过 ArcInfo 或 R 软件来实现（具体方法可以在网上找到资源）。如下图已经生成了 GeoBUGS 能够识别的 China. 西北五省地图如下图。2. 生成空间邻接矩阵：在 OpenBUGS 窗口界面，点击「Map-&g

看到工资条的那一刻，老林摸着鼠标的手有些颤抖。去掉五险一金等，3 月份打进工资卡的不到五千块。想想一家三口的生活，他又忍不住叹了口气。老婆从刚结婚那会就在说相当全职太太，而等到儿子都上了小学，她还在过着每天加班的日子。唯一庆幸的是，房子买得早，房贷轻松点。于是，第 xxx 次想要离职的念头又出现了……丁香园于 2017 年 3 月~5 月进行了医生薪酬调研，了解了临床医生 2016 年的收入情况。数据显示 2016 年临床医生平均年薪为 8.5 万元（薪酬包括：工资、奖金、津贴、教学科研、企业赞助及其他）。8.5 万，什么概念？根据这些调研，受访医生的平均期望收入为 18.4 万。按照目前 7%~10% 的增幅，大概 2022 年就能实现这个愿望了！按照这个速度，35 岁的老林怕是一直拖后腿、被平均的那个人。原本指望着学医拯救人生，却只是羡慕着同学聚会上其他同学的谈笑风生。几乎每天都在想着离职的他，在这个三线小城市的小医院一直熬着，不知道去哪里找到合适的工作机会。其实，世上无难事，只怕有心人。丁香园旗下的丁香人才（ID：JobmdCN）十来年一直专注于医疗行业的求职招聘，公立民营医院、

@何小贝要加油是生物工程类的硕士，研究生时候做过分子生物学相关实验。毕业的时候海投了很多生物类的研发以及技术类的岗位，然而因为研究生实验和岗位要求不是很匹配，所以很多被拒。最后留下来两个机会，一个是某药企的微生物发酵研发岗，需要泡在发酵车间内，具体的就是调配各种发酵参数类的研发，厂区年后需要搬到很远的地方，交通不便；另一个机会是一家生物公司的分子产品项目专员，其实就是做分子新项目的孵育和前期临床转化，需要跑客户，了解市场需求，然后反馈研发端进行产品升级和优化，公司离市中心近。因为是女生，考虑到后续有结婚生娃的打算，不想在工厂泡太久，所以选择了第二个机会。然而工作几年后，不禁感慨，如果晚毕业几年也许选择会完全不一样。国内基因测序公司发展，就业选择宽很多目前国内基因测序公司如雨后春笋般出现，对于学生物的来说，尤其是分子生物或者跟分子生物搭点边的专业来说，就业面确实是宽了不少。（图片来源：摄图网）以在基因测序公司的工作经验，跟大家谈谈基因测序公司不同岗位的具体日常工作：1. 临检部门：A. 分子实验员：二代测序的建库测序，基本泡在实验室中，实验周期为一周，每天的工作就是各种移液、PCR、

做个生物实验也是够苦逼的啊，不止结果要好看光鲜，还要做定量……也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮，一眼就看出来差异了，还需要定量？！思量起来，这个也还算简单，忍了吧。。。 but…辛辛苦苦做的免疫组化（或荧光）也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗？花花绿绿，斑斑驳驳，肿么分析 ？还好，我有这本秘籍，一定要看完哦。准备工作 首先，你需要下载 imageJ，然后下载 IHC-Toolbox 插件，并放入 imageJ 的安装目录下的 plugins 文件夹下；送链接：https://imagej.nih.gov/ij/plugins/ihc-toolbox/index.html开始分析1. 在菜单栏里选择文件打开，打开实验数据图片（此处所使用图片来自互联网，大家可用自己的数据实战）；然后在 plugins 菜单下 → 选择 IHC Toolbox，打开如下：2. 选中感兴趣的区域（ROI），然后点击 Training；（这里选择的区域一定要有代表性，范围不可太大，也不能太小） 3. 上步完成后会弹出 Color Chooser 窗

在生物实验中相信大家都经常要倒平板，细菌培养，分子生物学实验等等。医药企业中倒平板更是家常便饭，环境监测、水监测、微生物检查等，初学者往往都倒不好，我们总结几点小技巧供大家参考。 一、防止倒皿时的冷凝 有经验的都知道，手心不烫手背烫，这是一个经验数据，此时的温度在 45 度左右，最适合倒平板。 如果要连续倒多个皿，尤其是在冬天往往容易凝固，一旦凝固则需要再加热到较高温度才能融化（玻璃体的特性）。所以建议此时有个 50 度的恒温水浴开着，随时把装培养基的三角瓶放进去效果会好不少。 二、培养皿中有冷凝水 一般来说，都会有几滴，影响不大。如果过多则需要注意。大概的情况是：倒皿前将平皿最好保持在 35-40 度的温度（触手有温热感）；保持平皿静置环境温度高一些。 三、倒已冷却的琼脂培养基 对已冷却的培养基再融化颇感头痛心烦，因为放在电炉上烤不仅需要耐心，还得加上小心，一不留神就会冲湿瓶塞；重新放入灭菌锅加热吧，好是好，可又嫌费事。解决方法是用微波炉加热，又快又好，融得彻底，用着放心。当然，装培养基所用的三角瓶得能够放入微波炉才行（250 ml）。 没

一年一度的国自然基金申请又进入最紧张的准备阶段，可能很多小伙伴们正在为标书埋头苦干浴血奋战；多少个不眠的夜晚，就为标书某一部分的构思；多少个郁闷纠结，就为技术路线的精益求精；经历过多少次反复修改，但是心里依然没底。希望得到专业人士的咨询建议，但却找不到门路。于是，学霸君特意为大家整理了国自然基金申请一系列的资料，包括基金申请技巧/标书撰写/预实验等，各种套路方法，全程为您的科研之旅保驾护航，让您的标书脱颖而出，大大提高中标率，省时省心省力。01 基金申请流程 合理规划时间这是基金申请的第一步，合理利用时间很重要。每年的时间节点基本上差不多，以下以 2017 年国自然为例作了说明。中标率约为 21%，即五份标书中，你的标书要 pk 掉其他四份，因此掌握对的方法则是制胜法宝。02 基金申请常用技巧小技巧，可事半功倍基金申请看似千变万化，实质上却有章可循。一个简单的小技巧，却能快速找到捷径。以下是学霸君整理的一些资料，大家在平常科研过程中，也可模仿类似方法，可快速提高效率。课题设计尽管，每个研究领域都有对应的研究热点，但其实，各个领域的课题设计思路均可模仿套用。大约一半的基金是这么设计的。因

看到有很多战友为引物的设计感到头疼。不过这也难怪，虽然原理我们都知道，但是设计的时候却未必能都考虑的很完全。 在这里我向大家隆重推荐一个在线的引物设计软件，是斯坦福大学的，我认为是最好的在线引物设计软件，我用它设计接近 100 多对引物。它用起来也很简单，最重要的是效果非常好，考虑的因素也非常的多。 具体操作如下： 首先输入你想要 p 的片断，含有数字也无所谓，选择 pcr 选项。 点击「submit」进入下面的页面。其中在 Select YES to Amplify a region with EXACT endpoints of the DNA sequence entered NO YES 这一项中，一定要选择 YES，其他的各项目，大家可以点击查看说明，也都是非常的好理解。暂时，我们先不要改软件自设的默认值，直接 submit 。 然后我们就得到了结果，它会把所有可能的引物都会列出来，而且会把最好的一对帮你挑选出来，of course，我们要选择最好的。 然后点击「This is the BEST pair of primer

事实上，能做到临床科研两不误的医生都付出了常人难以想象的努力。越来越多临床小医生迫于晋级压力都得搞搞科研。一是时间紧迫，二是没有接受过正规系统的科研训练，虽然也想做实验发文章，但首先苦于不会做实验。如果没有基础研究，申请各种基金也比较困难。所以，很多人一提到科研就头疼：要怎么选择课题，优秀的临床科研/基础科研课题应该长什么样，实验中哪些小细节要注意，数据应该如何分析处理，如何投稿和选刊……各种尴尬的问题不知如何处理。优秀的人面面精通，平凡的人步步难行......为了毕业和职称，科研还得做。那么如何在临床业务不懈怠的前提提升科研能力，搞好医学研究呢？为此丁香园特别邀请了三甲医院主任医师结合实际情况亲授课程——《临床医生科研必备指南》。

又到一年填报高考志愿的时候，不少人都在纠结要不要学医。作为过来人，在要不要报考医学专业的问题上，「劝人学医、天打雷劈」还是「悬壶济世、无悔杏林」成为了对立面。支持派说：@林*数：学医后悔一时，不学医后悔一世。反对派说：@梦*松：如临深渊，如履薄冰，劝人学医，天打雷劈。根据丁香人才相关调研数据，仅有 12% 的医生考虑过转行，绝大部分医生还是在往成为「名医」的路上奋斗着。精英医生意味着什么？业务熟练、博闻强识、手术精湛，同时深受同行与患者的尊敬。如何成为这样的医生？丁香人才联合 THE DOOR 时代青年发起华西医学生职业成长课程系列，从医生创新思维、手术技巧、科研能力、医患沟通等方面授课，帮助医学生快速成长，并在课程中对个人发展职场问题进行解答。

SPSS 全称为「社会科学统计软件包」，是 IBM 公司推出的一系列用于统计学分析运算、数据挖掘、预测分析和决策支持任务的软件产品及相关服务的总称。图中我们看到 SPSS 有 23 个方法模块，虽然我们不能每个模块都能用到，但作为一个科研工作者，其中的某些功能是必须要掌握的。图一：SPSS 的 23 个模块下面列出几个典型的例子供大家在做数据中作为参考：图二：医学中 SPSS 用到的模块一、描述性研究图三：SPSS描述性研究描述性分析主要是对数据进行基础性描述，主要用于描述变量的基本特征。描述性分析对于数据分析来说是一项基础性的工作，目的要于熟悉数据源，把握数据的整体性分布情况。SPSS 中的描述性分析过程可以生成相关的描述性统计量，如均值、方差、标准差、全距、峰度和偏度等，同时描述性分析过程还能将原始数据转换为标准Z分值并作为变量储存。基本输出的统计量主要有以下几个方面：（一） 表示集中趋势的统计量：均值，中位数，众数，百分位数；（二）表示离中趋势的统计量：方差与标准差，均值标准误差，极差或范围，最大值，最小值，变异系数；（三）表示分布形态的统计量：偏度，峰度；（四）其他相关统计量：

小时候，老师问，你的理想是什么。开玩笑，必须是「医生」啊，白求恩是偶像，手术室是天堂，拿着刀救死扶伤，走路都自带光芒。毕业后，如愿以偿，做了一名临床医生，朋友问，做医生什么感觉。我用了一句话回答：有男杨某，安徽亳州人也，善手术，人送锦旗「华佗再世」。遇论文，卒，享年三十。关于临床医生，不得不吐槽的那些事儿：关于随机论文中写到「将 X 例患者随机分为两组」，未描述随机方法。各种方法找到科室电话，打电话咨询以补充信息。对方答复：「当然是看患者的想法啦，他们想吃什么药就分在哪一组」。——这哪是「随机」分，这是「随便」分好吗？关于盲法论文中未提及盲法，再次各种电话咨询，对方答复：「我们不让患者知道吃什么药，他们医保怎么报销。再说现在环境那么差，他们回过头来告我们怎么办」。——好吧好吧，这个答复很心酸。关于样本量「需列出四要素 δ(Δ) 或 π1，π2、α、β 或 Power，可写出计算公式」。开什么玩笑，样本量最大的限制因素是经费！是经费！是经费！——样本量永远是个坑，还不得不跳。关于知情同意你逗我呢，你敢让患者知道这是个试验。他能愿意当你的「小白鼠」？不打你算你赚了。——能不能别打脸？！关于

信号通路是指能将细胞外的分子信号经细胞膜传入细胞内发挥效应的一系列酶促反应通路。细胞信号通路图是科研研究过程中最常见也是最常用到的，如何绘制适合我们自己科研课题的信号通路图呢？可以试试 pathway builder tool 软件。这款软件简单易学，即便是零基础的同学，也可以做出漂亮的信号通路。1. 首先，打开 Pathway Builder Tool 2.0 软件，软件自带分子生物学会用到的基本元素，如不同的细胞、细胞器、分子甚至箭头等等。2. 打开一张画布，添加信号通路中细胞膜， 细胞器等基本骨架。3. 选择所需要的蛋白分子，Pathway Builder Tool 2.0 提供了非常多的选择，如受体模型、分子模型、化学结构模型等，可以根据实际需要进行绘图。4. 通路图中一般使用带箭头的连接线、虚线或者「T」字线，我们可以选中该连接线，添加到相应位置。5. 根据参与的蛋白分子，输入相应名称。6. 也可以在 Background 中更改背景边框等相关信息。7. 同时，这个软件自带很多经典通路的模板，比如 NF-KB，JAK/STAT 通路的模板，在上面可以直接修改，非常方便。8.

曼哈顿图，学名 Manhattan plot，是全基因组关联分析（Genome-Wide Association Study, GWAS）的标配，可以展示所有染色体上的不同位置的 SNP 的显著水平，因酷似曼哈顿的海边景色（高楼林立的）所以称为曼哈顿图。本质上，曼哈顿图是以 SNP 在基因组上的坐标/位置为 X 轴，以显著水平（通常是-log(P)）为 Y 轴的散点图，所以理论上说所有能做散点图的工具都能画曼哈顿图。但是你想一想全基因组有多少 SNP，然后还要坐成能用来发表的酷炫的样子，像 Excel 这种强（fei）大（jin）的工具还是算了吧（卡死电脑是必然的，然后调整染色体的标签，标注不同的颜色等都很麻烦）……除了是 GWAS 的标配外，你做一个 EWAS 也可以画曼哈顿图，做一个表达分析也可以做一个曼哈顿图，只要是你想要看基因组上不同的位置的都可以做。由于二代测序技术的发展，测序的价格不断下降，GWAS 研究越来越多得应用于各种疾病的研究中，而用于做曼哈顿图的工具也开始有所增加，比如 Java 程序 Haploview， python 的 geneview 库等。今天要跟大家介

谈到不能投稿的期刊，就不得不提到老板邮箱的垃圾箱里堆积的看似正规的期刊的邀稿邮件了。熟悉的期刊名，甚至是专业的编辑，乍一看还挺正规。不仅如此，这些期刊的邀稿还甚是诱人：快速审稿，保证发表，整一个包收、包审、包发的科研界门前三包啊。如果收到邮件的不是俺老板，而是我这样新加入科研发表行列的菜鸟，我很有可能就会回复投稿，最后很失望地发现，投稿后我必须要支付高额的论文处理费，但文章却不一定能够发表。那么，这些不建议投稿的期刊又是何方神圣？简而言之，这些期刊就是以赚钱为目的的掠夺性期刊。掠夺性期刊利用科研出版界新兴的开放获取模式（开放获取期刊列表：http://essaystar.com/doc/17.htm），即作者向出版商支付费用以发表开放获取的文章。开放获取模式本身并无问题，许多知名的出版商和期刊都会给作者提供开放获取的选项。但不得不承认，开放获取期刊都蛮贵的。但合法的出版商会在论文通过标准同行评审与接收程序后才收费，而掠夺性出版商可能连同行评审都没有，年轻的科研人员常常不是很清楚同行评审系统是怎么运作的，极大的发表压力常常让他们无奈地选择能快速发表的期刊。但将论文发表在这些可疑期刊可能会

有不少人询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用 BLAST 进行序列比对......其实这些问题在 NCBI 上都可以方便的找到答案。我将结合我自己使用 NCBI 的一些经历跟大家交流一下 NCBI 的使用。主要有以下四部分内容：如何查找基因序列、mRNA、Promoter如何查找连续的 mRNA、cDNA、蛋白序列运用 STS 查找已经公布的引物序列如何运用 BLAST 进行序列比对、检验引物特异性今天我们就先讲第一部分：如何查找基因序列、mRNA、Promoter。这里主要用到的是 Map viewer，我们以人的 IL6（白细胞介素 6）为例讲述一下具体的操作步骤。1. 打开 Map viewer 页面，网址为：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/index.html，在 search 的下拉菜单里选择物种，for 后面填写你的目的基因。操作完毕如下图所示。2. 点击 GO 出现如下界面。3.在步骤 2 图示的右下角有一个 Quick Filter，在 Gene 前面的小方框里打勾，然后点击 Filter。出现下图:染色体上的红色区域

又是一年考研录取季，要有一（没）大（几）波（个）小（大）鲜（麻）肉（烦）小师弟要进实验室啦，作为貌（快）美（要）如（下）花（架）的老师姐，想想还有点小激动呢。结果师弟开口第一句是：师姐好，我最擅长的是，在实验室闯祸......其实每个能够独当一面的实验老手都是从新人成长起来的，想要提高，唯一的办法只有不断练习，但是实验室里用品有限，经费紧张，怎么能有更多的实验机会呢？所以今天学霸君为大家准备好了一大波便宜又好用的实验用品，帮助大家修炼实验技能，不要慌，请继续看，看上随便拿，通通免费领取！1 Novoprotein 2×Taq Master Mix这是一款是将 PCR 反应所需的 Taq 酶、dNTPs、MgCl2 以及反应缓冲液预先配制成 2 倍浓度的混合物，专为常规 PCR 扩增反应优化，扩增长度可达 8kb，能高效扩增≤4kb 片段。灵敏度高，可从 0.05ng 人基因组 DNA 模板中扩增出特定基因片段。稳定性强，使用快捷，PCR 反应所必需试剂全集于一管之中，数分钟即可完成反应体系配制，经测试，染料的加入不影响 PCR 反应，在 PCR 反应完成后可直接电泳，节省时间。2 Co

实验室里除了做实验更重要的是什么？当然是要会用经费啊！那怎样使用经费又能做好实验又能让老板喜欢？当然是：尽量能省就省啊！毕竟实验室的课题那么多，每天常规的耗材试剂要用那么多，经费也不是很富裕啊。所以还是让万能又贴心的学霸君继续给大家送福利吧，丁香通十周岁生日福利继续，一大波便宜又好用的实验用品，看上随便拿，通通免费！NEST 冻存管NEST 冻存管的管体原料采用聚丙烯，符合 USP Class-6 标准，可承受 121℃/15psi 高温高压灭菌，管盖与管体间有硅胶圈密封，管壁加厚，保证在各种苛刻条件下的密封性完好。无 DNA 酶，无 RNA 酶，无人类 DNA，无内毒素，外旋冻存盖特殊设计，无需密封垫圈，可避免垫圈可能对细胞产生慢性毒性。管体有清晰的白色容量刻度和书写区，方便使用和识别。脂质体核酸转染试剂HieffTransTM 脂质体核酸转染试剂是一种多用途的脂质体转染试剂，适用于 DNA、RNA 和寡核苷酸的转染，对大多数真核细胞具有很高的转染效率。其独特的配方使其可直接加入培养基中，血清的存在不会影响转染效率，这样可以减少去除血清对细胞的损伤。转染后不需要除去核酸 - Hief