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《Cancer Cell》伯豪客户肿瘤外泌体研究新成果

肿瘤外泌体RNA通过激活肺泡上皮TLR3招募嗜中性粒细胞促进肺预转移微环境形成 研究背景 1889年,Stephen Paget通过对大量肿瘤的解剖学研究发现,特定的肿瘤细胞总是倾向于转移到特定的组织器官。假说认为肿瘤细胞只能在适宜的组织器官环境中才能形成转移灶。尽管该发现意义重大,此种现象产生的原因却直到2015年才最终得到解答。Nature杂志在2015年在线刊登了M.D. Anderson癌症中心的Dihua Yu等的最新研究发现,研究人员以神经胶质细胞为研究对象,认为神经胶质细胞分泌的外泌体会改造转移到脑部的肿瘤细胞,提高肿瘤细胞的抗凋亡能力。由此,人们在感叹百年前科学家就已经提出如此重大理论的同时,也渐渐认识到外泌体在肿瘤细胞转移过程中对预转移微环境(pre-metastatic niche)影响的深远意义。然而,这还远不是研究的终点。外泌体影响肿瘤预转移微环境的具体分子机制还依然有待探索。 2016年8月8日,国际著名肿瘤学术期刊《Cancer Cell》(IF:23.214)杂志在线刊登了我国肿瘤研究领域著名科学家,第二军医大学免疫学研究所所长,中国医学

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如何精确巧妙的收集密度梯度组分

在密度梯度离心结束后,我们常需要收集感兴趣区域的组分,如何精确的收集组分成为广大科研者所关注的内容。传统的底部穿刺法和侧面穿刺法,包括一些厂家开 发的底部穿刺取代法有着无法弥补的缺点,首先离心管无法重复使用,特别是对于金属离心管显得无能为力.其次,无论是穿刺法还是取代法都会无法避免的产生分 散层流和拖尾现象,另外,手动穿刺也使实验变得繁琐,不容易掌握。因此,科研工作者们开始寻找一种全新的方法能避免以上缺陷。加拿大BIOCOMP公司自行研发的Piston Gradient Fractionator密度梯度组分收集系统弥补了穿刺法和取代法的缺点,采用专利的喇叭状吸头,其开口直径与试管一致,依靠步进马达带动吸头把组分精确推出,具有无与伦比的分辨率。由于采用喇叭状吸头,与传统的倒置圆锥吸头和多孔吸头不同,它能使液体流速均匀的进入吸头,不会产生分散层流和拖尾现象,从而对样品不会造成扰动及条带混淆。另外,其配有的步进马达,推动吸头的速度范围为0.2-6.5mm/sec,可精确收集极为细小的组分。另外,离心管底部还配有可见光散射系统,对于可见的组分,能直接观察离心效果进行实时分离,使实验变得更为直观

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蛋白质组/蛋白质组学及研究技术路线

基因组(genome)包含的遗传信息经转录产生mRNA,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的mRNA称为转录子组(transcriptome)。很显然,不同细胞在不同生理或病理状态下转录子组包含的mRNA的种类不尽相同。mRNA经翻译产生蛋白质,一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质称为蛋白质组(proteome)。同理,不同细胞在不同生理或病理状态下所表达的蛋白质的种类也不尽相同。蛋白质是基因功能的实施者,因此对蛋白质结构,定位和蛋白质-蛋白质相互作用的研究将为阐明生命现象的本质提供直接的基础。 生命科学是实验科学,因此生命科学的发展极大地依赖于实验技术的发展。以DNA序列分析技术为核心的基因组研究技术推动了基因组研究的日新月异,而以基因芯片技术为代表的基因表达研究技术为科学家了解基因表达规律立下汗马功劳。在蛋白质组研究中,二维电泳和质谱技术的黄金组合又为科学家掌握蛋白质表达规律再铸辉煌。蛋白质组学(proteomics)就是指研究蛋白质组的技术及这些研究得到的结果。 蛋白质组学的研究试图比较细胞在不同生理或病理条件下蛋白质表达的异同,对相关蛋

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细胞培养基本概念和环境

一、细胞培养基本概念 细胞培养是指从体内组织取出细胞摹拟体内出现环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使期生长繁殖,并维持其结构和功能的一种培养技术。 细胞培养 的培养物为单个细胞或细胞群。在医学遗传学研究中应用最广泛的是外周血淋巴细胞、皮肤或纤维细胞和各种能在体外长期生长的细胞系。外周血淋巴 细胞培养 具有时间短、技术简便、可重复取材等优点,它在临床染色体分析中使用最广泛。体外培养细胞株可在培养过程中发生自发的或在外界作用下的转化,成为永久细胞系,也可直接建成永久细胞系,永久细胞系能在体外无取制的传代和生长。永久细胞系通常具有非整倍体细胞和各个细胞的核型不完全相同特征。但细胞 克隆 的细胞系其这一特征可以不明显。二、细胞培养的环境 细胞在体外培养中所需的条件与体内细胞基本相同。1、无污染环境培养环境无毒和无菌是保证细胞生存的首要条件。当细胞放置于体外培养时,与体内相比细胞丢失了对微生物和有毒物的防御能力,一旦被污染或自身代谢物质积累等,可导致细胞死亡。因此在进行培养中,保持细胞生存环境无污染、代谢物及时清除等,是维持细胞生存的基本条件。2、恒定的温度维持培养细胞旺盛生长,必

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细胞的冻存和复苏

一、原理 在不加任何条件下直接冻存细胞时,细胞内和外环境中的水都会形成冰晶,能导致细胞内发生机械损伤、电解质升高、渗透压改变、脱水、PH改变、蛋白变性等,能引起细胞死亡。如向培养液加入保护剂,可使冰点降低。在缓慢的冻结条件下,能使细胞内水份在冻结前透出细胞。贮存在-130℃以下的低温中能减少冰晶的形成。 细胞复苏时速度要快,使之迅速通过细胞最易受损的-5~0℃,细胞仍能生长,活力受损不大。 目前常用的保护剂为二甲亚砜(DMSO)和甘油,它们对细胞无毒性,分子量小,溶解度大,易穿透细胞。二、操作步骤(一)冻存1、消化细胞,将细胞悬液收集至离心管中。2、1000rpm离心10分钟,弃上清液。3、沉淀加含保护液的培养,计数,调整至5×106/ml左右。4、将悬液分至冻存管中,每管1ml。5、将冻存管口封严。如用安瓿瓶则火焰封口,封口一定要严,否则复苏时易出现爆裂。6、贴上标签,写明细胞种类,冻存日期。冻存管外拴一金属重物和一细绳。7、按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-30℃ 1小时)→气态氮(30分钟)→液氮。注意:操作

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随机扩增多态性DNA(Random Amplified Polymorphic DNA)

原理: 此技术建立于PCR基础之上,使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物,对基因组的DNA全部进行PCR扩增,以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列,因此须对每一随机引物单独进行PCR。 单一引物与反向重复序列结合。 使重复序列之间的区域得以扩增。 引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异,经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶电泳分离后通过EB染色以检测DNA片段的多态性。 RAPD的缺点: RAPD图谱中某些弱带重复性较差,而且目前该法在引物长度和序列及应用的引物数目、扩增反应条件等实验技术方面未标准化,影响了不同条件下结果的可比性;每个标记含有的信息量小;有假阳性或假阴性结果;显性标记,无法区分从一个位点扩增的DNA片段是纯合的还是杂合的,无法进行等位基因分析。用在种以上类群间的比较时无法得到可靠的遗传距离。

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生物碱类分离纯化技巧总结

生物碱是天然中药材中分量很重的一类活性成分,多具有显著而特殊的生理活性,在消炎、镇痛、降血压、抗癌等发面表现出越来越重要的药用价值。传统生物碱的分离方法主要有:浸渍、煎煮、溶剂回流、渗漉等,以及新开发的超临界流体萃取技术,微波辅助提取技术,超声辅助提取技术,双水相萃取技术等。成都瑞芬思生物科技有限公司对生物碱这一类物质的分离利用常规方法,总结了一些分离技巧,获得生物碱分离纯化的高效的方法,不但可以提高产品纯度,也可以提高收率。以去甲异波尔定这个生物碱为例,去甲异波尔定属于异喹啉生物碱,按照常规的分离生物碱的方法是,先对药材进行提取、浓缩,再利用乙酸乙酯或者二氯甲烷进行萃取,然后通过硅胶柱柱层析分离,收集到产品的主产品段,再进行二次硅胶柱纯化或者结晶得到纯品;但是去甲异波尔定的提取原药材是乌药,提取浓缩液比较粘稠,而且颜色也很深,直接进行萃取,一方面是乳化严重,另一方面耗费的有机试剂也比较多,大大增加了成本。成都瑞芬思生物科技有限公司通过大量的研发实验,总结了一些技巧:技巧一:采用大孔树脂的富集,同时进行酸碱的合理调整,灵活运用生物碱游离态和盐酸盐形式的转化,使生物碱的分离过程降低了成本

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抗体敲除验证:捍卫实验标准 确保抗体特异性

据估计,因抗体质量不佳, 生命科学领域每年的损失达到 8 亿美元。这也造成了无数的实验失败,浪费了宝贵的资源和科学家的时间。尽管科学界已经意识到这个问题,但目前仍然缺乏抗体验证的整体框架。为了刺激研究界实现更高标准的抗体重复性,国际抗体验证工作组(IWGAV)于 2016 年 9 月份出台了一套抗体验证指南并发表在《Nature Methods》杂志上, 题为「A Proposal for Validation of Antibodies」, 强调了抗体验证需要针对应用和背景来开展。文章提出了五点,以指导特定应用中的抗体验证。• 遗传策略:测定对照细胞或组织中的相关信号,这些对照中的目标基因已利用 CRISPR 或 RNAi 等技术敲除或敲低。• 正交策略:利用不依赖抗体的方法定量多个样品,然后检查依赖抗体和不依赖抗体这两种定量之间的相关性。• 独立抗体策略:找到多个抗体来识别目标蛋白上面的不同表位,一般来说,蛋白质的 C 端具有较好的亲水性、表面可及性和柔性,所以是很好的抗原决定簇区域。在人蛋白质中,约 81% 的蛋白质其 C 末端的 5 个氨基酸残基的小肽是该蛋白质所特有的,制备针

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蛋白质二级结构预测-最邻近方法(NearestNeighboringmethods)

早期,由于数据的缺乏,预测方法多基于单条序列。随着序列和结构数据的增加,人们的研究转向同源序列分析,充分利用隐藏在同源序列中的结构信息,使得结构预测的准确率得到了较大的提高。同源分析的基础是序列比较,通过序列比较发现相似的序列,根据相似序列具有相似结构的原理,将相似序列(或者序列片段)所对应的二级结构作为预测的结果。在Levitt等人建立的相似片段方法中,将待预测的片段与数据库中已知二级结构的片段进行相似性比较,利用打分矩阵计算出相似性得分,根据相似性得分以及数据库中的构象态,构建出待预测片段的二级结构。这一方法对数据库中同源序列的存在非常敏感,若数据库中有相似性大于30%的序列,则预测准确率可大大上升。另一种更为合理的方法是将待预测二级结构的蛋白质U与多个已知结构的同源序列Ti进行多重比对,对于U的每个残基位置,其构象态由多个同源序列对应位置的构象态决定,或取出现次数最多的构象态,或对各种可能的构象态给出得分值。基于上述的策略,最邻近方法在预测二级结构方面包括两个过程,一是学习过程,二是预测过程。在学习阶段,用一个滑动窗口(例如长度为15)扫描已知结构的训练序列,序列个数为几百个,并

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 人工合成镇痛药

人工合成镇痛药 吗啡易成瘾,是其严重缺点。为了寻找更好的代用品,合成了哌替啶、安那度、芬太尼、美沙酮、喷他佐辛、二氢埃托啡等药,它们的成瘾性均较吗啡轻。 哌替啶 哌替啶(pethidine)又名度冷丁(dolantin),为苯基哌啶衍生物,是临床常用的人工合成镇痛药,其结构虽与吗啡不同,但它仍具有与吗啡相同的基本结构,即哌啶环中的叔氮,与叔氮相隔两个碳原子的季碳和与季碳相连的苯环(环A)。 【体内过程】口服易吸收,皮下或肌内注射后吸收更迅速,起效更快,故临床常用注射给药。血浆蛋白结合率约60%,主要在肝代谢为哌替啶酸及去甲哌替啶,再以结合型或游离型自尿排出。去甲哌替啶有中枢兴奋作用,中毒时发生惊厥可能与此有关。哌替啶血浆t1/2约3小时。 【药理作用】 1.中枢神经系统与吗啡相似,作用于中枢神经系统的阿片受体而发挥作用。皮下或肌内注射后10分钟可产生镇静、镇痛作用,但持续时间比吗啡短,仅2~4小时。镇痛效力弱于吗啡,注射80~100mg哌替啶约相当于10mg吗啡的镇痛效力。约10%~20%患者用药

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人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42)酶联免疫分析(ELISA)

人β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42) 酶联免疫 分析(ELISA) 试剂 盒使用说明书 本试剂仅供研究使用目的:本试剂盒用于测定人血清,血浆及相关液体样本中β淀粉样蛋白1-42(Aβ1-42) 的 含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定 标本 中 人β淀粉样蛋白1-42 ( A β 1-42 ) 水平。用纯化的 人β淀粉样蛋白1-42 抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被单抗的微孔中依次加入 β淀粉样蛋白1-42 ,再与HRP 标记的 A β 1-42 抗体结合,形成抗体 - 抗原 - 酶标抗体复合物 ,经过彻底洗涤后 加 底物TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的 β淀粉样蛋白1-42 ( A β 1-42 ) 呈正相关。用酶标仪在 450 nm波长下测定吸光度( OD 值), 通过标准曲线 计算样品 中人β淀粉样蛋白1-42 ( A β 1-42 ) 浓度。 试剂盒组成 试剂盒组成 48孔配置

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实验动物饲养及保管基准(日本)

第一、一般原则管理者等应爱护动物了解实验动物的生理、生态、习性,以对科学负责的态度去饲养和保管实验动物。同时应努力避免实验动物对人的生命、身体及财产的侵害,努力防止实验动物对生活环境的污染。第二、定义本文出现的用语其定义如下:⑴实验动物指为实验等为目的,在特定设施内饲养的哺乳类及鸟类动物。⑵实验等利用动物进行教育、试验、研究及制作生物学制剂等科学利用为目的动物实验⑶设施从事实验动物的饲养,保管及实验的设施。⑷管理者等指管理者、实验动物管理者、实验实施者及饲养人员。⑸管理者管理实验动物及设施者。⑹实验动物管理者辅助管理者直接管理实验动物者。⑺实验实施者施行实验者。⑻饲养者实验动物管理者及实验实施者中从事实验动物饲养及保管者。第三、动物导入1、管理者及实验动物管理者在充分考虑施设所处环境、设施设备状况和饲养能力的情况下,帮助实验实施者导入实验动物。2、实验动物输送时,应充分保证动物健康、安全,并充分考虑预防避免由于实验动物引起事故的发生。⑴为防止和减少实验动物疲劳及苦痛,应选择最短时间的输送方法。⑵对输送中的动物,应提供必要的饲料和水。⑶充分考虑各种实验动物的生理、生态、习性等特征,采取适

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基因测定中使用的生物芯片

生物芯片目前是生物学中的一项关键技术。为了开发生物芯片,科学家和工程师借鉴了计算机产业中的小型化技术、集成化技术、并行处理技术,用来开发适用于进行晶片加工的实验室设备和流程。一般来讲,这些微型芯片上的阵列是由有规则排列的cDNA、寡核苷酸、或蛋白质等样本(sample)所组成的。宏阵列排列(macroarraying)也被称作制作栅格(gridding),就是把大型尼龙过滤器上的cDNA、寡核苷酸、或蛋白质等样本排列起来,以便于通过杂交的方法对它们进行映像(screening);但是对于微阵列而言,样本所占有空间的直径不超过200微米,而且需要进行显微分析。在如此小的空间上面放置如此多的信息,这就使得微阵列具有无法比拟的优势。一个DNA微阵列芯片(也就是基因芯片)只有几平方厘米的大小,却能够容纳几千个样本,每个样本都代表着一类基因。这样一来,人们就有可能设计出一种芯片出来,在单个的这种芯片上可以容纳一个复杂的生物体所具有的所有基因,数目可能达到30000到60000个。DNA微阵列系统(DNA microarray system,也就是基因芯片)具有多种的用途,可以用于变异分析、基因测

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标本的收集与保存

临床检验常见的标本一般包括血液(指血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液,阴道分泌物等,这些标本收集的时间、方法和保存都有一定的要求。一、血液标本有些生理因素,如吸烟、进食、运动、情绪波动、妊娠、体位等均可影响血液中某些成分的变化,有些甚至还有昼夜变化。因此血液标本的采集应尽量避免生理因素干扰,以条件一致为宜,如无法避免,应在标本上注明该因素。1、外周血一般选取左手无名指内侧采血,该部位应无冻疮,炎症,水肿,破损。如该部位不符合要求,以其他手指部位代替。对烧伤病人,可选择皮肤完整处采血。由于部分血液常规检测(如白细胞计数、分类等)受生理因素影响波动过大,比较时宜使条件尽量一致。涉及到体内出、凝血功能的检测项目(如血小板计数,出血时间或凝血时间等)的检测,一定要注意了解患者是否用过抗凝、促凝药物,以便在减少或避免干扰因素的影响。2、静脉血除涉及各种止血和血栓检测等项目需采用抗凝静脉血血浆外,目前绝大多数检测项目的分析检测可直接采用静脉血的血清。在血清检测项目中,有些(如血糖,血脂等)受饮食及昼夜因素影响较大,一般以清晨空腹血标本为宜;有些在血中衰变较快(血清酶活性测定如A

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分子诊断实验方法

生物大分子主要指核酸(DNA和RNA)和蛋白质,通过从分子水平上完成DNA, RNA或蛋白质检测,从而对疾病作出诊断的方法称为分子诊断,目前常用的方法有基因诊断和肿瘤标志物检测两种。基因诊断 基因诊断是用分子生物学的理论和技术,通过直接探查基因的存在状态或缺陷,从基因结构、定位、复制、转录或翻译水平分析基因的功能,从而对人体状态与疾病做出诊断的方法。 人体基因组的类型早在受精卵开始时就已形成,因此在人体发育的任何时期,只要获得受检者的基因组DNA,应用恰当的DNA分析技术,便能鉴定出缺陷的基因,而不论该基因产物是否已经表达。而且,应用这一方法,不仅能够检测单个碱基置换、缺失和插入等,还能发现DNA的多态现象以及遗传病的异质性。基因诊断检测的目标分子是DNA或RNA,反映基因的结构和功能。检测的基因有内源性(即机体自身的基因)和外源性(如病毒、细菌等)两种,前者用于诊断基因有无病变,后者用于诊断有无病原体感染。基因诊断的意义在于不仅能对某些疾病做出确切诊断,如确定某些遗传病,也能确定基因与疾病有关联的状态,如对疾病的易感性、发病类型和阶段的确定等。就目前已经开展的工作而言,外科领域的遗传

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实验动物急救措施

当实验进行中因麻醉过量、大失血、过强的创伤、窒息等各种原因,而使动物血压急剧下降甚至测不到。呼吸极慢而夫规则甚至呼吸停止、角膜反射消失等临床死亡症状时,应立即进行急救。急救的方法可根据动物情况而定。对狗、兔、猫常用的急救措施有下面几种。一、针刺针刺人中穴对挽救家兔效果较好。对狗用每分钟几百次频率的脉冲电刺激膈神经效果较好。二、注射强心剂可以静脉注射0.1%肾上腺素1ml,必要时直接作心脏内注射。肾上腺素具有增强心肌收缩力,使心肌收缩幅度增大与加速房室传导速度、扩张冠状动脉、增强心肌供血、供氧及改善心肌代谢、刺激高位及低位心脏起搏点等作用。当动物注射肾上腺素后,如心脏已搏动但极为无力时,可从静脉或心腔内注射1%氯化钙5ml。钙离子可兴奋心肌紧张力,而使心肌收缩加强,血压上升。三、注射呼吸中枢兴奋药可从静脉注射山梗莱碱或尼可刹米。给药剂量和药理作用如下:尼可刹米:每条动物一次注25%1ml。此药可直接兴奋延髓呼吸中枢,使呼吸加速加深;对血管运动中枢的兴奋作用较弱。在动物抑制情况下作用更明显。山梗莱碱:每条动物一次可注入1%0.5ml。此药可刺激颈动脉体的化学感受器,反射性地兴奋呼吸中枢;同

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白血病分类

佚名 白血病 有几种分类方法。 1.根据病情急缓和白血病细胞成熟程度可分为急性与慢性白血症。急性白血病起病急,病程短,骨髓和周围血中以异常的原始及早期幼稚细胞为主,原始细胞常超过30%。慢性白血病病程缓慢,骨髓及周围血中以异常成熟的白细胞为主,伴有幼稚细胞。原始细胞一般不超过10%~15%。 2.根据增生细胞的类型可分为淋巴细胞性和粒细胞性白血病两类。结合病情急缓和细胞类型,白血病总的可分为4种基本类型:①急性淋巴细胞性白血病(acute lymphocytic leukemia,ALL),②慢性淋巴细胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL),③急性粒细胞性白血病(acute myelocytic leukemia,AML)或急性非淋巴细胞性白血病(acute non-lymphocytic leukemia,ANLL),④慢性粒细胞性白血病(chronic myelocytic leukemia,CML)。 急

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【分享】DNA实验室解决方案之PCR室污染监测及防御

DNA实验室解决方案之PCR室污染监测及防御2012年全国司法及血液中心国际标准DNA实验室观摩会将在明年6月于青岛国际会展中心举行,这次观摩会秉着打造全球顶尖展会的理念,将展示具有世界一流水平,符合国际标准的DNA实验室样板间。并将在展示过程中向参会人员免费发放实验室解决方案,本文就是日前由组委会展示的该系列方案中的一部分。PCR反应最大的魅力是扩增力能与高灵敏度,但易污染一直是困扰各实验室的大问题,极微量的污染就可能造成假阳性反应,破坏试验结果。如何监测与防止PCR污染,是现在各实验室的重要课题。一、污染监测一个好的PCR实验室,必须要时刻注意污染的监测,考虑是否受到污染,如有污染,是何原因造成的。通过有效地监测,采取正确的相应措施,防止或消除污染。对照试验是监测PCR污染的重要手段。1、阴性对照:阴性对照是每次PCR实验都必须做的。它包括了标本对照与试剂对照,通过对照确认样本和试剂是否受到感染。2、阳性对照:它是PCR 反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好、经鉴定是该产物的标本。但阳性对照其对检测或扩增样品污染的

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植物组织中自由水与束缚水含量的测定

自由水和束缚水含量常与植物生长与抗性有密切关系。自由水与束缚水比值较高的植物组织或器官,代谢活动较旺盛,生长也较快;反之则生长较缓慢,但抗性较强。因此,自由水和束缚水的相对含量可以作为代谢活动及抗逆性强弱的重要生理指标。 【原理】 束缚水被细胞胶体颗粒所吸附,水势较低,故不易移动、蒸发和结冰,不能作为溶剂,也不易被夺取。可根据这些特点测定束缚水含量。将植物组织浸入浓糖液中脱水,经过一定的时间后易移动的自由水可全部进入糖液中,组织中剩余的水分可看作束缚水。根据糖液浓度变化可测得自由水量。由植物组织的总含水量减去自由水量,即可求出束缚水量。 【仪器与用具】 阿贝折射仪;电子顶载天平(感量0.1mg);烘箱;称量瓶若干;打孔器(面积0.5cm2左右);烧杯;瓷盘;量筒。 【试剂】 60%~65%蔗糖溶液(重量百分浓度):称取蔗糖60~65g,置烧杯中加蒸馏水40~35g,使总重量为100g,溶解后备用。 【方法】 1. 取称量瓶6个,编号(设三次重复),分别称准重量。 2. 在田间选取生长一致的待测植物数株,选各部位、长势、叶龄等一致的

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新药含量测定的方法学研究

药品的含量是评定药品的主要指标之一,设计其测定方法时,应根据药品特性、剂型、处方、鉴别试验和纯度检查综合考虑,当鉴别试验和纯度检查保证了专属性和纯度的情况下,含量测定方法的选择要着眼于准确性、稳定性和可重复性。此次线上讲座以中药含量测定为主要出发点,对新药含量测定的方法学进行介绍与分享,同时也希望就此方面话题与各位同仁作一次较深层次的探讨。文中鲁莽不当之处,恳请指正。 1.一种新药的含量侧在HPLC检测中,供试品浓度的选取应该遵循什么的原则?浓度多少合适?以定量限做浓度检测的依据吗?10倍的信噪比?遵循最大还是最小浓度原则? 2.做回收率的时候,是取了9分不同含量的样品。我看到有的回收率是取3分不同含量的样品,分别加入其80%,100%,120%.也有的取6分不同含量的样品,加入其80%,100%,120%的对照品。请问:回收率有统一的取样标准吗? 3.关于含量低于万分之一时需要配合别的指标这条原则的理论依据是什么?或者说出发点是什么?怎么说它至少

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