自然调节T 细胞 自然调节T细胞(naturally occurring regulatory T cell，nTreg)的代表为CD4十CD25+Treg。实验发现，小鼠出生后3～5 d作胸腺切除，可诱致多种自身免疫病，但向此类小鼠输注CD4十CD25+T细胞，疾病可以被防止。表明被切除的胸腺中存在着一类行使调节功能的T细胞。它们的特点是组成性高表达IL2受体。链即CD25分子，具有阻遏自身免疫性CD4+ CD25- T细胞增殖的活性。人体中也已确认CD4+ CD25+ T细胞的存在，它们占外周血CD4阳性细胞的5％一10％，除了遏制自身免疫病的发生，还调控其他疾病，包括诱导移植耐受。CD4+ CD25+ nTreg通过抑制CD4+ CD25- 自身反应性T细胞对抗自身免疫病的发生A。新生小鼠胸腺切除后出现组织特异性自身免疫病，回输CD4+ CD25+ T细胞，可使症状消失从π细胞的调节性细胞，现知为CD4+ CD25+ Foxp3+ T细胞。 B。CD4+ CD25+ T细胞以剂量依赖形式对CD3单抗诱导CD25- T细胞的增殖实施反馈调节。 图中将CD25- T细胞剂量设为1

RNA干扰是最近发现的一种功能工具。当RNA导入一个细胞时，最终会引起细胞内互补mRNA的降解，从而导致基因功能活性的阻断。PTGS转录后基因沉默（posttranscriptionalgenesilencing）；一种首先在植物中确定，然后发现在动物中也存在的现象。尽管PTGS最初被描述作一种病毒防御和转位子沉默的内源方法，现在它已经成为一种新的令人激动的研究工具RNAi干扰。协同抑制（Cosuppression）基因沉默的一种特殊情况，来源于转基因的RNA与同源内源基因同时被抑制。静息作用（Quelling）用于在粉色面包霉菌（Neurosporacrassa）中描述协同共抑制。这个术语仅仅用来在真菌中描述沉默。dsRNA双链RNA（Double-strandedRNA）；通常指长的或者全长的RNA双链。这些大的dsRNA在大多数哺乳动物细胞类型中全面启动宿主细胞的关闭（shutdown）；随后细胞开始降低非靶标基因的表达，最终经历凋亡（apoptosis）。siRNA短的（或者小的）干扰RNA(Short(orsmall)interferingRNA);哺乳动物细胞参与引起RNA

彩色免疫金银法（colouredIGSS简称CIGSS）是在IGSS基础上发展起来的一种新方法。其基本原理与彩色显影相似。IGSS方法染色在抗原位点处生成银颗粒经铁氰化钾与溴化钾的作用即被氧化成溴化银，后者与彩色显影剂相接触立即被还原成金属银，而彩色显影剂本身则被氧化，其氧化产物使彩色成色剂由无色变成有色的染料并沉积在银颗粒的部位，金属银变成了银离子。由于染料只能通过彩色显影剂沉积在有银的部位，所以不与组织发生非特异性吸附。以彩色显影人肝组织内HBsAg的操作过程为例：（1）脱蜡至水。（2）0.1%胰蛋白酶37℃10min。（3）Lugol‘s，碘液5min。（4）5%硫代硫酸钠1min。（5）用0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，两次。（6）1%卵白蛋白封闭10min。（7）马抗HBsAg抗体1：1000稀释，37℃1~2h或4℃过夜。（8）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，两次。（9）1%卵白蛋白封闭10min。（10）PAg1：40，37℃45min。（11）0.05mol/lpH7.4TBS振洗5min，两次。（12）双蒸水洗5min，两次。（13）物

实验材料： 1. 动物子宫颈部穿刺或切除所得组织 2. 3T3成纤维细胞 3. 0.25%胰蛋白酶/EDTA 4. KCM：DMEM中添加10%FBS、0.5ug/ml氢化可的松和1×10-10 mol/L霍乱毒素 5. EGF：100ugEGF溶于1ml无菌的UPW中。按100ul分装，在-20℃条件下储存。用10ml的含有血清的培养液配制100ug/mlEGF工作液，按100ul分装，在4℃储存。使用时，用含有血清的培养液稀释（1：100）成最终浓度（10ng/ml） 6. CT：将1.18ml无菌的UPW加入1mg CT，配制成10-5 mol/L CT液，在4℃储存。将100ul 10-5 mol/L CT加入10ml含血清培养液中，制成工作液。过滤除菌后，在4℃储存。使用时，最终浓度为10-10 mol/L 7. 氢化可的松：将1mg氢化可的松溶解于1ml 50%乙醇（v/v，用蒸馏水配制）。然后，按100ul分装，在-20℃储存。最终浓度为0.5ug/ml 8. 不含

试剂及配制 1. HRP和兔（或羊）抗HRP：抗HRP用HRP免疫兔（或羊）获得。 2. 0.075mol/L醋酸钠-0.15 mol/L醋酸铵等量混合液 3. 0.1mol/LHCl和0.01mol/LHCl 4. 饱和硫酸铵溶液 5. 0.01mol/L NaOH 操作方法 1. 取兔（或羊）抗HRP血清5ml，16000r/min离心20min，去沉淀； 2. 于收集的上清中加入HRP(2mg/ml)溶液1ml，室温缓慢搅拌1h，同上离心； 3. 沉淀物用冷生理盐水洗涤3次，弃上清； 4. 于沉淀中加入HRP(2mg/ml)溶液4ml，混匀后，移至小烧杯； 5. 边搅拌边加入0.1mol/LHCl(约10滴)，再用0.01mol/LHCl调pH值至2.4左右； 6. 待沉淀完全溶解，溶液变清时，立即加入0.01mol/LNaOH将pH值调回7.4； 7. 同上离心，去沉淀； 8. 于收集的上清中加入1/10体积的0.075mol/L醋酸钠-0.15 mol/L醋酸铵等量混合液，混匀； 9. 在电磁搅拌下逐滴加入等量饱和硫酸铵溶液，并继续搅拌10m

摘要：荧光条形码标记的单分子检测技术是一种全新的高通量检测基因表达谱、miRNA等分子的技术，其定量结果可与real-time PCR相媲美。由于它的高通量和高精确性填补了基因芯片和real-time PCR之间的技术空白，一经问世大受欢迎，其检测结果频频登载在nature、science、cell等顶级杂志上。NanoString公司研发的荧光条形码标记的单分子检测技术最早诞生于Leroy Hood博士创立的系统生物学研究所（Institute for Systems Biology, ISB），该技术因可大批量检测多个样本多个基因，且定量精准而颇受瞩目，2008年被《Nature Technology》杂志以封面文章的形式报道，报道如下：基因表达谱的检测目前有两种方法：基因芯片和real-time PCR。但它们都需要逆转录或其它的酶促反应，这在一定程度上增加了人为操作及实验反应的误差。因此，Geiss等人研发了全新的直接测定读取mRNA表达量的NanostringnCounter分析系统，无须逆转录及其它酶促反应，只需100ng的总RNA即可检测，具有极高的灵敏度和可重复性，它的

SPRi技术（表面等离子体共振成像）测定生物的相互作用时，很多情况下，需要进行数百次的相互作用与再生。为了满足这种需求，HORIBA Scientific开发了一种结合电化学聚合的表面化学。它通过电聚合将吡咯结合生物分子共聚固定在SPRi BiochipTM(生物芯片)上。使用该技术将受体固定在传感器芯片上，可以再生超过100次而不失去活性。在此我们通过抗卵清蛋白/ 卵清蛋白间的生物相互作用模型来验证此性能。 一、材料和方法 1. 吡咯抗卵清蛋白和吡咯小鼠Ig G结合物的准备与固定 在室温下，将抗卵清蛋白与吡咯-NHS在磷酸盐缓冲液中结合2小时。然后，将抗卵清蛋白在含有50 mM PO4、50 mM NaCl和10%甘油的磷酸缓冲液中脱盐。 依照相同方法将小鼠IgG与吡咯-NHS结合作为阴性对照。 点样溶液（含10%甘油的磷酸盐缓冲液）包含20 mM的自由吡咯和浓度为8 mM的抗体。通过电化学过程，SPRi ArrayerTM(点样仪)可将抗体固定在生物芯片上。工作电极（棱镜金表面）和对电极（位于点样针）之间电压为2V，持续时间100 ms，以完成吡咯抗体共

超滤技术的关键是膜。膜有各种不同的类型和规格，可根据工作的需要来选用。早期的膜是各向同性的均匀膜，即现在常用的微孔薄膜，其孔径通常是0.05mm ～1.0mm。近几年来生产了一些各向异性的不对称超滤膜，其中一种各向异性扩散膜是由一层非常薄的、具有一定孔径的多孔“皮肤层”（厚约0.1m和0.025mm），和一层相对厚得多的（约1m）更易通渗的、作为支撑用的“海绵层”组成。皮肤层决定了膜的选择性，而海绵层增加了机械强度。由于皮肤层非常薄，因此高效、通透性好、流量大，且不易被溶质阻塞而导致流速下降。常用的膜一般是由乙酸纤维或硝酸纤维或此二者的混合物制成。近年来为适应制药和食品工业上灭菌的需要，发展了非纤维型的各向异性膜，例如聚砜膜、聚砜酰胺膜和聚丙烯腈膜等。这种膜在pH1～14都是稳定的，且能在90℃下正常工作。超滤膜通常是比较稳定的，若使用恰当，能连续用1～2年。暂时不用，可浸在1%甲醛溶液或0.2%叠氮化钠NaN3中保存。不同材质及截留分子量（MWCO）的超滤膜性能比较超滤膜相对流速（ml/min/cm2）性能特点聚醚砜，pH范围1～14 3,000 MWCO0.05肽的回收率高5,0

初始T细胞接受抗原和协同刺激因子双重激发后，增殖分化成效应细胞，并逐渐形成记忆细胞。这一过程包括T细胞群的扩增、收缩和记忆三个时相，认为受控于程序化机制，称为Goldilocksmodel。多种调控因素参与三个时相的交替，其中最重要的是抗原刺激的强度，这一点上面已经提到。既包括抗原对TCR的作用，也涉及协同刺激分子对相应受体的激发。而且，这一刺激同时包括强度和持续时间两个方面。 当抗原初始T细胞从DC得到第一和第二信号后刺激很弱时(如不足24h)，不能启动三时相的交替，也无记忆细胞产生。过强的刺激，引起大量效应细胞的增殖，启动随之而来的激活诱导性细胞死亡(AICD)，使抗原特异性T细胞所存无几。这种强烈的克隆收缩，也难以诱导记忆细胞。唯有适量刺激方可完成“扩增―收缩―记忆”所涵盖的三个时相，使记忆性丁细胞成功地分化。适量刺激一档中，还因激发量的差异分别诱导TEM和TOM，已如上述。 人体TEM和TOM的分化及表型特征: 因刺激强度不同，在细胞因子的作用下，分别分化成TEM和TCM，前者为CCR7- CDg2L- ，后者为CD67L+ ，分别以不同的方式介导记忆性应答。

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶，借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)，而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。常用的DNA连接酶有两种：来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接酶。二者的作用机理类似。T4连接酶作用分三步：(1) T4DNA连接酶与辅助因子ATP形成酶－AMP复合物。(2) 酶－AMP复合物结合到具有5’－磷酸基和3’－羟基切口的DNA上，使DNA腺苷化。(3) 产生一个新的磷酸二酯键，把缺口封起来.但是分子生物学试验中主要采用T4DNA连接酶，因该酶在正常条件下，即能完成连接反应。T4 DNA 连接酶是一单链多肽，分子量为68,000道尔顿，它能催化双链DNA上相邻的3羟基和5磷酸末断形成磷酸二脂键。λDNA用EcoRI酶切割后形成的6个片断均具有粘性末端（Cohesive ends），在T4 DNA 连接酶作用下，可连接成原来的线状DNA。　　T4DNA连接酶

1997年2月22日，英国罗斯林研究所的科学家维尔穆特等人宣布用体细胞克隆绵羊获得成功，在世界上引起巨大震动。一时间，克隆绵羊“多利”成为动物界最耀眼的“明星”，其“咩咩”的叫声迅速响遍全球。“克隆”是英文单词“Clone”的音译，其本身的含义是无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂繁殖而形成的纯细胞系，该细胞系中每个细胞的基因彼此相同。克隆技术在现代生物学中被称为“生物放大技术”，它已经历了三个发展时期：第一个时期是微生物克隆，即用一个细菌很快复制出成千上万个和它一模一样的细菌，而变成一个细菌群；第二个时期是生物技术克隆，比如用遗传基因――DNA克隆；第三个时期是动物克隆，即由一个细胞克隆成一个动物。克隆绵羊“多利”由一头母羊的体细胞克隆而来，使用的便是动物克隆技术。在自然界，有不少植物具有先天的克隆本能，如番薯、马铃薯、玫瑰等的插枝繁殖的植物。而动物的克隆技术，则经历了由胚胎细胞到体细胞的发展过程。克隆技术被誉为“一座挖掘不尽的金矿”，它在生产实践上具有重要的意义，潜在的经济价值十分巨大。首先，在动物杂种优势利用方面，较常规方法而言，哺乳动物克隆技术费时少、选育的种畜性状稳定；其次，克隆

关于PCR假阴性问题总结（建议大家看看）PCR的假阳性问题深受重视，但我个人认为PCR假阴性问题相对于临床检测更为严重。其实PCR假阳性的问题是比较单纯的，一般仅涉及污染和引物的非特异性问题。而污染可以通过严格的实验室管理，合理的环境设置，以及加入UNG酶抗污染基本可以解决，而引物的非特异性问题基本属于厂家试剂质量问题。而PCR的假阴性却不同，它涉及了与PCR实验的几乎所有人员和技术环节，十分复杂。就临床而言，大三阳检出率低、甚至于GC镜下都很多时，PCR仍为阴性的事情也经常发生，可见假阴性问题的严重性。就PCR假阴性问题总体来说有如下因素：一． 仪器因素　　PCR实验对仪器的依赖性是很高的，离心机、扩增仪都是造成PCR假阴性的因素。扩增仪的主要问题是孔间差，引起扩增失败可扩增效率降低。而离心机的影响则更容易被忽视。国内使用离心机很少使用离心加速度（XXXg）作为参数指标，而常使用转数作为参数指标，这里就存在着一个问题，由于离心机的大小不同，有效跳心半径也不相同，因此同样的转速所产生的离心力相差很大(有的在数倍以上)，所以在相同的离心时间下，有可能模板并没有离心下来，造成PCR假阴性。

一般性预防1.粘度计的操作环境2.最佳的操作环境：25℃±2℃，湿度45～60%，无尘、无阳光直射和不受加热器或空调影响的地方。3.因粘度计使用音叉振动法，因此，应避免外部的震动，使用稳固的工作台面4.保护内部免受液体的侵入和过度的灰尘影响。使用时注意1.确保测量样品水平，调整水平脚使左右两边的粘度传感器碟片的狭窄部分都处于液体的水平面上。2.样品杯是用有机塑料（PC）做成的，不适用于有机的溶剂。3.当测量有机的溶液体，不使用附属的样品杯，请使用一个大口烧杯。使用后注意1.使用溶剂清除感应器碟片、温度感应探头和保护架上的剩余物料，遗留样品残渣会引起测量错误。2.必须清理样品杯。3.在拆卸连接电缆之前卸下电缆连接接头。4.如何清理感应器碟片和温度感应器？　　用绵纸握住感应器碟片或温度感应探头，向下拉除去样品，然后，使用浸湿溶剂的绵纸清除残余样品。校准注意事项1.采用硅油或矿物油标准液（牛顿流体）进行校准。2.按照标准液规定温度进行恒温，校准前确保温度稳定。3.在校准测量模式下，粘度和温度单位采用mPa.s和℃。两种校准方法：一点校准和两点校准。当测定的范围很宽时，推荐使用两点校准。两点校

1. 细胞内同源重组 这种方法需要在两个DNA分子之间进行重组，第一个DNA分子(即所谓穿梭载体，shuttle vector)含有腺病毒左侧的反向末端重复序列（LITR）、腺病毒包装信号（ψ）等顺式作用元件以及目的基因表达盒和腺病毒基因组的左端一段序列；另一个DNA分子（即骨架载体，backbone vector）与第一个DNA分子的3′端略微重叠，然后继续向右，包含有大部分的病毒基因组序列。两种DNA分子共转染入可以表达腺病毒E1区蛋白的细胞（如293、911以及PERC6等），并发生同源重组，即可得到预期的复制缺陷型重组腺病毒。其缺点是：容易受到亲代病毒的污染，必须经过2-3次的病毒空斑纯化，并通过多次的嗜斑形成方法鉴定重组病毒。另外，重组效率低下，重组腺病毒通常需要花费两周左右的时间。虽说如此，本方法是构建腺病毒载体的经典方法，目前应用于临床的腺病毒载体都是以这种方法构建的。因此，若是构建重组腺病毒的最终目标是成功地应用于临床还是以这种方法为佳。而且难度是相对的，对于一个在构建重组腺病毒方面有着

应用物理或化学方法除去或抑制血液中的某些凝血因子，阻止血液凝固，称为抗凝。阻止血液凝固的化学试剂称为抗凝剂 （anticoagulant）。对抗凝剂的一般要求是用量少、溶解度大、不影响测定。生化检验常用的抗凝剂有以下几种： 1．肝素 是一种含有硫酸基团的粘多糖，其抗凝机理主要是对抗凝血活酶和凝血酶的形成和 活性，阻止血小板聚集。肝素 抗凝血常 用于血 气分析 和部分生化项目的测定，使用1.0g／L 的肝素溶液0.5ml 可抗凝5ml 血液。 2．草酸钾－氟化钠 草酸钾可与血中钙离子生成草酸钙沉淀，从而阻止血液凝固。草酸钾溶解度大，抗凝作用强。氟离子能结合钙而抗凝，但抗凝效果较弱。氟离子可抑制糖酵解中的烯醇化酶，防止糖酵解，若未加氟化钠，血标本中葡萄糖检验地 带网含量将以每小时6 ％的速度下降。而 在氟化钠的存在下，血糖浓度在25 ℃可稳定24 小时，4 ℃可稳定48 小时。因此，草酸钾－氟化钠是血糖测定标本常使用的抗凝剂。

现在许多厂家在挑选激光粒度仪的时候，都感到非常为难。因为一方面对激光粒度仪的了解不太多；另一方面市场上鱼龙混杂，各个厂家都说自己的粒度仪是最好的，不知听谁的好。本文在此给你提供几点参考意见。挑选激光粒度仪首先要十分注重仪器的准确度和重复性。因为粒度仪是一个测试粒度范围的精密仪器，如果它的测试的精确度不好、重复性差，那你就不要选择激光粒度仪。因为这样会给你出错误的数据，无法给你的生产和工艺做出指导，进而耽误您的加工工艺。更重要的是，一台测试不准确的激光粒度仪可导致你与你的供货商的退货、官司，或使你一败涂地。首先，选择激光粒度仪先要看其厂家的技术实力，如何判断厂家的技术实力？首先关注主要发明人是谁，其在颗粒界的知名度如何？是否是这方面的专家，如果其厂家说不出其发明人的姓名和具有什么技术水平，你就要小心，有些可能是侵权产品，买了这种产品将来也等于侵权，要惹上官司。而且这种厂家是干不长的，你买了这种产品要受到连累，并不可能得到长期的技术支持。第二，测试亚微米和微米的激光粒度仪的比较好的理论是全程米氏散射理论，如果其厂家没有水平比较高的技术人员是不可能研究出全程米氏理论的数字模型，光靠偷一点点东

【实验目的】 1． 观察胃的解剖结构，掌握胃的位置、毗邻脏器和淋巴引流。 2． 观察胃和胃癌的组织结构，对比正常胃和胃癌的形态特点。 3． 观察慢性萎缩性胃炎和胃溃疡的形态变化，联系慢性胃炎、胃溃疡与胃癌之间的关系。 4． 观察胃癌和转移的大体标本，联系胃癌的扩散途径。 【实验对象】 正常胃标本和胃底组织切片，慢性萎缩性胃炎、慢性胃溃疡、胃癌和淋巴结转移性腺癌切片，胃溃疡、不同类型胃癌、卵巢转移性肿瘤的大体标本。 【实验内容】 1． 胃的解剖结构　观察胃贲门部、胃体部、胃底部和幽门部，确认胃大弯、胃小弯、角切迹、贲门切迹，注意观察胃黏膜的结构特点。 2． 胃底的组织结构　胃壁四层结构 （1）黏膜层：由单层柱状上皮、固有层和黏膜肌层组成。胃底腺由壁细胞、主细胞、颈黏液细胞和内分泌细胞组成。 （2）黏膜下层：为疏松结缔组织，内含有较多的血管、淋巴管。 （3）肌层：分内环、外纵，两层之间见肌间神经丛。 （4）外膜层：由结缔组织构成，外披浆膜。 3． 慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis) （1）胃黏膜变薄，固有腺萎缩（体积变

要求：1.做RT前必需测RNA浓度，逆转录体系对RNA量还是有一些要求，常用500ng或1ug。2. RT按要求做，一般不会出太大问题。3. PCR，按常规。但如需扩长片段，则对前两步要求较高，需要有完整的cDNA存在，不是单改变Mg2+浓度、退火温度能解决的。1）RT和PCR时的引物设计是不是一定要先知道目的基因的序列？必须在RT时，引物设计有3种方法即a：Random 9mers；b：Oligo dT-Adaptor Primer；和c：特异的下游引物。如果用a和b方法，是扩增的所有的cDNA（理论上），还要用此产物做PCR 的模板继续扩增。如果用c方法，那么要去那里查它的序列呢？问题：在做RT-PCR遇到一怪现象，即对同一动物不同组织扩增同一段基因，结果从一种组织中可以扩出我的目的基因，条带非常的好，而另一组织在同样的条件下却得到许多非特异性的条带，尝试其他条件同样无法得到满意的结果，百思不得其解！（注：已肯定该基因在两种组织中都表达，且内参照在两种组织都可扩增出来）从这两种组织中提取的RNA的量是不一样的，我测过吸光度，差异还很大，会不会和这有关呢？ 请高手指教！解答：1.RT

一、基本原理： 将荧光素标记在相应的抗体上，直接与相应抗原反应.其优点是方法简便. 特异性高，非特异性荧光染色少.缺点是敏感性偏低；而且每检查一种抗原就需要制备一种荧光抗体.此法常用于细菌. 病毒等微生物的快速检查和肾炎活检. 皮肤活检的免疫病理检查。 二、试剂与仪器： 1. 磷酸盐缓冲盐水（PBS）：0.01 mol/L，pH7.4 2. 荧光标记的抗体溶液：以0.01 mol/L，pH7.4的PBS进行稀释 3. 缓冲甘油：分析纯无荧光的甘油9份+ pH9.2，0.2M碳酸盐缓冲液1份配制 4. 搪瓷桶三只（内有0.01 mol/L，pH7.4的PBS 1500 ml） 5. 有盖搪瓷盒一只（内铺一层浸湿的纱布垫） 6. 荧光显微镜 7. 玻片架 8. 滤纸 9. 37℃温箱等 三、实验步骤： 1. 滴加0.01 mol/L，pH7.4的PBS于待检标本片上，10 min后弃去，使标本保持一定湿度； 2. 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液，使其完全覆盖标本，置于有盖搪瓷盒内，保温一定时间（参考：30 min）；

一、医学实验动物的概念及意义 医学实验动物（medical experimental animals）是经人工科学育种、饲养和繁殖，受遗传学、微生物学和寄生虫学控制，供生物医学实验用的动物。其遗传背景明确，来源清楚，具有较好的遗传均一性、对外来刺激的敏感性和实验的再现性。 医学实验动物是生物医学研究不可缺少的部分之一，研究成果的水平高低与动物实验密切相关，它直接影响着研究工作的顺利进行。 二、医学实验动物的类型 （一）普通实验动物（General experimental animals） 1. 遗传学分类 （1）近交系（inbred strain）：是指至少连续20代的全同胞兄弟姐妹或亲子交配培育出来的品系，且品系内所有个体都可追溯到起源于20代或以后代数的一对共同祖先的遗传群称为近交系。近交系动物必须具备以下要求：①具有明确的品种背景资料，包括品系名称、近交代数、生物学特性等；②用于保种及生产的繁殖系谱及记录卡应清楚完整，繁殖方法合理；③经遗传检测质量合格了。 （2）封闭群（closed colony）：在一定的群体内，五年以上不从外部引起新种进行自繁的动