Dietary supplementation with n-3 polyunsaturated fatty acids and vitamin E after myocardial infarction: results of the GISSI-Prevenzione trial --THE LANCET • Vol 354 • August 7, 1999 影响因子：39.06 引言 为什么常食用鱼类脂肪的爱斯基摩人群中爆发冠心病的风险较低？意大利心肌梗死生存研究小组（GISSI-P）在长达3.5年的研究后找到了答案：发生心肌梗死后的患者长期膳食补充90% Omega-3 乙酯高纯度鱼油（以下简称90% Omega-3 乙酯）将产生重要的临床意义和统计学意义，而膳食补充维生素E则无此收益。 研究概况 在1993年10月起至1995年9月年的研究周期内，11324名患者经意大利全国172个研究中心（130家心脏病学机构和42家康复中心）招募入组，患者被随机分为4组： 分别补充服用90% omega-3乙酯高纯度鱼油（1g/日，内含850-882mg 乙酯型的二十

做了 5 年的 MTT 实验 ，耗费了上万块 96 孔板。有成功的喜悦，有失败的沮丧，有好多话要对各位实验同仁说。在这之前，我们先回顾一下 MTT 的原理及操作步骤。实验原理MTT 是一种接受氢离子的染料，可作用于活细胞线粒体中的呼吸链，在琥珀酸脱氢酶和细胞色素 C 的作用下，生成蓝色的 formazan 结晶。formazan 结晶的生成量仅与活细胞数目成正比（死细胞中琥珀酸脱氢酶消失，不能将 MTT 还原，无法形成结晶），且该结晶溶解于 DMSO。利用酶标仪测定波长 490 nm 处的光密度 OD 值，以反映出活细胞数目。实验步骤1. 接种细胞：用含 10% 胎牛血清得培养液配成单个细胞悬液，以每孔合适的细胞数量接种到 96 孔板，每孔体积 180 ul。2. 培养细胞：同一般培养条件，可根据试验目的和要求决定培养时间。3. 呈色：每孔加 MTT 溶液（5 mg/ml 用 PBS 缓冲液 pH=7.4 配制）20 ul。继续孵育 4 小时，终止培养，小心弃去孔内培养上清液，对于悬浮细胞，需要离心后再吸弃孔内培养上清液。每孔加 150ul DMSO，振荡 10 分钟，使结晶物充分融解

1. 2015 年，澳大利亚科学家巴里·马歇尔和罗宾·沃伦。他们发现了导致人类罹患胃炎、胃溃疡和十二指肠溃疡的罪魁——幽门螺杆菌，*性地改变了世人对这些疾病的认识。 相关实验： （1）幽门螺杆菌检测 幽门螺杆菌的直接检查 尿毒酶检查幽门螺旋杆菌 免疫学检测幽门螺杆菌 抗体检测幽门螺杆菌 （2）幽门螺杆菌性质 药物敏感性实验 血凝抑制试验 2. 2014 年 3. 2013 年 4. 2012 年 5. 2011 年，美国科学家布鲁斯·巴特勒、卢森堡科学家朱尔斯·霍夫曼和加拿大科学家拉尔夫·斯坦曼。他们发现了免疫系统激活的关键原理，这使人们对人体免疫系统的认识有了根本性的改变。 相关实验： 酶联免疫吸附实验（ELISA）实验 免疫血清制备方法 细胞免疫荧光步骤 树突状细胞（DC）的获取和培养 人外周血树突状细胞的体外扩增及鉴定 cDNA 文库构建 6. 2010 年，英国科学家罗伯特·爱德华兹。他创立了体外受精技术，因此又被誉为「试管婴儿之父」。至今，全球已有 400 多万人通过试管婴儿技术出生，其中

[试剂及配制]（1）包被液（pH9.6碳酸盐缓冲液） Na2CO3 0.16g NaHCO3 0.29g 蒸馏水加至100ml（2）洗涤液（pH7.4PBS-Tween20） KH2PO4 0.2g Na2 HPO4-12H20 2.9g NaCl 8.0g KCl 0.2g Tween20 0.5ml 蒸馏水加至1000ml（3）封闭液（1%BSA pH9.6 碳酸盐缓冲液）（4）抗原（5）BiO-Ab和Avi-HRP [操作方法] （1）培养板的预处理：在24培养板孔内加0.5ml 0.2%戊二醛（溶于0.1mol/L，pH5.0 PB），37℃，4h，甩去板中的处理液，PBS洗涤3次，每次3min； （2）抗原包被：将适量抗原溶于包被缓冲液中，每孔加入0.5ml，4℃过夜，PBS-T洗涤3次，每次3min； （3）制备细胞悬液：将待测已致敏小鼠处死，取出脾脏，置于加有Han

实验材料： 1. 胶原酶消化的脾脏细胞悬液 2. 高密度牛血清白蛋白（BSA）溶液 3. RPMI 1640培养基（如Life Technologies），4℃和37℃ 4. RPMI-5完全培养基，4℃和37℃ 5. 抗体偶联的绵羊红细胞（EA） 6. 用于流式细胞分析的一抗 7. 用于流式细胞分析的二抗（荧光结合的小鼠抗大鼠IgG和IgM；如Boehringer Mannheim） 8. Beckman GH-3.7和Sorvall HS-4转子 9. 15ml和50ml聚丙烯锥底管 10. 填充棉花和未充填棉花的高压灭菌的9in（约23cm）巴氏吸管，直径60mm的组织培养皿（如Falcon） 实验方法： 1. 将胶原酶消化的脾脏细胞悬液于4℃，280g离心10min，弃上清。用高密度BSA迅速重悬沉淀物，每个脾脏约1ml。 2. 准备BSA柱：将5-6ml细胞悬液加入15ml离心管中，在

蟾蜍心室期前收缩和代偿间歇 【目的】 本实验通过观察在心脏活动的不同时期给予刺激，以观察心肌兴奋性阶段性变化的特征。学习蛙在体心脏舒缩活动和心电图记录方法和技术。 【原理】 心肌每兴奋一次，其兴奋性就发生一次周期性的变化。心肌兴奋性的特点在于其有效不应期特别长，约相当于整个收缩期和舒张早期。因此，在心脏的收缩期和舒张早期内，任何刺激均不能引起心肌兴奋而收缩，但在舒张早期以后，给予一次较强的阈上刺激就可以在正常节律性兴奋到达以前，产生一次提前出现的兴奋和收缩，称之为期前兴奋和期前收缩。同理，期前兴奋亦有不应期，因此，如果下一次正常的窦性节律性兴奋到达时正好落在期前兴奋的有效不应期内，便不能引起心肌兴奋和收缩，这样在期前收缩之后就会出现一个较长的舒张期，这就是代偿间歇。 【预习要求】 1． 仪器 设备知识 参见第二章第

目的 用2-D电泳分析和高通量自动化质谱仪进行人视网膜蛋白的分析鉴定。 方法 人视网膜组织在广东省眼库获取。基于视网膜蛋白的不同溶解度，可以用顺序提取法将不同的视网膜蛋白分离。在2-D电泳中，视网膜蛋白质按等电点（PH3～10）和分子大小被分离，部分作银色进行观察分析。另用Colloidal Coomassie蓝进行染色，用PROTEINEER SP系统将96个大分子蛋白斑点筛选切除，PROTEINEER DP水解仪进行完全自动的蛋白质水解。用于MALDI-TOF-MS分析的样品收集在AnchorChip，并进行作质谱分析，用自动化Mascot进行数据搜索。结果 大部分视网膜蛋白可以在Tris缓冲液（EB1）及进一步的含尿素及CHAPS（分别含量为70%和28%）的缓冲液（EB2）中溶解。只有很少视网膜蛋白可溶解在SDS缓冲液（EB4）中。在2-D电泳中分离出的蛋白质特性与在EB1及EB2中分离出的蛋白质特性相似。很少部分的蛋白质只能经EB2萃取后经2-D电泳分离到。在机器自动化蛋白质分析鉴定中，总的成功检出率为67.8%。特别是那些有较好MS谱图的蛋白分子有着更高的检出率（>9

相关专题 基因组 DNA文库有十分广泛的用途，如用于分析、分离特定的基因片段，用以基因表达调控、人类及动植物基因组工程的研究。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为4大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。 一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无疑问，优质的基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。研究者需要查阅文献，通过经验来选择合适的基因组DNA分离方法，在分离过程中保证DNA不被过度剪切或降解，同时也要尽量保证DNA的纯度。 二、处理基因组DNA 根据研究目的，研究者需要选择合适的载体。不同的载体对基因组DNA的长度有不同的要求，研究者必须选择合适长度的基因组DNA来构建基因组文库。比如，对于黏粒载体(比如Epicntre的pCC1FOSTM、pEpiFOSTM-5、pWEB-TNCTM、pWEBTM)，合适的片段长度大约为40kb;对于BAC载体(比如Epicentre的pIndigoBAC-5、pCC1BACTM)，平均来说，合适的片段长

【目的】规范净化工作台操作与维护工作，确保仪器正常运作。【适用范围】本实验方法适用于微生物检验中净化工作台操作与维护管理。【该SOP变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本SOP的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。【操作及维护规程】1.1操作规程1.1.1使用工作台时，应提前50分钟开机，同时开启紫外杀菌灯，处理操作区内表面积累的微生物，30分钟后关闭杀菌灯（此时日光灯即开启），启动风机。　　1.1.2对新安装的或长期未使用的工作台，使用前必需对工作台和周围环镜先用超静真空吸尘器或用不产生纤维的工具进行清洁工作，再采用药物灭菌法或紫外线灭菌法进行灭菌处理。　　1.1.3 操作区内不允许存放不必要的物品，保持工作区的洁净气流流型不受干扰。　　1.1.4 操作区内尽量避免作用明显扰乱气流流型的动作。　　1.1.5 操作区的使用温度不可以超过60℃。1.2 维护规程及维护方法1.2.1 根据环境的洁净程度，可定期（一般2～3个月）将粗滤布（涤纶无纺布）拆下清洗或给予更换。　　1.2.2 定期（一般为一周）对环境周围进行灭菌工作，同时经常用纱布沾酒精或丙酮等有机溶剂

实验室基础建设一般常用项目：(1)实验台柜包括中央实验台、实验台、边台、仪器台、天平台、药品柜、毒品柜、玻璃器皿柜等。(2)空调通风设施。在新的化验中心，所有的建筑面积均有空调。通风系统包括通风柜（毒气柜）、排风罩（固定式）、活动式排风罩、排气扇等。(3)用水设施包括化验盆、洗涤池、化验水龙头等。(4)安全设施包括消防喷水灭火系统，惰性气体灭火系统，安全柜，紧急事故淋洗器、洗眼器等。(5)供气设施包括供气站、供气板、用气板及其管路系统等。(6)电脑管理网络系统。等等。列出需求清单后后，就是要选择实验室家具设备了，三点首要考虑问题为：1、健康 　　实验室建设要按照人体工程学理论，尤其针对国人的工作习惯和身材情况，对实验室进行设计和合理布局。 　　对试验设备可能产生的有害废气、废水进行特殊设计、处理，保障试验人员的身体健康。　　对实验室的排风系统进行科学设计，使实验室换风率和通风柜面风速达到国际标准的要求。2、安全　　对实验室家具、介质系统进行正确设计、合理选材、规范施工。 　　优化洗眼器及紧急冲淋装置的位置安排，以保证在紧急情况下对事故的及时处理。　　对逃生路线进行充分考虑，最大限度减少

【原理】以醋酸纤维薄膜为支持物，用缓冲液润湿后，将微量血清样品点于膜上，再在电泳槽中进行电泳，可将血清蛋白分离成清蛋白、α1、α2、β、γ球蛋白五条区带，将薄膜置于染色液中，使蛋白质固定并染色后，可看到清晰色带，也可将色带分别于碱溶液中进行定量测定，再计算血清中各种蛋白质的含量百分数。在正常情况下，这些蛋白质各占一定的百分比，在某些病理情况下，某些蛋白质的含量可发生改变，例如：肝硬化患者，清蛋白显著降低，γ-球蛋白可升高2~3倍；肾病综合症、慢性肾炎患者，清蛋白下降，α2-球蛋白、β-球蛋白升高。因此，血清蛋白电泳有一定的临床意义。【操作】1.薄膜准备：将薄膜切成2×8cm（或2.5×7cm）的小片，在薄膜的无光泽面一端1.5cm处用铅笔轻轻划一横线，表示点样位置，将薄膜浸入巴比妥缓冲液中充分浸透（浸泡5~10分钟或预先浸泡好，随时取用）后取出，夹于滤纸中，吸去多余的溶液。2.点样：用血清加样器于无光泽面点样（微量吸管或玻片），沾取血清后垂直轻轻接触加样处，让血清吸入膜内，再拿开加样器。3.平衡：待血清渗入薄膜，将薄膜无光泽面向下，两端平贴在铺有滤纸或纱布的电泳槽支持板上（加血清的一端

SNPs(single nucleotide polymorphism ， SNP ，发音为 “snips”), 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的 90% 以上。 SNP 在人类基因组中广泛存在，平均每 500 ～ 1000 个碱基对中就有 1 个，估计其总数可达 300 万个甚至更多。SNP 所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换 (transition) 或颠换 (transversion) 所引起，也可由碱基的插入或缺失所致。但通常所说的 SNP 并不包括后两种情况。理论上讲， SNP 既可能是二等位多态性，也可能是 3 个或 4 个等位多态性，但实际上，后两者非常少见，几乎可以忽略。因此，通常所说的 SNP 都是二等位多态性的。这种变异可能是转换 (C T ，在其互补链上则为 G A) ，也可能是颠换 (C A ， G T ， C G ， A T) 。转换的发生率总是明显高于其它几种变异，具有转换型变异的 SNP 约占 2/3 ，其它几种变异的发生几率相似。 W

GFP在大肠杆菌中的诱导表达和细菌蛋白的超声破碎抽提 【实验原理】 把含有外源基因的表达载体转化的大肠杆菌在有相应抗菌素和诱导物的条件下培养，可以诱导外源蛋白在大肠杆菌中表达。利用溶菌酶、反复冻融或超声波破碎的方 法将诱导培养的细菌的细胞壁破碎后，可使那些可溶性的外源蛋白释放出来，再利用硫酸铵沉淀、蛋白质层析技术和制备电泳等方法能够将外源蛋白分离纯化出来， 供进一步的研究使用。有些过量表达的外源蛋白往往在细菌中形成不溶性的包涵体，细胞破碎、离心后这些包涵体出现在沉淀中，这样的蛋白需要用高浓度的尿素或 SDS变性处理后才能溶解。超声破碎时要产生大量的热，会引起蛋白的变性。为了避免产生高温，超声时一般使用间隔的脉冲处理，而且应在冰浴中进行。本实验 使用超声波破碎法抽提蛋白，因为表达的外源蛋白GFP（绿色荧光蛋白）比较耐高温，故省去了冰浴。 【仪器、试剂和材料】 1、pGLO转化的大肠杆菌 2、LB培养液 3、氨卞青霉素 4、L-阿拉伯糖

一、原理许多植物需经过一定的光周期（photoperiod）才能开花。并已知叶是感受光周期影响的器官。在一定的光周期条件下，叶内形成某些特殊的代谢产物，传递到生长点，导致长点形成花芽。在自然光照条件下，人为地给予植物以短日照、间断白昼、间断黑夜等处理，以了解昼夜光和黑暗的交替及其长度对苍耳、大豆、水稻等短日作物开花结实的影响。二、 材料与设备：1. 大豆幼苗或苍耳幼苗；2. 黑罩（外面白色）或暗箱；3. 暗柜或暗室；4. 日光灯或红色灯泡（60～100瓦）；5. 光源定时开关自动控制装置。三、 实验步骤当大豆幼苗长出第一片复叶，或苍耳幼苗长出5～6片叶（夜温在18～20℃以上）后，即按下述方法给以不同处理，一般情况下连续处理10d后即可完成。处理光周期开花／不开花短日照每日照光8h（早上八时至下午四时）间断白昼每日中午11.5h至下午2.5h移入暗处（或用黑罩布）间断白昼3h间断黑夜在短日照处理基础上，夜晚12h至凌晨1h照光1h，以间断黑夜对照以自然光照条件为对照。

实验概要： 了解并掌握如何利用升华方法纯化固体产物的方法和原理；了解从茶叶中提取咖啡因的原理和方法，并学会从天然产物中分离纯化有用成分的方法；掌握升华原理及其操作。 实验原理： 咖啡因具有刺激心脏、兴奋大脑神经和利尿等作用，主要用作中枢神经兴奋药。它也是复方阿斯匹林（A.P.C）等药物的组分之一。现代制药工业多用合成方法来制得咖啡因。 咖啡因为嘌呤的衍生物，其化学名称为1,3,7-三甲基-2,6-二氧嘌呤，其结构式与茶碱，可可碱类似。 纯品咖啡因为白色针状结晶体，无臭，味苦；易溶于水、乙醇、氯仿、丙酮；微溶于石油醚；难溶于苯和乙醚。它是弱碱性物质，水溶液对石蕊试纸呈中性反应。咖啡因在100℃时即失去结晶水，并开始升华，120℃时升华相当显著，至178℃时升华很快。无水咖啡因的熔点为234.5℃。 茶叶中含有多种生物碱，其主要成分为含量约1～5%的咖啡因，并含有少量茶碱和可可豆碱，以及11～12%的单宁酸(又名鞣酸)，还有约0.6%的色素、纤

在常规检验工作中，进行毛细血管采血，由于耳垂的血循环境比较差，受外界气温影响较大，不及手指恒定，故较常用手指末梢采血法。但在实际操作中，许多病人抱怨疼痛难忍，甚至产生恐惧感，与检验人员不合作。为此我们受“拍打注射法”启示对手指末梢采血法进行了一些改进。 1 研究方法 选择病人食指或中指指尖内侧作为采血部位。先对采血部位进行按摩，用75%乙醇消毒采血部位的皮肤，待干后用拇指及食指固定病人指尖。先用力捏紧再稍放松，如此重复几次使病人稍放松后用一次性采血针迅速穿刺（跳跃式）达到规定深度（3 mm）。然后把手松开让血液自行流出，或者离穿刺点较远处轻轻挤压，先将第一滴血用消毒干棉球擦去（出、凝血时间测定例外）以后流出的血液即可进行采样。采样完毕后针刺处用消毒干棉球擦净余血后压迫止血。 为了对本法进行评价，我们将门诊及住院病人400人随机分成两组，各200人进行比较。用本法采血者组为试验组，将用一般方法进行采血者组作为对照组。以“很痛”、“有点痛”、“不痛”三种结果作为判定标准。 2 结果 主诉很痛的病人试验组

当实验中途停止或结束时，实验者应站在实验动物的立场上以人道的原则去处置动物，原则上不给实验动物任何恐怖和痛苦，也就是要施行安乐死。安乐死是指实验动物在没有痛苦感觉的情况下死去。实验动物安乐死方法的选择取决于动物的种类与研究的课题。一、蛙类常用金属探针插入枕骨大孔，破坏脑脊髓的方法处死。将蛙用湿布包住，露出头部，左手执蛙，并用食指按压其头部前端，拇指按压背部，使头前俯；右手持探针由凹陷处垂直刺入，刺破皮肤即入枕骨大孔。这时将探针尖端转向头方，向前深入颅腔，然后向各方搅动，以捣毁脑组织。再把探针由枕骨大孔刺入并转向尾方，刺入椎管，以破坏脊髓。脑和脊髓是否完全破坏，可检查动物四肢肌肉的紧张性是否完全消失。拔出探针后，用一小干棉球将针孔堵住，以防止出血。操作过程中要防止毒腺分泌物射入实验者眼内。如被射入时，则需立即用生理盐水冲洗眼睛。二、大鼠和小鼠1 、颈椎脱臼法右手抓住鼠尾用力向后拉，同时左手拇指与食指用力向下按住鼠头。将脊髓与脑髓拉断，鼠便立即死亡。2、断头法用剪刀在鼠颈部将鼠头剪掉，鼠立即死亡。3、击打法右手抓住鼠尾提起，用力摔击其头部，鼠痉挛后立即死去。或用木锤用力击打鼠头部也可致死。

怎样使用凝胶成像系统的定量分析 来源：易生物实验 快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能对任意所选区域进行定量分析,此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品） 关键词：凝胶成像系统定量分析 快捷指南Volumes Quick Guide，此功能能对任意所选区域进行定量分析,此分析可以报告2个结果：相对浓度和绝对浓度（如有浓度标准样品） 1． 选择成像系统或打开已保存的文件(软件可以控制Bio-Rad所有的成像系统如GelDoc,ChemiDoc,VersaDoc,GS-800,FX,如不是Bio-Rad成像系统所摄取的图象，将图象保存为Tiff文件格式，软件也可进行分析处理) 2． Zoom Box，缩放，对图象进行放大观察 3． Transform转化，调节图象的对比度黑白 4． Volume Rect Tool 矩形区域选择，如U1 5． Volume Free hand Tool自由画笔选择区域，可以勾勒出无规则形状,如U2 6． Volumn Contour Tool等高线勾勒区域，自动连接浓度浓度相同的点，如U3 上面3种方法选择

Western Blot为什么必须要用内参?要检测一个基因的表达产物是否正确，或者比较表达产物量的相对变化，首选方法是Western Blot。因为Western Blot操作相对简单方便，既可以定性分析表达产物，同时还可以指示目的蛋白量的相对变化。虽然，顺利的时候Western Blot做起来很简单，可不顺的时候也很令人心烦――做不出结果啦、假阳性啦、结果出现多条带啦、到底是一抗有问题还是二抗有问题啦……毕竟，作为一种有活性的生物大分子，抗体和抗原的反应毕竟不象1+1那么明确，而用这种不确定的试剂来测定同样知之甚少的表达产物，确实是有一定的不确定性的。所以，严谨的Western Blot实验设计中要求有良好的参照体系，对实验结果分析是非常有用。特别是当实验出现问题时，借助参照体系很容易就可以查出问题所在，而不必抓耳挠腮怨天尤人。良好的参照体系通常包括分子量Marker（用来确定蛋白条带对应的分子量大小），空白载体对照（如果是诱导表达体系还应该有诱导前的对照），已知量标准产物的正对照；另外还有内参。可是由于经费限制或者偷懒的原因，国内的不少人做Western Blot往往省略参照，导致

一、徒手制片 1. 徒手制片及特点 徒手制片（切片）一般指徒手用刀片（常用单面刀片）把新鲜的植物材料切成薄片的制片方法。此法在植物制片中具有十分重要的地位，是一种普遍应用的制片方法。 徒手制片的主要优点是：能及时观察研究植物生活组织的结构和天然色彩；方法及用具简单，不需切片机等机械设备，短时间即可完成，这是其他方法所不及的； 徒手制片的主要缺点是：对于微小、柔软、水分过多以及坚硬的材料，难以用徒手切成薄片；对于操作不熟练者，往往切成厚薄不匀或不完整的切片。 2. 徒手制片的方法及注意事项 徒手制片最主要的工具就是刀片，常可用单面保安刀片。要获得良好的切片，首先要保持刀口的锋利，切片前，先准备好一个培养皿盛好清水，同时准备好显微镜、载玻片、盖玻片、刀片等用具，然后拿取材料进行切片。材料可以是新鲜的材料，也可以是经过固定的材料。 切片时，将欲切材料断面和刀片上滴上清水以保持材料湿润。以左手拇指、食指、中指捏住材料，拇指应低于食指，以免切伤手指；材料高出指尖。右手执刀，将刀平放在食指上，刀口朝内，刀面与材料断面平行，然后以均匀快捷的动作自左前方向右后方以臂力带动刀片水平切割