一、概述 使用实验大鼠进行的研究包括老化，肿瘤neoplasia，药效与毒性，含特定菌之动物gnotobiology，龋齿的研究，脂质新陈代谢，维他命之作用，行为，酒精中毒和肝脏硬化，关节炎，苯酮尿症(phenylketonuria)，黄疸，果糖不耐症，高血压、胚胎学，畸胎畸形学，肾性尿崩症及传染性疾病等皆可使用大鼠进行研究。 二、解剖构造 (一) 皮肤 1. 缺乏汗腺，脚垫处可见汗腺遗迹，故散热主要依赖大鼠的尾巴，而刚出生的仔鼠则不具调节体温的能力。 2. 前后各有五只指头。 3. 大鼠尾部皮肤也不同于小鼠，其尾皮并未与皮下组织紧密黏合，故切记应由尾根部提起大鼠而勿随便抓取尾巴的其它地方，以免如同脱手套般地将其尾皮「脱下」。 (二) 头颈部腺体 1.具三对唾液腺。 2.哈氏腺(Harderian gland)：位于眼睛后面，分泌红吡咯紫质，为眼睛周围红色结痂样沉淀物之成分，特别是在冠状病毒(coronavirus)感染所产生之紧迫。 3.冬眠腺(Hibernating gland)：褐色脂肪，暴露

1. 参考书推荐A. 对初学者看什么资料比较好？解答：《抗体技术实验指南》和Antibodies（a laboratory manual， wrote by Ed Harlow ，david lane）两本书不错。2. 针对样品的常见问题B. 做线粒体膜UCP2蛋白的Western Blot （以下简写成Western Blot），提取线粒体后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santa cloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？解答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查Western Blot过程， 提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。C.细胞水平要做western blot，多少细胞提的蛋白够做western blot？ 解答：一般5×10^6就足够了D.同一样品能同时提RNA又提蛋白么？这样对western blot有无影响？ 解答：能，没有问题，我们做过。E. 同一蛋白样品能同时进行

【目的要求】 1.学习坐骨神经–腓肠肌标本的制备方法。 2.分析探讨刺激频率对肌肉收缩的影响。 【原理】 刺激坐骨神经能引起腓肠肌产生收缩。在其他条件不变情况下，不断增大刺激频率可引起肌肉收缩形式发生改变。若刺激频率较小，两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩和舒张所持续的时间（即单收缩）时，肌肉收缩表现为一连串的单收缩；若增大刺激频率，使两次刺激间隔时间大于一次肌肉收缩的收缩期时间，而小于单收缩时，肌肉呈现不完全强直收缩；若继续增加刺激频率，使两次刺激间隔时间小于一次肌肉收缩的收缩期时间，肌肉则表现出完全强直收缩。 【器材】 蟾蜍或蛙；任氏液；二道生理记录仪、双脉冲刺激器、肌槽、常规手术器械、玻璃分针、毁髓针、锌铜弓、解剖盘、烧杯、滴灌、任氏液等。 【步骤】 1、双毁髓：左手握蟾蜍，背部向上。用食指按压其头部前端，拇指压住躯干的背部，使头向前俯；右手持毁髓针，由两眼之间中线向后方划触，触及两耳后腺之间的凹陷处即是枕骨大孔的位置。将毁髓针由凹陷处垂直刺入枕骨大孔，然后针尖向前刺入颅腔，在颅腔内搅

超低温冰箱的维护和保养对于延长其寿命和正常使用尤为重要，如果温度控制不准确常常导致所保存对象受损，对实验结果造成很大影响，从而影响研究工作的正常进行。1、每月清洁一次，以保证其清洁度用干布清除冰箱内外部和配件上的少量尘埃，如果冰箱太脏则使用中性洗涤剂，清洗后再用纯净水彻底冲洗。但不可在冰箱内部和上部冲水，否则会损坏绝缘材料并导致故障。压缩机和其他机械部分不需要使用润滑油。清洁压缩机后部的电扇务必小心。清洁完毕后进行安全检查，确保冰箱插头插好，不要虚接；确保插头没有异常热度；确保冰箱背部的电源电线和分配电线没有破裂和刻痕。2、警报器启动报警当遇到警报器启动报警时，通常可通过以下方面进行检查。第一，检查电源是否有问题或插头是否被拉出插座；第二，检查内部温度计是否超出合适的范围，在此情况下，物品置入会使冰箱升温，并触发警报器；第三，检查是否一次性置入物品过多。3、冰箱冷却不充分检查蒸发器表面是否有冰霜；冰箱门是否开关过频；冰箱背部是否接触墙面；是否放入过多物品。4、冰箱噪音过大检查底板是否坚固；冰箱是否稳固；如不稳，调好活动螺丝以使四角稳固地支撑在底板上；是否有物件接触到冰箱背部。如果制冷效

此种技术的策略是用一种竞争模板与靶序列cDNA同时扩增，使用同样的引物经过PCR扩增之后，能将这些靶cDNA区别开来。竞争模板是一种突变的靶cDNA，它的突变位点为一个新的限制性内切酶位点，这种突变体能够很容易地用PCR定点诱变来得到。也有利用基因组质粒DNA作为竞争模板，在紧靠一小段(10～200bp)内含子序列的两个外显子上选择寡核苷酸引物，按照靶cDNA的长短区分扩增竞争模板的方式进行的，但它的扩增效率可能不如cDNA扩增效率高。扩增之前可以精确定量竞争cDNA模板的浓度，再将其作系列稀释与靶cDNA共同扩增。竞争模板的初始浓度的任何改变，都会影响其最终产物，无论影响PCR定量的哪个因素的改变，对两种模板的影响是相同的，因此二者的扩增产量比率在反应中会保持一致。cDNA靶序列的竞争模板相对含量可以用溴化乙锭染色，电泳凝胶直接扫描法进行测定，或者采用掺入放射性同位素标记dNTP的方法来测定。因为竞争模板开始时的浓度是已知的，则cDNA靶序列的最初浓度能测定出来。 本法能精确测定1ng总mRNA中1pg的cDNA靶序列，可定量10个细胞内的特异mRNA，亦能用于细胞培

与直接原位 PCR 所不同的是，靶基因在扩增时不进行标记基团的掺入，而是标记一段与扩增片段互补的探针，在扩增结束后，应用此探针进行原位杂交。因此，此处主要介绍原位杂交，其余方法同原位 PCR。 一、预杂交1. 试剂与配制2×SSC50%去离子甲酰胺：用 4×SSC 配制（v/v）预杂交液：2×SSC，5% 硫酸葡聚糖，50% 甲酰胺，0.2% 脱脂奶粉 2. 操作方法① 在进行完原位 PCR 扩增后，用 2×SSC 预浸经乙醇脱水、空气干燥的玻片，并简洗15min；② 用 50% 去离子甲酰胺 37℃ 孵育 15min；③加预杂交液 20μl/片，在杂交温度下孵育30min～2hr。 二、杂交1. 试剂与配制杂交液：50% 去离子甲酰胺，5×SSC，10% 硫酸葡聚糖，5×Denhardt’s 液，2%SDS，10mg/ml 变性的鲑鱼精 DNA。 2. 操作方法① 弃预杂交液，加杂交液（含 0.2～5μg/ml 探针）10～20μl /片，覆盖经硅化的盖玻片，石蜡膜封片或橡皮泥封片；② 玻片置于湿盒中，42℃ 杂交 12～18hr（过夜，但不能超过 24hr）。 3. 注意事项①

张 韵 （浙江大学医学院附属第一医院 浙江 杭州 310006） 目的 应用微机生物信号采集处理系统测定蟾蜍坐骨神经干复合动作电位，观察刺激、神经损伤、药物对神经兴奋性、兴奋传导的影响并探讨其机制1 材料和方法 1.1 实验动物 蟾蜍（中华蟾蜍指名亚种，Zhuoshan Toad） 1.2 药品 任氏液，氯化钾 1.3 器材 RM6240微机生物信号处理系统（成都 仪器 厂）、神经干标本盒。 1.4 坐骨神经干制备 蟾蜍毁脑脊髓，去上肢和内脏，下肢剥皮浸于任氏液中。蟾蜍下肢背面向上置于蛙板上，剪去尾椎；标本腹面向上，用玻璃分针分离脊柱两侧神经丛，用线在近脊柱处结扎，剪断神经；将神经干从腹面移向背面。标本背面向上固定，从大腿至跟腱分离坐骨神经。坐骨神经标本置任氏液中备用。 1.5 仪器 连接和参数 神经干标本盒两对引导电极分别接微机 生物 信号处理系统1、2通道。 仪器参数：1、2通道时间常数0.02s、滤波频率3KHz、灵敏度5mV，采

目前肝癌(HCC)是世界上主要的几大高发癌症之一，其发病率和死亡率近年来呈上升趋势，并且术后的复发和转移率很高，但HCC病变的分子机理和涉及的信号通路尚不明确，也有几个用于评估复发和转移的分子标示物被提及，但目前还未用于临床检测中。炎症作为癌症的特征之一，HCC主要发生于肝炎，中国人主要是发病于B型肝炎，欧美则主要是C型肝炎。趋化因子与炎症的发生密切相关，并通过一些信号通路促进肿瘤发生。近年研究发现趋化因子CXCL5(epithelial neutrophil-activating peptide-78)介导炎症并且对中性粒细胞有很强的的引诱作用，此外还能促进多种癌症的增生、迁移和侵袭。但是目前对于CXCL5在肝癌和与肝癌相关的炎症中的作用还不明了。 复旦大学中山医院肝癌研究所癌变与侵袭教育部重点实验室，复旦大学生物医学研究院的研究人员证实趋化因子CXCL5在肝癌的肿瘤生长、侵袭及预后中发挥重要的作用。研究人员通过比较CXCL5在几组具有不同转移性能的肝癌细胞系和919名肝癌患者体内mRNA和蛋白水平的变化，结合磷酸化抗体芯片这种高通量的实验平台发现CXCL5主要通过激活PI3K-Ak

实验材料： 1. 材料来源：人眼、兔眼或者猪眼等； 2. 清洗液：不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加100IU/ml青霉素、100μg/ml链霉素，pH7.2； 3. 器械：无齿显微小镊子2把、培养板和培养皿若干； 4. 培养液：为含15%胎牛血清的DMEM培养液； 实验方法： 1. 取材 ① 摘取动物或人的供体眼球，作常规消毒处理； ② 用刀片沿角巩膜缘环形剪开眼球，除去角膜和虹膜，并用角膜剪刀剪断晶状体悬韧带，取出晶状体，置于培养皿中； ③ 用PBS液洗去黏附在晶状体表面的虹膜色素及玻璃体。弃去洗液； ④ 将晶状体的凸面向下，用4号针头于晶状体赤道部稍靠后的部位环刺一圈，然后用两把无齿显微镊子轻轻分离出晶状体前囊膜； 2. 原代培养； ① 取下晶状体前囊膜后，一般不经洗涤。将其剪成余额1.5mm×1.5mm的植块； ② 用无齿显微镊子挑起植块，平贴于培养板中； ③ 置于37℃恒温箱中约5min，待组织块稍干后便可加入培养液； ④ 按常规方法培养。每周换培养液2次，每次更换2/3的培养液量； 3. 传代培养： 在培养细胞基本融合形成单层

衰老又称老化，通常指 生物 发育成熟后，在正常情况下，随着年龄的增加，其机能减退、内环境稳定性下降、结构中心组分发生退行性变化而趋向死亡的不可逆现象。 一、细胞的寿命机体的细胞不断衰老与死亡，同时又不断地有细胞增殖与新生，呈动态平衡。对多细胞 生物 而言，细胞的寿命、衰老、死亡与机体的寿命、衰老和死亡是不同的概念。机体内个别细胞，甚至是某些器官组织中的许多细胞衰老与死亡，只要不发生在重要器官或组织，并不影响机体的生命。其实，很多细胞的衰老、死亡与更新是很频繁的，例如表皮细胞、部分血细胞等；相反，如果与生命活动密切相关的细胞大量衰老或死亡，如心肌细胞、神经元细胞等等，就会影响寿命。但从某种意义上讲，机体衰老是以细胞总体的衰老为基础的，并且细胞衰老与机体衰老有一定的关系。例如，利用6岁母羊乳腺细胞核通过移核技术制作成的克隆羊“Dolly”与同龄羊相比，提前出现了衰老现象。 体内各种细胞本身寿命差异很大， 一般来说能够保持继续分裂能力的细胞不容易衰老，如造血干细胞、肠隐窝干细胞、表皮生发层细胞等。而分化程度高、又不分裂的细胞如成熟

近年来实验室安全事故频发，各大媒体也不断爆出实验室安全事故，在实验室里，储存摆放着各种各样的试剂或危险品，进行着各种实验。在实验过程中要接 触一些易燃、易爆、有毒、有害、有腐蚀性物品，且经常使用水、气、火、电等，潜藏着诸如爆炸、着火、中毒、灼伤、割伤、触电等危险性事故，这些事故的发生 常会给我们带来严重的人身伤害和财产损失。如果我们掌握相关的实验室安全知识以及事故发生时的应急处理知识，就能够正确、安全地使用相应试剂及实验器械， 从而可以尽可能的减少和避免实验室里安全事故的发生，即使在发生紧急事故时，也能够不慌不乱，把伤害和损失减少到最少程度。 部分生物和化学实验常常伴随着危险，无论怎样简单的实验，都不能粗心大意。在做试验时，如果能够端正态度，认真细致的做好每一道必须的工作，就会避免许多事故的发生。 上海微科生物技术有限公司从欧洲学习并引进防爆理念及防爆冰箱，近几年来也越来越受到实验室安全领域的认可，其中德国 LIEBHERR 的防爆冰箱正式其中的翘楚。 LIEBHERR 同时通过了 ATEX 95 欧洲防爆指令认证；德国 VDE 电气产品安全认证；国际电工委

基本原理 125I-UdR（125I-2′脱氧尿嘧啶核苷）是胸腺嘧啶核苷的类似物，作为DNA合成的前体物，能相当特异地取代胸腺嘧啶核苷掺入到细胞核DNA链上。因此，可用125I-UdR标记体外传代培养的肿瘤细胞作为靶细胞，以外周血分离的单个核细胞或小鼠脾细胞作为效应细胞，进行体外NK细胞活性检测。被效应细胞杀伤的靶细胞溶解后可释放125 I-UdR，用γ-计数仪测定其放射性强度，以125I-UdR释放百分率表示NK细胞的活性。 试剂及材料 1. 125I-UdR ：125I的物理半寿期为59.7d。 2. 胰蛋白酶：用无Ca2+、Mg2+的Hanks液配制成3mg/ml，小量分装，-20℃冻存。 3. DNA酶：用Hanks液配成50μg/ml，小量分装，-20℃冻存。 4. 5-氟脱氧尿嘧啶核苷（5-FudR）用生理盐水配制成1×10-3 mol/L，4℃冰箱保存。 5. 其余材料同上。 操作方法 1. 靶细胞的制备：取培养24～48h的靶细胞1ml（5×105 /ml），分别加入5-FudR 4～6μl和125I-UdR 6μCi，混匀，置37℃培养2h，取出

佚名 旁路激活途径与经典激活途径不同之处在于激活是越过了C1、C4、C2三种成分，直接激活C3继而完成C5至C9各成分的连锁反应，还在于激活物质并非抗原抗体复合物而是细菌的细胞壁成分―脂多糖，以及多糖、肽聚糖、磷壁酸和凝聚的IgA和IgG4等物质。旁路激活途径在细菌性感染早期，尚未产生特异性抗体时，即可发挥重要的抗感染作用。 （一）生理情况下的准备阶段 在正常生理情况下，C3与B因子、D因子等相互作用，可产生极少量的C3B和C3bBb（旁路途径的C3转化酶），但迅速受H因子和I因子的作用，不再能激活C3和后续的补体成分。只有当H因子和I因子的作用被阻挡之际，旁路途径方得以激活。 C3：血浆中的C3可自然地、缓慢地裂解，持续产生少量的C3b，释入液相中的C3b迅速被I因子灭活。 B因子：液相中缓慢产生的C3b在Mg2+存在下，可与B因子结合形成C3Bb。 D因子：体液中同时存在着无活性的D因子和有活性的D因子（B因子转化酶）。D因子作用于C3bB，可使此复

秦惠基 人类正在迈向21世纪，21世纪的社会将是一个信息技术和高新技术十分发达的信息社会。随着现代社会的进步和发展，特别是高新技术在各行各业的广泛应用，使得人类的生活质量和健康水平有了很大的提高。专家预言，21世纪，不仅高新技术发展迅猛，而且高新技术在医学技术领域中的应用也将会更为广泛。届时，随着高新技术在医学领域里应用程度的广泛深入，人类将迎来一个更加美好的新时代。 目前，科学家们正在以前所未有的速度破译生命的基因密码，以进一步揭开生物进化的奥秘。“人类 基因组 计划”目前进展顺利，美国科学家前不久公布了最新的基因图谱。利用基因科学和遗传科学，科学家们现在已经发现了导致癌症和多种遗传疾病的基因，有人预测，基因疗法将取代外科手术、放疗和化疗，从而成为人类21世纪攻克癌症的希望。美国科学家还利用基因技术成功地培育出了脑细胞，这种细胞能够在大脑中存活下来并发挥脑组织功能。这可能会发展成医学研究应用领域里用途最为广阔的疗法之一。

玉米赤霉醇（zeranol，ZER），属于雷索酸内酯类非甾体同化激素。ZER作为牛羊促生长剂，以耳根埋植的形式应用，促进蛋白质的合成，能提高胴体瘦肉率及饲料转化率。但是，玉米赤霉醇具有弱雌激素作用，在动物尿液中的残留会引起人体性机能紊乱及影响第二性征的正常发育，在外部条件诱导下，还可能致癌。ZER排出动物体外后，还可经饮水和食物造成二次污染及环境污染。1998年欧盟禁止将玉米赤霉醇等激素类药物应用于畜禽养殖，我国农业部第235号公告明确规定玉米赤霉醇禁用于所有食品动物，所有可食动物尿液不得检出。由于玉米赤霉醇作为牛羊增重剂效果好，经济回报高，仍有违法使用的现象。目前国际上动物性食品中玉米赤霉醇残留仪器检测方法主要有液－质联用法和气－质联用法。 1. 取样 称取约500 g动物肌肉、肝脏，完全切碎后，匀浆备用；取10枚鲜蛋，去壳，均质备用；取鲜牛奶500 mL，混匀备用。 2.提取 试样5 g，置于50 mL离心管中，加入乙腈10 mL，涡旋混合1 min，离心10 min（5000 r/min），取上清液转移至另一离心管中。重复提取一次，合并两次提取液并移取15 mL于另

单位定义 限制性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 NEBuffer，用1个小时的时间，彻底消化1μg底物DNA所需要的酶量。 酶切反应应在带盖的Eppendorf 管中进行，选用技术数据卡上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用推荐的贮存液稀释成大约1,000 单位/ml。 质量控制 所有质量控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术数据卡上。 非特异性内切酶鉴定 为鉴定非特异性内切酶污染，限制性内切酶与缺少该酶识别序列的超螺旋DNA底物温育。对于RF I型DNA(超螺旋形式)，一个单一的非特异性缺口就会将它转变成RF II型DNA(带缺口环状)。小份的限制性内切酶与1μgDNA在50μl反应体系中，采用推荐的NEBuffer，在推荐的温度下温育4小时。两种形式的DNA在琼脂糖凝胶上很容易区分，可以计算出从RF I 到 RF II的转化率。 核酸酶污染的过夜鉴定 所有的限制性内切酶与1μg 底物DNA在50μl反应体系中，采用推荐的NEBuffer

肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）是从手术切除的肿瘤组织或转移的淋巴结中分离的淋巴细胞，经细胞因子（如IL－2）诱导活化，经大量增殖后回输给原病人。 TIL 细胞是一种较LAK 细胞杀瘤效果好、特异性高，而扩增时对IL－2 的作用浓度要求更低的肿瘤杀伤细胞。 试剂和材料 ● 手术切除的肿瘤组织 ● 淋巴细胞分离液（100％及用1640 配制75％浓度） ● 培养液：RPMI1640 培养液＋10％AB 型血清＋IL－2（200u/ml）或X－VIVO15 培养液 ● 消化液：IV 型胶原酶（230u/g）、I 型DNA 酶3600u 、V 型透明质酸酶（1500u/g） ● 器皿与仪器：75cm2 培养瓶，15ml 聚丙烯试管，手术刀、剪、镊，CO 2 孵箱，三角烧瓶，磁力搅拌器等 实验操作 1.在无菌条件下将切除新鲜瘤体组织去除坏死部分与结缔组织，用RPMI1640 培养液冲洗干净，移至无菌平皿内用手术剪

mabinlin|马槟榔甜蛋白 Macaloid|[商]硅藻土[NL Chemicals公司生产的一种可吸附RNA酶的粘土] MacConkey agar|MacConkey琼脂，麦氏琼脂，麦康基琼脂[可铺成乳糖发酵的指示平板，用以检 测较大量的β-半乳糖苷酶] MacConkey medium|MacConkey培养基，麦氏培养基，麦康基培养基 macroanlysis|常量分析 macrobead|大珠粒，大颗粒 macroconformation|大尺寸构象 macroconidium|大分生孢子 macrocyclic|大环的 macroelement|大量元素 macroevoluion|宏观进化[由大范围的染色体组重排等因素带来的进化，可能跨越种的界限] macrofiber|粗视纤维 macrofibril|巨原纤维，粗原纤维 macrogamete|大配子

YH04幽门螺旋杆菌测仪操作程序一、连接仪器电源线，打开仪器背面电源开关，等待仪器自（自时间4分10秒），自结束，显示屏显示“仪器正常请插入样品”；二、将采集好的样品（呼气卡）两边测窗口标签揭开，插入仪器卡槽内，样品灯亮，仪器自动测（测时间为4分10秒）；三、样品测结束，打印机自动打印报告，显示屏显示测结果；四、首次测结果为不确定的样品，仪器将自动重复测一次，以后一次的测结果为准。YH04幽门螺旋杆菌测仪呼气卡采集程序一、受者需空腹或禁食3小时以上；十五日内未服用抗生素类药物。二、受者在手不直接接触胶囊的情况下，用20毫升温水吞服“14C-尿素胶囊”一粒，应保证吞下，如胶囊粘在食道中，应再饮水适量；三、受者等待（10-15）分钟，取呼气卡一张，撕开密封包装袋，由受者取出呼气卡，从呼气口往卡内呼气约3分钟时完成采样；（呼气过程中，可停歇片刻后继续呼气）四、呼气卡仅限一次性使用，拆开封装后的呼气卡应尽早使用，暴露在空气中的时间不得超过30分钟。

1 营养琼脂成分:蛋白胨 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g琼脂 15～20g蒸馏水 1000mL制法:将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，加入15%氢氧化钠溶液约2mL，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。分装烧瓶，121℃高压灭菌15min。注:此培养基可供一般细菌培养之用，可倾注平板或制成斜面。如用于菌落计数，琼脂量为1.5%;如作成平板或斜面，则应为2%。2 营养肉汤成分:蛋白陈 10g牛肉膏 3g氯化钠 5g蒸馏水 1000mLpH7.4制法:按上述成分混合，溶解后校正pH，分装烧瓶，每瓶225mL，121℃高压灭菌15min。3 乳糖胆盐发酵管成分:蛋白胨 20g猪胆盐(或牛，羊胆盐) 5g乳糖 10g0.04%滇甲酚紫水溶液 25m蒸馏水 1000mLpH7.4制法:将蛋白胨，胆盐及乳糖溶于水中，校正pH，加入指示剂，分装每管10mL，并放入一个小倒管，115℃高压灭菌15min。注:双料乳糖胆盐发酵管除蒸馏水外，其他成分加倍。4 乳糖发酵管成分:蛋白胨 20g乳糖 10g0.04%溴甲酚紫水溶液 25mL蒸馏水 1000mLpH7。4制法:将蛋白胨及乳