【目的】 理解种子萌发所需条件，了解种子萌发形成幼苗的形态变化过程和幼苗类型； 用显微化学方法鉴定种子中的贮藏物质；学习掌握种子萌发的方法，了解有机物在种子萌发过程中的转化和利用；了解种子的休眠、寿命，学会选种和测定种子萌发率的方法，了解其在生产上的意义； 制作种子萌发不同阶段的浸制标本。 【实验内容】 一、种子萌发过程及幼苗形态观察 种子萌发类型 1.子叶出土萌发——黑豆芽、绿豆芽、棉花芽 　　找出下胚轴（子叶——胚根），观察伸长状态。 　　 2.子叶留土萌发——蚕豆、豌豆 　　找出上胚轴（子叶——胚芽），观察伸长状态。 　 　　 玉米子叶留土萌发 胚芽鞘、地中茎（子叶—胚芽鞘节）、 不定根、须根系 　　 二、设计观察种子萌发实验 1.每人10粒种子（菠菜、油菜、大豆任选一种），花盆自备（可用可乐瓶自制10cm深，有底孔）1个，栽培基质自选，根据所选种子查阅资料，设计实验方案。2.观察项目可包括种子发芽率、发育外界条

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳一、原理细菌体中含有大量蛋白质，具有不同的电荷和分子量。强阴离子去污剂SDS与某一还原剂并用，通过加热使蛋白质解离，大量的SDS结合蛋白质，使其带相同密度的负电荷，在聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）上，不同蛋白质的迁移率仅取决于分子量。采用考马斯亮兰快速染色，可及时观察电泳分离效果。因而根据预计表达蛋白的分子量，可筛选阳性表达的重组体。二、试剂准备1、30%储备胶溶液：丙烯酰胺（Acr）29.0g，亚甲双丙烯酰胺（Bis）1.0g，混匀后加ddH2O，37OC溶解,定容至100ml, 棕色瓶存于室温。2、1.5M Tris-HCl(pH 8.0)：Tris 18.17g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至8.0,定容至100ml。3、1M Tris-HCl(pH 6.8)：Tris 12.11 g加ddH2O溶解, 浓盐酸调pH至6.8,定容至100ml。4、10% SDS：电泳级SDS 10.0 g加ddH2O 68℃助溶,浓盐酸调至pH 7.2,定容至100ml。5、10´电泳缓冲液(pH 8.3)：Tris 3.02 g，甘氨酸 18.8 g，10% SDS

组织培养试剂 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基（如，RPMI 1640和DMEM）。培养基的成分包括营养物质（氨基酸，葡萄糖），维生素，无机盐，和缓冲物质。有些成分非常不稳定，因此如果不在使用时新鲜加入就可能会产生问题。务必要使培养基避光保存。因为已知有一些组分和缓冲物质，如HEPES，当暴露于光照下就会分解产生细胞毒性物质。 酚红试剂可保护细胞免受一些HEPES降解所产生的毒性效应，但在使用未加酚红试剂的培养基的应用场合下，如荧光素酶的测定，细胞毒性则仍然是一个问题。 胎牛血清—血清是一种含有白蛋白、球蛋白、生长促进因子和生长抑制因子的极为复杂的混和物。采集血清所用动物的年龄、营养水平、和健康状况可影响到血清中这些成分的数量和质量。因此血清易受显著生物学变异的影响。 添加剂—某些细胞的生长依赖于一些对生命力或细胞分裂必不可少的物质（如，生长因子，微量元素，必需代谢物和蛋白等）。 CO2培养箱—细胞生长所需环境为37℃、相对湿度为95%的CO2培养箱。

把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法： 1. 直接克隆到T载体（或者U载体上） 2. 引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上 3. 将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。 方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，NewEnglandBiolabs公司的Vent酶，以及QIAGEN公司新出的同时具有热启动功能的高保真ProofStart酶，进行PCR扩增，由于这类酶有很强的校读功能，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒，比如NewEnglandBiola

酶联免疫吸附试验是用酶标记的抗体（或SPA）检测未知抗原或抗体的方法。此法敏感性高，特异性强。常用的是ELISA方法，间接法，双抗体法和抗原法。本次试验介绍，酶联葡萄球菌蛋白A免疫分析法。 1、加抗原使之吸附于固相载体（如塑料反应板） 2、洗涤加待测血清 3、洗涤加酶标记SpA 4、洗涤加酶的底物。经酶的催化产生有色产物。 一、材料： 1、聚乙烯塑料反应板（PH9.6时可吸附蛋白Ag） 2、抗原：伤寒杆菌O901煮沸或超声波粉碎抗原 3、待测血清 4、冻干酶联葡萄球菌A蛋白（HRD-proteinA）纯品 5、邻苯二胺（OPD） 6、包被液：0.05M碳酸钠-碳酸氢钠溶液PH9.6 7、稀释液：10%免疫血清PBS-吐温20，防止非特异性吸附 8、洗涤液：0.02MTrisTWeen20,Ph7.4防止非特异性吸附 9、底物溶液：0.02M磷酸氢二钠25.7毫升 0.1M柠檬酸24.3毫升 蒸馏水50毫升 临用前新鲜配制，在上述缓冲液

1、分别加入1/10体积3mol/l NaAc（pH4.5）和等体积5:1酸性酚氯仿溶液，冰浴20min 4℃，1100undefinedg，20min离心。2、吸取上清至一50ml离心管，加入等体积异丙醇，混匀后-20℃放1小时。4、 4℃，110undefinedg，20min离心，弃上清。5、每管加入3毫升的溶液D,溶解沉淀,再用等体积的酚氯仿各抽提一次。6、加等体积的异丙醇，-20℃沉淀2小时。4℃，1000undefinedg离心20min，弃上清。7、加入10ml冰预冷的75%乙醇,洗涤沉淀2次，晾干沉淀。8、溶解和比色8.1、按照0.5ml/g组织的比例加入Milli-Q水200ml，彻底溶解沉淀。8.2、取适量的样品用10mol/ml的Tris稀释一定倍数,测分光光度值。一般来说ratio（260与280的比值加320系数）值，在1.80—2.00之间比较好。8.3、配1.0% 的胶，取500ng样品走电泳鉴定。（一)mRNA的分离与纯化1、称取一定量的oligo（dT）-纤维素，悬浮于1×上样缓冲液中。2、将悬浮液装入填有经DEPC处理并高压灭菌的玻璃棉的1ml玻璃注射器中，柱床体积0.5-1ml，用10ml

糖类和脂类都是以碳氢元素为主的化合物，它们在代谢关系上十分密切。一般来说，在糖供给充足时，糖可大量转变为脂肪贮存起来，导致发胖。糖变为脂肪的大致步骤为：糖经酵解产生磷酸二羟丙酮，磷酸二羟丙酮可以还原为甘油；磷酸二羟丙酮也能继续通过糖酵解途径形成丙酮酸，丙酮酸氧化脱羧后转变成乙酰辅酶A ，乙酰辅酶A 可用来合成脂肪酸，最后由甘油和脂肪酸合成脂肪。可见甘油三酯的每个碳原子都可以从糖转变而来。如果用含糖类很多的饲料喂养家畜，就可以获得肥畜的效果；另外许多微生物可在含糖的培养基中生长，在细胞内合成各种脂类物质，如某些酵母合成的脂肪可达干重的40％。 脂肪转化成糖的过程首先是脂肪分解成甘油和脂肪酸，然后两者分别按不同途径向糖转化。甘油经磷酸化生成α -磷酸甘油，再转变为磷酸二羟丙酮，后者经糖异生作用转化成糖。脂肪酸经 β- 氧化作用，生成乙酰辅酶A 。在植物或微生物体内形成的乙酰辅酶A 经乙醛酸循环生成琥珀酸，琥珀酸再经三羧酸循环形成草酰乙酸，草酰乙酸可脱羧形成丙酮酸，然后通过糖异生作用即可形成糖。但在人和动物体内不存在乙醛酸循环，通常情况下，乙酰辅酶A 都是经三羧酸循环而氧

血浆中骨源性碱性磷酸酶(BAP)活性测定，首先是血球和血浆的分离，这一过程是基于全血样品经血浆分离器将血球截留在分离器的血球容纳膜上，而血浆渗滤穿过转运膜到达反应膜的特定区域，血浆分离完成后，将血浆分离器从反应装置上取下。 第二步是BAP与血浆中其它组分，包括其它来源的碱性磷酸酶(ALP)分离达到特异测定BAP的目的。这一目的实现是根据小儿型BAP(NBAP)和成人BAP(ABAP)分子结构中糖基类型的不同，分别选择相应的亲和素，我们可称之为NBAP-结合蛋白和ABAP-结合蛋白，预先固相在反应膜的特定区域—反应区上。当血浆经过此区域渗滤时，BAP即被结合，而其它组成滤过或被滴加的洗涤液清洗掉，从而完成特异性亲和反应。 第三步方可进行BAP的活性测定显色反应。反应膜固定在反应滑板上，待亲和反应完成后，将反应滑板推动，使反应膜到达反应孔正中，将显色液滴加到反应孔内的反应膜上，在37℃反应一定时间，酶促反应显色的深浅与BAP活性成正比，对照说明书上的标准色板目测判读BAP活性。作为干化学分析技术，结果判断是对照标准板目测做出的半定量分析。其中，标准色板的色阶印刷在说明书上，不同批次的产

做感受态的小女孩刚进实验室，师兄就神秘兮兮的对我说，「小师妹啊，师兄我最近要做一项非常伟大的研究，非常需要你的协助。」我：「（星星眼）好哇，要我做什么？」师兄：「听好了啊，师兄我要将扩增好的启动子序列重组到载体中，再将这个重组 DNA 分子导入细菌体内进行表达喔，是不是非常伟大？」我：「（继续星星眼）嗯嗯」师兄：「这个艰巨的任务现在就交给你啦，很简单的，你先做个感受态出来，再将我构建的质粒转进去就好了。"我：「..........（感受态是什么鬼，能吃吗？）」感受态小科普野生型的细菌由于能产生一种酶，可以迅速降解进入的外源 DNA，所以并不容易转化。而所谓的感受态，就是指受体最易接受外源 DNA 片段并实现其转化的一种生理状态，受受体的遗传性状、菌龄、外界环境因子的影响。受体细胞经过一些特殊方法 (如：电击法、CaCl2 等化学试剂法) 处理后, 使细胞膜的通透性发生变化，成为能容许外源 DNA 分子通过的感受态细胞。进入细胞的 DNA 分子通过复制、表达，实现遗传信息的转移，使受体细胞出现新的遗传性状。听说大肠杆菌转化常用的是化学法 ( CaCl2 法），我赶紧在网上下载了 prot

单链抗体可变区基因片段(scFvs) 已被看做是一类有前景的药物。然而，它们的低亲和力和快速的血浆清除率限制了其广泛的临床应用。在本研究中，我们旨在通过多聚scFv提高scFv的抗体表达，再通过与人软骨寡聚基质蛋白（COMP）48的螺旋结构域结合以抵抗死亡受体5（DR5，肿瘤坏死因子10B）。通过合成一种五聚体，我们称其为共同体，在体外和体内实验中，scFv的活性增加了10倍，并且共同体比它的单体配对物在抗肿瘤活性方面更有效。标准的抗体类药物正被成功地用于临床治疗癌症。然而，由于标准抗体的低产量以及生产的高成本，大肠杆菌表达的单链抗体可变区基因片段(scFv)也许能成为一类不错的可供选择的能够大规模生产的药物，尤其用于前临床研究。然而，scFv同样具有它的缺陷，即快速的血浆清除率和对靶标的低亲和力，这严重地限制了它作为一种治疗药物的应用。目前仅有两类scFvs在临床试验中有效（ESBA105和依芬古单抗），而大量的涉及scFvs的临床试验均被迫终止了。证据表明470kDa大小的分子具有相对延长的循环时间。因此，当需要增加scFv的亲和力而不改变它的结合位点的特异性时，它的多聚物看起来可

免疫纳米金染色与免疫胶体金―银法染色基本相似，也可分为包埋前染色和包埋后染色。下面分别介绍包埋前免疫纳米金单重染色和与免疫酶染色结合的双重染色基本程序： 包埋前免疫，纳米金单重染色按以下步骤进行免疫染色： 1. 含1％正常血清或1%BSA的PBS预孵育20～30分钟； 2. 特异性第一抗体4℃孵育24～48小时后PBS漂洗3次，每次10分钟； 3. 纳米金标记IgGFab，片段(1：100，Nanoprobes)室温孵育2小时或4℃孵育12小时后PBS漂洗3次，每次10分钟，PB漂洗2次，每次10分钟； 4. PB配制的1％戊二醛固定30分钟～2小时，随后PB漂洗2次，每次10分钟； 5. 4℃下银加强漂洗缓冲液漂洗2次，每次10分钟； 6. 4℃下银加强10―15分钟(避光)； 7. 4℃下定影液中定影10分钟后PB漂洗2次，每次10分钟； 8. PB配制1%锇酸后固定30―60分钟；PB漂洗2次，每次10分钟。 9. 按常规电镜标本制作方法进行系列乙醇或丙酮脱水、包埋、超薄切片、电子染色和电镜观察。 免疫纳米金染色法电镜图 环氧树脂包埋前免疫纳米金染

细胞的组织化学方法，是研究细胞成分常用的方法之一。它是利用化学试剂与细胞内的某些物质进行化学反应，从而在细胞局部形成有色沉淀物，再通过显微镜对组织内的生物化学成分进行定性、定位、定量研究。一、Brachet反应一显示细胞内的DNA和RNA（一）原理细胞经甲基绿一呱咯宁混合液处理后，其中的DNA和RNA出现不同的呈色反应，一般认为这是由于带有负电荷的核酸对碱性染料呱咯宁和甲基绿具有亲和力，且这两种染料的作用有选择性，甲基绿染高聚分子的DNA呈蓝绿色，呱咯宁染低聚分子的RNA呈红色。由此对细胞中的DNA和RNA进行定位、定性、和定量分析。（二）方法 l．接种Hela细胞于盖片上并培养24～48小时，使长成单层。2．取出盖片，用PBS（pH7.2）轻轻冲洗盖片表面去除残渣。3．放入Carnoy固定液中固定l小时。4．浸入甲基绿一呱咯宁醋酸缓冲液中30分钟染色。5．取出盖片放入蒸馏水中轻轻漂洗2～3次（2～3秒钟左右），吸去水分。放入纯丙酮中分色2～3秒钟。6. 放入1/2丙酮+1/2二甲苯中5秒钟。7．放入纯二甲苯中透明5分钟。8．滴一滴中性树胶于载玻片上，将盖片标本面朝下封片。9．镜下观察

一、常用生化检测项目分析方法举例 1．终点法检测　常用的有总胆红素(氧化法或重氮法)、结合胆红素(氧化法或重氮法)、血清总蛋白(双缩脲法)、血清白蛋白(溴甲酚氯法)、总胆汁酸(酶法)、葡萄糖(葡萄糖氧化酶法)、尿酸(尿酸酶法)、总胆固醇(胆固醇氧化酶法)、甘油三酯(磷酸甘油氧化酶酶法)、高密度脂蛋白胆固醇(直接测定法)、钙(偶氮砷Ⅲ法)、磷(紫外法)、镁(二甲苯胺蓝法)等。以上项目中，除钙、磷和镁基本上还使用单试剂方式分析因而采用一点终点法外，其它测定项目 都可使用双试剂故能选用两点终点法，包括总蛋白、白蛋白测定均已有双试剂可用。 2．固定时间法　苦味酸法测定肌酐采用此法。 3．连续监测法　对于酶活性测定一般应选用连续监测法，如丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、碱性磷酸酶、γ谷氨氨酰基转移酶、淀粉酶和肌酸激酶等。一些代谢物酶法测定的项目如己糖激酶法测定葡萄糖、脲酶偶联法测定尿素等，也可用连续监测法。 4．透射比浊法　透射比浊法可用于测定产生浊度反应的项目，多数属免疫比浊法，载脂蛋白、免疫球蛋白、补体、抗“O”、类风湿因子，以及血清

细胞培养基的基本要求1、营养成分：氨基酸、单糖、维生素、无机离子与微量元素。2、促生长因子及激素3、渗透压4、pH5、无毒、无污染细胞培养基组成及作用 1、氨基酸组成蛋白质的基本单位。不同种类的细胞对氨基酸的要求各异，但有几种氨基酸细胞自身不能合成，必须依靠培养液提供，这几种氨基酸称为必需氨基酸。其中谷氨酰胺是细胞合成核酸和蛋白质必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。 必需氨基酸包括L-谷氨酰胺、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-缬氨酸等。2、维生素维持细胞生长的生物活性物质，在细胞代谢中起调节及控制作用。在细胞培养中，尽管血清是维生素重要来源， 但是许多培养基中添加了各种维生素以适合更多的细胞系生长。 脂溶性维生素如：A、D、E、K。 水溶性维生素如：B1、B2、B6、B12、泛酸、叶酸、生物素、C、烟酰胺等。 许多维生素参与构成各种酶的活性基团的成分，没有它们，酶便没有活性，代谢活动将无法进行。 VA是细胞合成糖蛋白时寡糖基的载体，对上皮细胞有重要的维护作用。VD参与调节钙的吸收。VE是抗氧剂，

摘要： 介绍5种瞬时转染分析法：瞬时转染分析法、稳定转染分析法、体外转录分析法、转基因分析法和同源重组分析法. 1.瞬时转染分析法 目前有很多功能性分析方法用于研究转录调控,最常用的方法是瞬时转染分析法.该方法是通过一定的转染程序将含目的调控区的质粒导人培养细胞.在典型情况下,调控区调控“报告基因”的转录.报告基因是在mRNA和 蛋白质 的水平上都易于被正确检测到的基因 .产生的质粒在培养细胞中转录后,在特定时刻测定从报告基因上合成的mRNA或蛋白质,以评价调控区的活性.人们将这种分析方法称为瞬时转染分析,因为此时质粒仍然以附加的形式存在,很少整合进宿主 基因组 .因此,mRNA或蛋白质产物必须在短时间内(1～3天)进行测定,否则随着细胞的生长和分裂,质粒会被降解或稀释.虽然瞬时转染分析法具有多种局限性,但该方法仍然常用于对顺式作用 DNA 序列和调控 基因表达 的反式因子进行初步分析. 瞬时转染分析法快捷、简单,易

物种的遗传多样性在本质上是DNA 一级序列的多样性。近年来，随着DNA 测序技术的迅速发展和日益普及，DNA 测序在遗传多样性的研究中正在起着越来越大的作用。本章将介绍目前在遗传多样性研究中常用的一种手动和一种全自动双链DNA 测序方法。 1 DNA 模板的制备 在遗传多样性的研究中，由于样本量一般都较庞大，因而DNA 测序的速度就成了很关键的因素。因此，这类研究中常常直接测定纯化的PCR 双链产物而不大采用克隆技术。本节介绍本实验室常用的从PCR 产物制备测序模板的方法，即低熔点胶回收法。 （1）制备1.5％～2.0％的琼脂糖凝胶，待其充分凝固后，在离点样线5cm 左右处切下宽约1cm 的胶条，在切出的槽中倒入预先煮沸的低熔点琼脂糖胶。 （2）低熔点胶凝固后，将待纯化的PCR 反应液全部点样，恒压100V 左右进行电泳，直至扩增片段进入到低熔点胶中部。在360nm 紫外光下，将已进入低熔点胶的条带切下，放入1．5ml离心管中。 （3）离心，将胶块压缩到管底，然后补加 TE 至 500μl。于 68℃水浴，将低熔点胶熔化，再迅速加入等体积的水饱和酚并混

佚名 糖异生的途径基本上是糖酵解或糖有氧氧化的逆过程，糖酵解通路中大多数的酶促反应是可逆的，但是糖酵解途径中己糖激酶、磷酸果糖激酶和丙酮酸激酶三个限速酶催化的三个反应过程，都有相当大的能量变化。因为己糖激酶(包括葡萄糖激酶)和磷酸果糖激酶所催化的反应都要消耗ATP而释放能量，丙酮酸激酶催化的反应使磷酸烯醇式丙酮酸转移其能量及磷酸基生成ATP，这些反应的逆过程就需要吸收相等量的能。因而构成“能障”，为越过障碍，实现糖异生，可以由另外不同的酶来催化逆行过程，而绕过各自能障，这种由不同的酶催化的单向反应，造成两个作用物互变的循环称为作用物循环或底物循环。 (一)由丙酮酸激酶催化的逆反应是由两步反应来完成的 首先由丙酮酸羧化酶催化，将丙酮酸转变为草酰乙酸，然后再由磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶催化，由草酰乙酸生成磷酸烯醇式丙酮酸。 这个过程中消耗两个高能键(一个来自ATP，另一个来自GTP)，而由磷酸烯醇式丙酮酸分解为丙酮酸只生成1个ATP。 由于丙酮酸羧化酶

　小样本病例随访资料统计分析 　　随访病例较少时，可按下法求不同时期的生存率（或缓解率）及其统计学意义分析。 　　一、资料统计方法和曲线描绘分析 　　例23.3某单位用甲、乙两法治疗何杰金病。甲法治疗15例中已复发9例；乙法治疗14例，有4例复发。两组随访情况如表23-3。 　　先以甲疗法为例说明不同随访时期的缓解率及其标准误。演算结果如表23-4。 表23-4 甲、乙两法治疗何杰金病随访天数 甲疗法 乙疗法 已复发者 尚未复发者 已复发者 尚未复发者 141 1446+ 505 615+ 364 836+ 296 570+

题记科研之路，一入侯门深似海，从此悠哉是路人~实验之殇，雄关漫道真如铁，怎么老是撞到铁今天，老蔡就陪各位铁兄铁姐啃一块难啃的铁块-如何实现动物体内的基因转染？所谓基因转染，通俗一点说，主要指基因上下调（即 Gain of function OR loss of function）。基因工程小鼠-经典的动物体内基因干预模型最经典传统的动物体内基因干预，当属基因工程小鼠了。基因工程小鼠包括转基因小鼠，（TG mouse,transgenetic mouse），敲除小鼠（KO mouse,Konckout mouse），敲入小鼠 （KI mouse,Knockin mouse）。在引入 Cre-loxP 系统后，又发展了组织特异性 TG 和 KO 小鼠。基因工程小鼠对生物医药研究与研发发挥了巨大的作用，但也存在不少的限制因素：1）从受精卵开始的基因干预，经过发育的长时间复杂代偿，所表现出来的功能表型和实际的基因功能表型可能存在巨大的偏差。2015 年 8 月份，nature 杂志发表了 Didier Stainier 研究小组发现受精卵敲除 egfl7 基因和成年后用 RNA 干扰阻断 eg

相关专题 在 western blot ting 方面，本文绝对是一个新手，目前正准备磷酸化蛋白的 Western，急需这方面的实验技术操作步骤和一些注意事项的指导。在网络上搜集整理了一个 western blot 实验达人的建议，供大家参考。 我做了很久的 western blot，尤其是 phospho-抗体，可以算是达人了。我根据自己的经验，对磷酸化蛋白之 western blot 提出以下建议，供刚入门的同仁参考： 1. 一定要在 lysis buffer 中加入蛋白酶抑制剂，还要加入一定量的磷酸酶抑制剂，否则即使 band 压出来也会很浅，结果也不可信。 2. 加一抗后最好 4 度过夜，保证抗体有充分的结合时间。因为磷酸化的蛋白只占总的蛋白量的极少部分。4 度也可使一抗重复使用多次。毕竟磷酸化的抗体都挺贵的。二抗则室温 1 小时即可。 3. 磷酸化抗体的好坏是一个关键因素，所以要选择好的厂商。个人认为，Cell signaling 公司做的磷酸化抗体不错，尤其是 MA