抗原的制备 　　除完整的细胞可作为抗原外，各种不同的细胞内存在的各种分子量不同的物质，也都具有全抗原或半抗原的性质，某种抗原物质可能是某一类细胞所特有的，可作为这种细胞的一个标志。由于细胞存在着许多性质不同的抗原物质，有时要从这众多的物质中提取、纯化某种抗原物质，以供科学研究之用。 　　一、抗原的提取 　　抗原的制备是一件十分细致的工作，要制备一个高纯度的抗原，需要付出艰巨的努力，制备工作涉及物理学、化学和生理学等许多领域的知识。根据物理或化学特性建立起来的分离、纯化方法的主要原理不外乎科二个方面：①利用混合物中几个组分分配率的差别将他们分配到可用机械方法分离的两或几个物相中，如盐析、有机溶剂抽提、层析和结晶等；②把混合物置于单一物相中，通过物理力场的作用使各组分分配于不同的区域而达到分离的目的，如电泳、超速离心和超滤等。由于组织细胞内存着许多分子结构和理化性质不同的抗原物质，其分离方法也不一样，就是同一类大分子物质，因选材不同，所使用的方法也很大差别。因此很难有一个通用的标准方法供提取任何生物活性物质使用，所以在提取前必须针对所欲提取的物质，充分查阅

免疫组织化学技术（immunohistochemistry）或免疫细胞化学技术（immunocytochemistry）是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，即抗原与抗体特异性结合的原理，通过化学反应使标记抗体的显色剂 (荧光素、酶、金属离子、同位素) 显色来确定组织细胞内抗原(（多肽和蛋白质），对其进行定位、定性及定量的研究的一种方法。众所周知，抗体与抗原之间的结合具有高度的特异性。免疫组化正是利用这一特性，即先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来，以其作为抗原或半抗原去免疫小鼠等实验动物，制备特异性抗体，再用这种抗体（第一抗体）作为抗原去免疫动物制备第二抗体，并用某种酶（常用辣根过氧化物酶）或生物素等处理后再与前述抗原成分结合，将抗原放大，由于抗体与抗原结合后形成的免疫复合物是无色的。因此，还必须借助于组织化学方法将抗原抗体反应部位显示出来（常用显色剂DAB显示为棕黄色颗粒）。通过抗原抗体反应及呈色反应，显示细胞或组织中的化学成分，在显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞或组织原位确定某些化学成分的分布、含量。组织或细胞中凡是能作抗原或半抗原的物质，如蛋白质

基因工程抗体活性及亲和力的测定 基因工程抗体活性的测定方法主要采用免疫学的常规手段，如免疫荧光技术，免疫酶技术，放射免疫分析技术(RIA)等。表达的抗体片段如Fv、ScFv、VH等缺少完整抗体的恒定区即Fc段，常规ELISA方法中酶标二抗无法与之直接反应，制备可变区的抗体方法又非常复杂和困难。因此，主要采用免疫竞争抑制法，即通过抗体如ScFv与相应McAb对抗原结合的竞争抑制，间接测定抗体的活性，但需要所表达抗体具有高亲和力。另外，可以表达抗体的融合蛋白，如噬菌体抗体的表达，抗体片段如ScFv与M13噬菌体基因Ⅲ产物gp3融合，通过M13 McAb来测定ScFv抗体的活性。 亲和力（affinity)是指抗体结合部位(可变区)与抗原决定簇的结合强度，是对结合强度的动力学量度。亲和力的表达方式： Ab(抗体)＋Ag(抗原)＝AbAg(抗原抗体复合物) Ka为结合常数；Kd为解离常数；按照质量作用定律，复合物形成速率与反应物的浓度成比例，平衡时，结合与解离的速率相等。 Ka(Ab)(Ag)=Kd(AbAg) K=Ka/Kd=Kd(AbAg) K=Ka/Kd

制备好抗原后，就要进行动物免疫了，免疫这一步除了动物自身的因素外，实验者也要有良好的计划才能得到更好的免疫效果。这里就几个常见的问题作一下简单的讨论。 动物的选择 常见的可以用来制备抗体的动物有：小鼠（Mouse）、大鼠(Rat)、豚鼠(Guinea pig)、仓鼠(Hamster)、兔(Rabbit)、绵羊(Sheep)、山羊(Goat)、马(Horse)、驴(Donkey)、奶牛(Cow），还有的还用鸡或者鸭的。选择动物无非就是考虑两个问题，第一个问题是能否具有较好的免疫效果。特别是对于抗原是蛋白质的情况，为了保证免疫成功，就要求宿主动物与抗原来源物种之间需要有较远的亲缘关系，如果不太确定亲缘关系的远近，可以把抗原的序列与被免疫的动物相应的蛋白的序列进行一个对比，优先选择同源性较低的物种进行免疫。选择动物的第二个问题是抗血清产量的问题，其实很多情况下需要的血清量就很大程度上限制了选择余地。根据实验目的不同，抗血清的用量也有所不同。比如说只想做几次Western Blot只需要一点点血清就够了，此时就可以选用小鼠这样的小动物，而如果想生产二抗作为商业使用，则可选用羊、驴

摘要：介绍一种采用双波长（532nm和635nm）激光器作为激发光源，基于激光共聚焦原理设计的生物芯片扫描仪。它采用一个光电倍增管分时实现cy3与cy5两种荧光信号的检测。生物芯片的横向扫描由远心f-θ扫描物镜与振镜实现，纵向扫描由步进电机驱动精密导轨实现。分析了激光扫描光路及光电倍增管对生物芯片扫描仪的分辨率、信噪比及灵敏度的影响.实验结果表明，本扫描仪的分辨率可达到5μm，信噪比高达103，检测灵敏度最高为1fluor/μm2，扫描速度快，cy3与cy5之间串扰小。生物芯片（biochip）是20世纪90年代中期发展起来的一项尖端技术，它以玻片、硅片或尼龙等为载体，在单位面积上高密度地排列大量的生物材料，从而实现一次试验能同时检测多种疾病或分析多种生物样品的功能。生物芯片可广泛应用于药物研究、疾病诊断、基因结构与功能研究等领域。生物芯片采用分子杂交原理进行工作，其基本做法是将要检测的样品加以荧光染料标记，然后与已知结构的生物芯片进行充分杂交，再加以洗脱后，用生物芯片扫描仪获得发生杂交反应位置处的荧光信号，并以图像形式显示出来。生物芯片扫描仪可分为基于光电倍增管（PMT）的激光共聚焦

一周龄Wistar大鼠，断颈处死，于75%乙醇浸泡15分钟，无菌取出胰脏，于冰冷无菌D-Hanks液中漂洗，用眼科剪仔细清除脂肪、包膜、血管等胰外组织，转入青霉素小瓶中。加入少量无菌D-Hanks液，用眼科剪剪成0.1-1.0mm3大小的碎片，用滴管轻轻吸出上层细小脂肪碎块和油滴，再用无菌D-Hanks液反复清洗8~10次，加入10倍体积无菌消化酶液[胰蛋白酶-胶原酶消化液：0.05g胰蛋白酶(Sigma)，0.025g Ⅴ型胶原酶(Sigma，663U/mg)，0.05g葡萄糖。溶于100 mL无Ca2+、Mg2+的0.01mol/LPBS（pH值为7.4）溶液，用0.22μm微孔滤膜滤菌]，38℃±1℃消化，消化过程中不断震荡，10分钟后吸出上面酶液弃去，用无菌D-Hanks液将组织块清洗2~3次，加入新鲜酶液继续消化，重复上述步骤。此时组织块边缘模糊，再将组织块浸入消化酶液中，38℃±1℃消化10分钟，将消化酶液与组织块分开，组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化；而原消化酶液1500rpm离心10分钟，取沉淀即为消化下的细胞，重新用无菌D-Hanks悬浮，离心，重复1~2次，再用培

一、蛙或蟾蜍坐骨神经－腓肠肌标本的制备 1. 实验原理　蛙或蟾蜍等两栖类动物的一些基本生命活动和生理功能与温血动物相似，而其离体组织生活条件易于掌握，在任氏液的浸润下，神经肌肉标本可较长时间保持生理活性，因此，在生理学实验中常用蛙或蟾蜍坐骨神经腓肠肌离体标本来观察神经肌肉的兴奋性、兴奋过程以及骨骼肌收缩特点等。 2. 实验器材与药品　蛙类手术器械和药品1套，包括：蛙板、小玻板各1块，粗剪刀、直剪刀各1把，大镊子、小镊子各1把，眼科剪刀1把、探针1根、玻璃分针2根，大烧杯、小烧杯各1个，滴管1支，培养皿1个，棉线，任氏液，锌铜叉。 3. 实验方法和步骤 （1）破坏脑脊髓：取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净。左手握住蟾蜍，用食指压住头部前端使头前俯，右手持刺蛙针从枕骨大孔向前刺入颅腔，左右搅动捣毁脑组织，然后将刺蛙针退到枕骨大孔，不拔出而是将其尖转向后插入脊柱管中捣毁脊髓，插入椎管时，蟾蜍后肢立即失去紧张性，多数情况出现尿失禁。若脑脊髓破坏完全，可见蟾蜍四肢松弛，呼吸消失。 （2）剪除上肢和内脏：在骶髂关节上0.5～1.0cm处用粗剪刀剪断脊柱。用镊子夹住后端脊柱，以剪刀沿

迟发型超敏反应中Thl 介导的效应机制 参与迟发型超敏反应(DTH)的效应T细胞，旧称TDTH或TD，包括Thl、Th2和CTI。其中起作用的主要为Thl细胞。在抗原的激发下，Thl分泌许多细胞因子和可溶性介质，引起DTH。这是以单核／巨噬细胞浸润为主的局部性炎症。 Thl需识别APC上MHCⅡ类分子与抗原肽复合物而活化，并发生特异性克隆扩增。许多APC如M9、DC及激活的血管内皮细胞均可参与Thl的活化。一般来说，在致敏阶段，最初活化的为CD4Thl细胞，但在有些情况下也有CTL的激活和参与。进入效应相的Thl细胞通过分泌多种细胞因子(如IFN-γ、IL-3、GMCSF)，使M中和其他炎症细胞富集与活化。迟发型超敏反应一般在再次接触抗原24h后发生，常在48～72h达到高峰。 活化的Thl细胞除了产生细胞因子，还能分泌趋化因子和细胞毒素。各种趋化因子使血流中的单核细胞先黏附于血管内皮细胞上，然后从血管内迁移到周围组织中。在这一过程中，单核细胞分化为MQ并被激活。活化的Mrp吞噬与杀伤病原体，并增强MHCⅡ类分子与黏附分子的表达，成为更有效的APC。

一、洗涤方法：1. 用水刷洗：可以洗去可溶性物质，又可使附着在仪器上的尘土等洗脱下来。2. 用去污粉或合成洗涤剂刷洗：能除去仪器上的油污。3. 用浓盐酸洗：可以洗去附着在器壁上的氧化剂，如二氧化锰。4. 铬酸洗液：将8g研细的工业K2Cr2O7加入到温热的100mL浓硫酸中小火加热，切勿加热到冒白烟。边加热边搅动，冷却后储于细口瓶中。二、洗涤具体步骤：1. 先将玻璃器皿用水或洗衣粉洗刷一遍。2. 尽量把器皿内的水去掉，以免冲稀洗液。3. 用毕将洗液倒回原瓶内，以便重复使用。（洗液有强腐蚀性，勿溅在衣物、皮肤上。铬酸洗液有强酸性和强氧化性，去污能力强，适用于洗涤油污及有机物。当洗液颜色变成绿色时，洗涤效能下降，应重新配制。）4. 含KMnO4的NaOH水溶液：将10gKMnO4溶于少量水中，向该溶液中注入100mL10%NaOH溶液即成。该溶液适用于洗涤油污及有机物。洗后在玻璃器皿上留下MnO2沉淀，可用浓HCl或Na2SO3溶液将其洗掉。5. 盐酸-酒精（1:2）洗涤液：适用于洗涤被有机试剂染色的比色皿。比色皿应避免使用毛刷和铬酸洗液。6. 洗净的仪器器壁应能被水润湿，无水珠附着在上面

【原理】 肺炎支原体快速检测卡可检测血清中的肺炎支原体lgM抗体。患者的血清样品分别加入两个测试孔内，当样品沿膜扩散时，分别加入3滴抗人lgM碱性磷酸酶复合物、3滴洗液和2滴底物，5分钟后观察结果。质控孔为质量控制，固定有人lgM，测试孔固定有肺炎支原体抗原。阳性反应结果为蓝色，阴性结果为无色。 【材料】 1、患者血清。 2、肺炎支原体lgM检测试剂盒，包括： （1）检测卡：单独锡纸包装，卡上固定有肺炎支原体抗原或人lgM（质控孔）。 （2）阳性质控液（1.7ml）：含有人抗肺炎支原体lgM的0.1%叠氮钠缓冲液。 （3）阴性质控液（1.7ml）：0.1%叠氮钠缓冲液。 （4）酶结合物：（11ml）：含有以碱性磷酸酶标记的抗人lgM单克隆抗体的0.1%叠氮钠缓冲液。 （5）洗液：9.5%（W/V）的呱基氢氯酸。 （6）底物（15ml）：含有5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸的0.1%叠氮钠的缓冲液。 （7）移液管。 【样本处理】血清样品2—8℃可保存3天，如果不能在此期间测试，-20℃保存，样品不宜反复冻融。 【操作】 1、从冰箱中取出试剂盒，置室温平衡20分钟

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养时，裂解生长形成噬斑。液体培养时，裂解生长使菌液中宿主菌最后全部被裂解而释放出大量的噬菌体颗粒。经过改造的λ噬菌体克隆位点可插入几到几十kb的外源DNA。许多cDNA和基因组文库是以λ噬菌体作为克隆载体构建的。因此，在经文库筛选得到目的克隆后，我们常常需要利用λ噬菌体裂解生长的特点，培养获得大量的噬菌体颗粒，并提取λ噬菌体DNA来开展进一步的工作。一、试剂准备1. LB液体培养基：胰化蛋白胨（细菌培养用）10g，酵母提取物（细菌培养用）5g，NaCl 10g，加ddH2O 至1000ml，完全溶解，分装小瓶，15lbf/in2高压灭菌20min。2. 1.5%琼脂LB固体培养基: 称取1.5g琼脂粉放入300ml锥形瓶,加100mlLB

1凝血酶原时间（PT） 主要反映外源性凝血系统状况，其中INR常用于监测口服抗凝剂。PT是血栓前状态、DIC及肝病诊断的重要指标，作为外源性凝血系统的过筛试验，也是临床口服抗凝治疗剂量控制的重要手段（表1）。 PTA＜40%提示肝细胞有大片坏死，凝血因子合成减少。如肝衰早期30%＜PTA＜40%；中期20%＜ PTA＜ 30%；晚期PTA＜20%。 表1： ACCP（美国胸科医师协会）推荐的INR目标值 延长见于： a、广泛而严重的肝脏实质性损伤，主要由于凝血酶原及有关各凝血因子生成障碍。 b、VitK不足，合成Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ因子均需VitK。当VitK不足时生成减少而致凝血酶原时间延长。亦见于阻塞性黄疸。 c、DIC（弥散性血管内凝血），因广泛微血管血栓而消耗大量凝血因子。 d、新生儿自然出血症、先天性凝血酶原缺乏抗凝治疗。 本文来自 缩短见于： 血液呈高凝状态时（如DIC早期、心梗）、血栓性疾病（如脑血栓形成）等。 2凝血酶时间（TT）

DNA 片段的克隆需要合适的载体，载体或是质粒，或是噬菌体，或是病毒，通常大多经过人工改造[地的。作为载体必须具备两条件：一是该载体在细胞内必须能自主复制，即必须具备复制原点；二是该载体必须具备适合的酶切位点，且这些酶切位点不在复制原点区域内。以上两条，保证了载体的可繁殖性和可利用性。为了便于获得阳隆克隆 ，载体上常有筛选标记，如对抗菌素的抗性，某些基因产物的显色反应等。一、质粒常用的有pBR322，pUC系列质粒等。（一）pBR322质粒是4362bp的环状双链DNA 载体，有2个抗药性基因（四环素和氨苄青霉素），一个复制起始点和多个用于克隆 的限制酶切点。当缺失抗药性基因的大肠杆菌被pBR322成功地转化时，它便从该质粒获得了抗生素抗性。两个抗生素基因中均含供插入外源DNA 用的不同的单一酶切位点。一般只选一个抗生素基因作为插入外源DNA 之用。外源DNA 插入后该抗生素抗性失活。另一抗生素抗性基因则作为转化细菌后筛选阳性克隆 之用。（二）pUC系列质粒是2.7Kb的双链DNA 质粒，有一个复制起点，一个氨苄青霉素抗性基因和一个多克隆 位点，多克隆 位点处于表达LacZ基因产物-β

摘要：蛋白质的一级、二级、三级和四级结构决定了它的物理、化学、生物化学、物理化学和生物学性质，综述了不同蛋白质之间的性质存在差异或者改变条件是使之具有差异，利用一种同时多种性质差异，在兼顾收率和纯度的情况下，选择蛋白质提纯的方法。关键词：蛋白质分离纯化前言蛋白质在组织或细胞中一般都是以复杂的混合物形式存在，每种类型的细胞都含有成千种不同的蛋白质。蛋白质的分离和提纯工作是一项艰巨而繁重的任务，到目前为止，还没有一个单独的或一套现成的方法能把任何一种蛋白质从复杂的混合物中提取出来，但对任何一种蛋白质都有可能选择一套适当的分离提纯程序来获取高纯度的制品。蛋白质提纯的总目标是设法增加制品纯度或比活性，对纯化的要求是以合理的效率、速度、收率和纯度，将需要蛋白质从细胞的全部其他成分特别是不想要的杂蛋白中分离出来，同时仍保留有这种多肽的生物学活性和化学完整性。能从成千上万种蛋白质混合物中纯化出一种蛋白质的原因，是不同的蛋白质在它们的许多物理、化学、物理化学和生物学性质有着极大的不同，这些性质是由于蛋白质的氨基酸的序列和数目不同造成的。连接在多肽主链上氨基酸残基可是荷正电的、荷负电的、极性的或非极性的

自身抗体检测是自身免疫病诊治中的重要工具，随着早期诊断、规范化治疗的开展，自身抗体检测在疾病诊断、监测及预后评估中发挥的作用也日益受到重视。但是，由于目前自身抗体检测缺乏统一的标准化检验方法，加上工作条件、传统诊疗习惯、结果判读以及医疗保险限制等因素的影响，导致自身抗体检测在临床应用上存在着不统一、不规范现象。因此，制定适合我国国情的临床应用建议十分必要，可为广大临床医师和检验医师提供参考。 《自身抗体检测在自身免疫病中的临床应用专家建议》（以下简称为《建议》）形成分 3 步进行。首先由来自全国大型教学医院风湿免疫科医师通过检索国内外文献并结合中国实际情况起草《建议》草案，然后将该草案提交由风湿免疫科、检验科、消化科、血液科、神经内科等组成的专家组讨论，补充和提出修改意见，修改后的草案再次由起草成员讨论，形成初步建议，并对每项建议条目进行解读。 最后提交由中国免疫学会临床免疫分会专家进行投票评分（Delphi 评分，分值 0-10 分，0 分表示完全不赞同，10 分表示完全赞同），计算所有专家打分的 x+s 作为每条建议的专家认可度。《建议》包括 13 条，每一条都附有基于 G

单胺氧化酶(monoamine oxidase )为催化单胺氧化脱氨反应的酶。缩写MAO，也有称为含黄素胺氧化酶的。 EC1．4．3．4。作用于一级胺及其甲基化的二、三级胺，也作用于长链的二胺。对所谓生物胺，即酪胺、儿茶酚胺、5-羟色胺、去甲肾上腺素、肾上腺素等也有作用。可使儿茶胺类神经递质失活的酶，可用作抗抑郁征药物。 同位素是同一元素的不同原子，其原子具有相同数目的质子，但中子数目却不同（例如氕、氘和氚，它们原子核中都有1个质子，但是它们的原子核中分别有0个中子、1个中子及2个中子，所以它们互为同位素）。 同位素具有相同原子序数的同一化学元素的两种或多种原子之一，在元素周期表上占有同一位置，化学性质几乎相同（氕、氘和氚的性质有些微差异），但原子质量或质量数不同，从而其质谱性质、放射性转变和物理性质（例如在气态下的扩散本领）有所差异。同位素的表示是在该元素符号的左上角注明质量数（例如碳14，一般用C来表示）。 在自然界中天然存在的同位素称为天然同位素，人工合成的同位素称为人造同位素。如果该同位素是有放射性的话，会被称为放射性同位素。 同位素是指原子具有相同数目的电

1 应用说明 编码β-半乳糖苷酶(Gal)的基因已商业化地运用到报告基因研究的各种层面，重组的β-Gal已得到成熟的运用，以此用来研究启动子的功能、组织特异性表达、发育调控、mRNA的稳定性以及各种细胞器靶向蛋白的信号序列。应用β-Gal来测定启动子和基因的活性具有双重优点；检测方法简单，用于酶活性分析的底物容易获得，使用TBS-380微型荧光计对溶液中β-Gal活性进行检测时，其灵敏度和定量与荧光基质底物4-MU（四甲基伞形酮）相关。 2 应用原理 4-MU酯类只有裂解之后才能产生荧光。进行荧光素酶检测主要基于以下原理：首先要水解含有4-MU的底物，比如β-葡萄糖醛酸酶水解β-4-MU-葡萄糖醛酸或β-Gal水解β-4-MU-半乳糖。β-Gal水解4-MU-β-D-半乳糖产生的荧光分子4-MU，在365nm激发时能在460nm处产生发射光。 Turner BioSystems公司的TBS-380微型荧光计

鸟纲分类 　　一、目的 　　了解鸟类的主要类群及其特征，认识本地常见种类以及有重要经济价值的鸟类；掌握鸟类的分类方法，学习使用检索表。 　　二、内容 　　常用鸟体测量术语、分类有关术语、分类检索。 　　三、实验材料和用具 　　有关鸟类假剥制标本和陈列标本、卡尺、卷尺和放大镜。 　　四、实验操作及观察 　　要爱护实验标本，应轻拿轻放，不要扯动翅膀、腿等。分类检索中所遇形态特征观察上的难点，可用挂图及幻灯片进行讲解。 　　（一）常用鸟体测量术语： 　　1．全长：自嘴端至尾端的长度（是未经剥制前的量度）。 　　2．嘴峰长：自嘴基生羽处至上喙先端的直线距离。 　　3．翼长：自翼角（腕关节）至最长飞羽先端的直线距离。 　　4．尾长：自尾羽基部至最长尾羽末端的长度。 　　5．跗跖长：自跗中关节的中点，至跗跖与中趾关节前面最下方的整片鳞的下缘。 　　6．体重：标本采集后所称量的重量。 　　 （二）分类有关术语 　　1．翼： 　　（1）飞羽：初级飞羽（着生

一、实验原理 氢火焰离子化检测器（FID：flameionizationdetector）它是典型的破坏性、质量型检测器，是以氢气和空气燃烧生成的火焰为能源，当有机化合物进入以氢气和氧气燃烧的火焰，在高温下产生化学电离，电离产生比基流高几个数量级的离子，在高压电场的定向作用下，形成离子流，微弱的离子流（10-12～10-8 A）经过高阻（106～1011Ω）放大，成为与进入火焰的有机化合物量成正比的电信号，因此可以根据信号的大小对有机物进行定量分析。氢火焰离子化检测器，对含碳的有机化合物有很高的灵敏度，故适合于痕量有机物的分析。因其灵敏度高（10-13～10-10 g/s），基流小（10-14～10-13A），线性范围宽（106～107），死体积小，响应快（1 ms），通常采用氮气作载气，流量的选择主要考虑分离效能；氢气与氮气的流量比通常为1:1~1:1.5；氢气和空气流量之比为1:10。 用气相色谱分析试样时柱温是最重要的影响因素之一，对于沸程较宽、组分复杂的试样，宜采用程序升温，即柱温按预定的加热速度，随时间作线性或非线性的增加。采用程序升温技术，可使各组分以最佳柱温流

实验大鼠分组：根据随机化原则，将24只雄性Wistar大鼠（体重190-250g） 按体重编号，采取随机排列表法分为以下4组：（1）正常对照组、（2）哮喘一周组（激发一周）、（3）哮喘两周组（激发二周）和（4）哮喘四周组（激发四周及以上）。哮喘模型的建立：第一天三组哮喘组大鼠每只大腿内侧皮下注射卵清蛋白（OVA）悬液1ml（OVA10mg+氢氧化铝200mg+0.9%生理盐水至1ml），同时腹腔内注射灭活百日咳杆菌悬液1ml （约6×109个菌株）作为佐剂，第8天重复致敏一次，第15天开始将大鼠置于自制玻璃容器中，隔日用402超声雾化器（上海四菱医疗器械厂）给于中等雾量的2%的OVA悬液50ml激发30分钟，每周至少3次，分别按分组激发1周、2周和4周及以上。OVA悬液激发后以大鼠出现烦躁、呛咳、呼吸加快、行动迟缓或俯伏不动等症状以及肺内组织病理切片显示嗜酸性粒细胞、淋巴细胞浸润，小气道和小血管收缩为哮喘激发成功。正常对照组腹腔内注射等量PBS1ml代替OVA悬液，2周后雾化吸入中等雾量的PBS液50ml共30分钟，每天一次，共15天。T 淋巴细胞的分离及体外培养：对各组大鼠无菌操作行