1． 柱子的清洗 即使样品和流动相已做过前处理，也仍难以完成避免柱子受到污染，因此必须对柱子行清洗。清洗应定期进行，如果在短期内分析许多样品，则以每日清洗一次为宜，至少也应一周一次，防止有太多的杂质在柱上堆积。 反相柱的常规洗涤办法是：分别取甲醇、三氯甲烷、甲醇-水各20倍柱体积（既对于一根4.6mmX25cm的柱来说，通常是50-60ml，而对于9.4mm内经X50cm的柱来说，通常是500-600ml） ，使之通过柱子。然后用流动相平衡（通常仍用20倍柱体积），柱一般将恢复正常。如果选择性仍和以前不一样，则表明还有其他杂质留在柱子里，这时应考虑更加严格的清洗：先用20倍柱体积的水，再用相同体积0.05mol/L硫酸，最后用流动相溶剂。酸洗常能洗下有机溶剂所不能洗下的剩余杂质。在低pH值下做长期（一天或更长）清洗是不适宜的，但50ml洗液以2ml/min的速度清洗25min，一般对健合相没有损害。注意，强碱不能用来清洗任何微粒硅胶柱（不论是健合相还是非健合相），因为硅胶骨架会溶解。对于严重污染的反相柱，只能采用再生的方法。 2． 柱头空隙的处理

慢病毒——基因转移的潜在新载体　　用于基因治疗的载体系统可分为病毒性载体和非病毒性载体两类。目前常用的病毒载体包括逆转录病毒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、疱疹病毒载体、痘苗病毒载体等,但是这些载体均存在不足之处,严重影响了基因治疗的有效性及安全性。在基因治疗中广泛应用的逆转录病毒载体存在的主要问题,是无法高效转导非分裂期细胞,而腺病毒载体虽然能转导非分裂期细胞,但在体内不能实现目的基因稳定的长期表达,且反复应用容易引起免疫反应。慢病毒载体不但可以感染非分裂期细胞,还具有容纳外源性目的基因片段大、免疫反应小等优点,在基因治疗中具有广泛的应用前景。现以HIV-1 为例,就慢病毒载体的生物学特征、慢病毒载体的构建、在基因治疗中的应用以及生物安全性等 方面作一综述。一、 慢病毒载体的生物学特征慢病毒包括灵长类慢病毒,如人 类免疫缺陷病毒(HIV) 和猴免疫缺陷病毒(SIV) ,以及非灵长类慢病毒如猫免疫缺陷病毒( FIV) 、马传染性贫血病毒(EIAV) 、牛免疫缺陷病毒(BIV) 和维斯纳-梅迪病毒(VMV)等。目 前,HIV-1、HIV-2、SIV、FIV 及EIAV被广泛研究用作基因

转载，感谢原作者DNA测序常见英文单词对照（1）Quantitative analysis of expression of myocardial CYP11B1 and CYP11B2 genes in rats of two groups Taking 100bp Plus Ladder as Marker,clear amplified strands could be seen at 440bp?461bp and 336bp sites,DNA sequencing proved they were the encoding gene segments of CYP11B1,YP11B2 and GAPDH.（1）两组大鼠心肌CYP11B1及CYP11B2基因表达的定性分析:以100bpPlusLad-der为Marker,分别在440bp,461bp及336bp处可见清晰的扩增条带,DNA测序证实为CYP11B1,YP11B2及GAPDH的编码基因片段。（2）Proved by PCR-RFLP and DNA sequencing,the genotype of CYP3

DNA聚合酶要进行DNA聚合反应时一定要有引子 （primer），因为它只能以引子所提供的3'-OH为起始点进行延伸 （extension） 的工作，而不能就地重新合成新的DNA （de novo synthesis）。 一般实验常以人工合成的寡核苷酸为引子进行DNA聚合反应，这时固然可以根据已知序列设计核酸引子，但也可以采用逢机引子（random primers）。 所谓逢机引子即其序列为逢机序列，不经特别设计，目前应用最广者是以自动化机器所合成的、六到八个核苷酸长的寡核苷酸混合物；反应进行中若有任何一条逢机引子结合到模版DNA，即可引导DNA聚合反应的进行。 以random priming方法进行核酸标定，是以逢机引子引导Klenow fragment（large fragment of E. coli DNA polymerase I） 进行DNA聚合反应，并在反应过程中添加 [α-32P]dNTP或DIG-11-dUTP等标定物质。 而为了避免random priming也发生于载体部份的DNA，最好不要直接以质体DNA为模版进行标定反应，而应预先将目标DNA自载体切除出来。仪

佚名 前列腺素(prostaglandin，PG)，血栓素(thromboxane，TX)和白三烯(leukotrienes,LT)均由花生四烯酸衍生而来。它们在细胞内生成后，可作为调节物对几乎所有的细胞代谢发挥调节作用，而且与炎症、过敏反应和心血管疾病等病理过程有关。 生物膜上的膜磷脂含有花生四烯酸，它可被磷脂酶A2水解，释放花生四烯酸。花生四烯酸可在前列腺素内过氧化物合成酶催化下，消耗O2和还原性谷胱甘肽，发生氧化和环化反应，生成前列腺素H2。前列腺素H2可进一步衍生成其它前列腺素及血栓素。可的松(cortisol)抑制磷酸酶A2活性，减少花生四烯酸的生成，从而抑制前列原素的合成，阿斯匹林(aspirin)和保泰松(phenylbutazone)抑制前列腺素内过氧化物合成酶活性使前列腺素和血栓素生成减少。 PG、TX及LT的生理功能 PG等在细胞内含量很低，仅10pmol/L，但具有很强的生理活性。 (一)PG PGE2能诱发炎症，促进局部血管

病原体通过各种途径进入人体后，就开始了感染过程。病原体的致病力和机体的免疫功能决定病原体是否被清除，或是定植下来，并繁殖复制，进而引起组织损伤、炎症过程和各种病理学改变。感染过程可有下列几种不同的表现。 一、病原体被清除 病原体进人人体后，可被处于机体防御第1线的非特异性免疫屏障(如胃酸)清除(霍乱弧菌)，也可以由事先存在于体内的特异性被动免疫(来自母体或人工注射的抗体)中和，或特异性主动免疫(通过预防接种或感染后获得的免疫)清除。 二、隐性感染 隐性感染又称亚临床感染，是指病原体侵人人体后仅引起机体发生特异性的免疫应答．不引起或只引起轻微的组织损伤，因而在临床上不显出任何症状、体征，甚至生化改变．只能通过免疫学检查才能发现。对于大多数传染病而言，隐性感染是最常见的表现，其发生的数量远远超过显性感染(10倍以上)。隐性感染过程结束以后，大多数人获得不同程度的特异性主动免疫，病原体被消除；少数人转变为病原携带状态，称为健康携带者，如伤寒、细菌性痢疾、乙型肝炎等。 三、显性感染 显性感染又称临床感染．是措病原体侵人人体后，不仅引起机体发生特异性的免疫应答，而

仪器用途 阿贝折射仪是能测定透明、半透明液体或固体的折射率n D 和平均色散nF-nC的仪器（其中以测透明液体为主），如仪器上接恒温器，则可测定温度为0℃～70℃内的折射率n D 。 折射率和平均色散是物质的重要光学常数之一，能借以了解物质的光学性能、纯度、及色散大小等。本仪器能测出蔗糖溶液的质量分数（锤度Brix）（0～95%，相当于折射率为1.333～1.531）。故此仪器使用范围甚广，是石油工业、油脂工业、制药工业、制漆工业、日用化学工业、制糖工业和地质勘察等有关工厂、学校及有关科研单位不可缺少的常用设备之一。 阿贝折射仪2W　　　　阿贝折射仪2WAJ 技术参数 1、2W和2WAJ的技术参数： 2、数字阿贝折射仪 WYA-2S： 特点：测定液体或固体的折射率n D 和糖水溶液中干固物的百分含量即Brix，采用目视瞄准，数显读数，测定锤度进可进行温度修正，配有标准打印接口，可直接打印

一、实验室日常规范1、实验室内工作人员必须穿着工作服，禁止随手乱放工作服，严禁穿工作服离开实验区，进入办公区、卫生间等公共场合。进入不同的实验区必须穿戴相应的工作服和鞋子，离开时放在原来的位置。2、实验室只能穿着工作鞋或类似的胶鞋或布鞋，禁止穿钉鞋，避免产生影响他人工作的声音，并防止损坏实验室地面；外来参观人员进入实验室，请更换参观鞋或戴鞋套。3、实验室内禁止大声喧哗、会客和交接物品；禁止吸烟、饮食、奔跑。4、实验室过道内禁止乱放物品，实验凳不用时即时摆放到实验台洞内。5、实验室内地面要保持洁净，如有玻璃器皿打碎或液体洒落地面要及时进行清理，以免扎伤或滑到。6、实验室台面上的物品要求摆放整齐；试剂架上只能整齐的摆放试剂；实验室地面、桌面、抽屉内都不得存放与实验无关的私人用品；时刻保持实验室的干净和整洁。7、禁止将纯净水用于非要求的方面，要节约使用自来水和纯净水。8、实验室内墙面严禁粘贴纸张。需要粘贴的纸张可用磁块整齐地贴在试剂架或白板上。9、实验过程中不浪费试剂和消耗器材；如实做好详细、完整的各项实验记录；严格按操作规程进行操作，不得自行更改操作规程；如出现有可能导致错误结果的问题，及

本单元讲述了无菌取样操作，在讨论无菌取样的原因和采集方法之前，必须要理解“无菌的”的这一术语，“无菌”一般用于取样中，意味着取样过程中，避免操作引起污染。一个无菌样品的采集，应该通过这样一种方式，即：在收集过程中，本身应避免污染，然后放入消毒容器中。无菌样品的采集基本是为了支持、针对工厂的卫生条件状况的检查结果。一、检验前的准备工作1. 包装无菌取样的工具：拥有正确的采取产品或加工过程的无菌取样器械工具是至关重要的的。除非使用合适的采集工具，否则样品的完整性会被怀疑，甚至样品毫无意义。为了避免没有合适的取样工具，建议建立一个无菌取样的分析清单，来收集取样工具。如果可能盛样品的容器在最初进入加工区之前应当被预先标识，象样品号、取样日期、取样人等。这样可以使在不同的工厂条件下的样品取样更为方便一些。附加样品号码一般在样品采集中被正式确定下来，因此不用预先标明。人员的工具设施，象工作服、发网或消毒处理过的清洁的鞋靴必须具备有助于证明采集者没有污染到食物产品或样品。2. 生产线样品In-Line Samples生产线样品一般是指原材料，原料生产用水、包装材料或其他任何使用在生产线的材料。生产线

胶体金可用多种方法制备，其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂，使金离子还原为金原子，可用于制备胶体金的还原剂有50余种，但在生物医学领域内最为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。白磷还原法的建立已有近百年的历史，由于此法操作较为简便，制备出来的胶体金颗粒大小较一致，因而应用较为广泛，现以Faulk和Taylor（1971）的报道为基础介绍这一方法。（1）取1%氯化金1.5mli、0.1mol/LK2CO3 1. 2ml,加入120ml双蒸水。（2）上述溶液充分搅拌混匀3min以上。（3）在搅拌条件下将1ml新鲜配制的20%饱和白磷乙醚溶液加入上述混合液中，约在5min内溶液变为棕红色。（4）将上述混合液加热煮沸，直至变成鲜明的橙红色为止，一般约需10min。橙红色的出现表明氯化金的还原反应终止，胶体金制备成功。按上述法制备的金颗粒直径为（5.6土0.9）nm。白磷还原法一般只能制备出单一颗粒直径的胶体金。因此，用于电镜双重标记或多重标记时此法显得有些不足，还需结合其他方法。Henegouwen等（1986）发展了传统的白磷还原法，

（主要针对Miltenyi产品） 一、标记策略 用MACS进行磁分离，最重要的参数就是高质量的标记。对阳性细胞的标记应尽可能强，而背景要尽可能低，才能获得对磁标记的阳性细胞和未标记的阴性细胞的最好分辨。有多种不同的标记策略可供参考： 1、直接标记 直接标记是最快速和最特异的磁标记方法。 2、间接标记 几乎所有的单克隆抗体或多克隆抗体都可以用于间接标记。用无标记的、生物素化的或FITC、PE或APC结合的一抗标记细胞，再用抗免疫球蛋白、抗生物素、链霉菌亲和素、抗FITC、抗PE、或抗APC的微珠分别进行磁标记。间接标记可以放大磁标记，用于分离表达比较弱的标记很有用。在间接标记中，以使用生物素化的或PE表记的一抗结果特异性最好。 二、磁分离柱

预杂交液的制备：根据要杂交的膜的数量配制预杂交液，每25 ml预杂交液（1~2张膜）的成分组成如下：H2O15 ml20×SSPE 6.25 ml50×Denhardt 2.5 ml10% SDS1.25 ml100 mg/ml鲑鱼精DNA（缓加）400 ml 1、取适量小麦基因组DNA，用适量的限制性内切酶消化完全（约5 U/mg DNA，酶切12 h左右），取少量电泳检测酶切完全性；然后依次用酚：氯仿和氯仿：异戊醇抽提，乙醇沉淀。而后溶解在20 ml TE Buffer中；2、在1%的琼脂糖凝胶上电泳10~12 h，电压为3 V/cm；3、电泳完毕后，将胶转入EB染色液中，染色10 min，紫外灯下检测酶切结果；4、将胶转入500 ml 0.25N的HCl中，脱嘌呤15~30 min，直至溴酚蓝变黄，用水洗一下；5、0.4 N的NaOH处理20 min。与此同时，尼龙膜在超纯水中润湿后，在0.4 N的NaOH中泡5 min以上；6、将凝胶翻转后放在滤纸桥上，放上一张与凝胶大小相当的尼龙膜（Hybond-N+，Amarsharm），赶除气泡，在膜上放3层滤纸，与尼龙膜大小相同，赶除

1、【仪器名称】：活体动物体内成像系统。 2、【仪器型号】：Xenogen IVIS ® 50。 3、【生产厂家】：美国精诺真（Xenogen）。 4、【检测适用范围】： 1) 癌症及药物研究：直接快速地测量各种癌症模型中肿瘤的生长和转移，并可对癌症治疗中癌细胞的变化进行实时观测和评估。 2) 病毒学及基因治疗：可清楚的看到标记的病毒或DNA载体对活体动物的侵染和在体内的表达，对以病毒和非病毒做载体的基因治疗的研究都有极大应用。 3) 基因表达：在活体动物体内观察和研究基因的表达，细胞或组织特异性，及其对外界的反应。 4) 干细胞及免疫研究：实时观测活体动物体内干细胞造血过程，并用于抗肿瘤免疫治疗。 5) 细胞凋亡：在活体动物中，观察细胞凋亡及相关事件的发生和发展。 7) siRNA的研究：通过生物发光的变化，验证siRNA在活体动物体内的作用。 8) 蛋白质相互作用：观察细胞中或活体动物体内蛋白质间的相互作用。 9) 转基因动物模型：将荧光素酶基因带上目的基因的启动子，形成转基因动物模型。利

载体主要有病毒和非病毒两大类,其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素 复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ ,Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（A）信号 可以起到稳定mRNA作用二、如何阅读质粒图谱第一步：首先看Ori的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。（1）Ampr 水解β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。（4）neor（kanr）氨基糖苷磷酸转移酶 使G418（长那霉素衍生物）失活（5）hygr 使潮霉素β失活。第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。第四步：

一、RNAi的概念与产生的历史背景 随着分子 生物 学的飞速发展，一些新分子 生物 学技术正在不断孕育和产生，RNAi技术成为新的分子生物学研究热点，独占分子生物学新技术的鳌头。 近年来研究表明，一些小的双链RNA（dsRNA）可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，即称为RNA干扰（RNA interference, RNAi，也称RNA干预或干涉或沉默）。其实，它是生物体内抵御外在感染的一种重要保护机制。由于可以作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具。自1998年被发现以来，在其作用机制研究、应用于生物基因组中特定基因功能的研究、封闭和阻断病原体基因表达等方面，取得了重要进展，显示出良好的应用前景。 RNAi技术正在功能基因组学领域掀起一场真正的深刻革命，并将彻底改变这个领域的研究步伐。为此，《Science》杂志和美国科学促进会将RNAi技术评为2002年度最重大的十大科学成就之首，成为2002年度最耀眼的明星，是生物医学领域近20年来

【摘 要 】FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术。在人类基因组研究中得到了广泛的应用。通过中期染色体的FISH可以进行SCP，Cosmid和YAC的染色体定位，嵌合克隆的鉴别；通过间期核的FISH可以在50kb的分辨率下进行基因作图；最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝（chromatin fibre）的FISH，直接测量基因的长度，从而达到高精度基因作图的目的，总之，随着FISH技术本身的发展，它将在人类基因组研究中发挥更大的作用。 【关键词 】FISH，人类基因组研究，染色体定位，基因作图。 荧光标记的染色体原位杂交技术提供了一种快速而有效的手段，将DNA片断和特定的真核生物细胞的染色体区带联系了起来，并将这些DNA片断排序，这是研究DNA顺序在染色体上位置的最直接的方法。最早，人们根据Gall和Pardue在1969年的工作，于70年代，建立起了同位素原位杂交技术，但当时只是用于DNA顺序在多线染色体上的定位或是重复顺序在中期染色体上的定位。1981年，Gerhard和Harper等首先证明有可能将从个体基因中得到的单拷贝顺序（SCP，single copy p

一、取得完全无血液残留的肺脏： 实验前j将大鼠全身血液放净，取得完全无血液残留的肺脏二、消化肺组织：常用于细胞消化的酶有胰蛋白酶、弹性蛋白酶、胶原酶。胰蛋白酶是最早用于消化、分离上皮细胞的酶，现在一般用损伤性小的弹性蛋白酶来替代胰蛋白酶。但这种酶却有活性不稳定，有效作用时间短暂，容易自我降解等问题。Dobbs L G等认为弹性蛋白酶能更有选择性的消化分离上皮细胞[9]。胰蛋白酶消化没有选择性，会带来像内皮细胞和间质细胞等一些不能在后面的分离步骤中去除的杂质细胞，因此弹性蛋白酶更有助于提高上皮细胞的纯度和产量。与此相反，Cunningham A C等发现，与弹性蛋白酶相比，用胰蛋白酶可以获得更大产量的Ⅱ型上皮细胞[10]。胶原酶可以用来辅助消化细胞间质。用几种酶混合的方法比单一酶消化效果更好，但目前还没有文献定量描述最优化的酶消化方法。Finkelstein J N等发现可以通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化，或把肺组织剪碎放入消化液中消化。前者比后者更有效。作者在自己的实验中也证实了通过支气管把酶灌注到完整的肺中消化效果更好。三、分离纯化细胞：上皮细胞的分离纯化技术经过二三十年的发展日

CTL 杀伤靶细胞诱导细胞凋亡 (1)FasL途径：CTL的细胞毒性作用通常通过靶细胞膜表面F9s分子启动的死亡信号转导而完成。CTL可表达与Fas相结合的细胞表面蛋白，其序列与TNF同源，称为Fas配体(FasL)。当FasL与靶细胞上的Fas相互作用，通过死亡信号转导而活化凋亡途径。 FasL通常只表达在效应T细胞而在末致敏T细胞上不表达。CTI-上FasL表达的水平要高于Thl和Th2细胞。有关Fas与FasL介导的细胞凋亡机制及相应的信号转导，在第三节中详细介绍。 (2)TNF途径：CTL分泌的TNF-=可通过与靶细胞表面相应受体结合而显示细胞毒活性。其中分泌型TNF-α主要介导靶细胞坏死；膜型TNF-a主要介导靶细胞凋亡，主要参与CTI-的慢时相细胞毒作用。 此外，激活的CTL可分泌淋巴毒素(1ymphotoxin，LT)，也称TNF-p。LT与靶细胞表面相应受体结合后，向胞内转移，继而被靶细胞溶酶体摄取，导致溶酶体稳定性降低，各种溶酶体酶外逸，直接引起细胞损伤。LT也可与靶细胞表面Fas结合，诱导靶细胞发生凋亡。 (3)颗粒酶途径：现发现CTL

Introduction过去，研究人员为了确保凝胶结果完美需要进行辛苦的工作，通过不断重复进行保存凝胶，或者凝胶存档（a record of the gel）的工作，在记录他们辛辛苦苦得来的凝胶结果上花费了许多时间和精力。然而今天的我们已经不再需要如此手工化的操作了，我们可以利用许多商品化的凝胶成像系统快速而准确的记录下实验结果，并且可以方便地获得分析和组织实验的数据。而且凝胶成像系统也已经不仅仅是作为一种凝胶记录的手段，普遍应用于蛋白、DNA的凝胶记录中了，更是一种印迹分析，数据获得的方式。不管是什么用途，刚开始的时候凝胶成像系统的组件都是相似的。Alpha Innotech的产品经理Hanh Lee就曾说，“表面上看来，所有的凝胶成像系统看上去和操作起来很相似：它们都有一个相机、一个黑暗的‘围栏’与获取和分析凝胶图片的软件。”但是，更深入的进行了解，你就会发现大部分凝胶成像系统提供了不同的产品特性来满足不同科学研究的需要。要挑选一个合适的凝胶成像系统，各人需要根据目前的预算和将来研究需要来决定，市场上有众多的类型和型号可供选择，但是大家要务必记住经常留意最新的产品动向――快速发展的

1、实验室设计 细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。细胞培养工作包括：工作液配制、无菌操作（采样）、温育、无菌处理，细胞和用品贮存等。细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。 2、常用设施及设备 （1）超净工作台：也称净化工作台，分为侧流式、直流式和外流式三大类。 （2）无菌操作间：一般由更衣间、缓部间和操作间三部分组成。操作间放置净化工作台及二氧化碳培养箱、离心机、倒置显微镜等。缓冲间可放置电冰箱、冷藏器及消毒好的无菌物品等。 （3）操作间：普通培养箱、离心机、水浴锅、定时钟、普通天平及日常分析处理物品。 （4）洗刷消毒间：烤箱、消毒锅、蒸馏水处理器及酸缸等。 （5）分析间：显微镜、计算机及打印机等。 3、培养器皿 细胞培养以玻璃器皿为主，常准备最需是使用最的三倍。器皿应选择透明度好、无毒、中性硬度玻璃制品。常用的玻璃器皿有下面几种。 （