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国内、外主要分析化学及其相关学术期刊

国内、外主要分析化学及其相关学术期刊一、国内期刊(1)分析化学 (FENXI HUAXUE , Chinese Journal of Analytical Chemistry)编辑部地址: 长春市人民大街159号, 邮编:130022电话:(0431)5262017,E-mail: fxhx@ns.ciac.ac.cn,网址:WWW.CIAC.JL.CN/FXHX(2)分析科学学报 (FENXI KEXUE XUEBAO, Journal of Analytical Science )编辑部地址: 湖北省武昌武汉大学化学与环境科学学院, 邮编:430072电话:(027)87682248(3)分析试验室 (FENXI SHIYANSHI, Chinese Journal of Analysis Laboratory )编辑部地址: 北京新街口外大街2号, 邮编:100088电话:(010)82013328或(010)62014488-5112, E-mail:fenxi@public.sti.ac.cn(4)分析测试学报(FENXI CESHI XUEBAO, Journal

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研究蛋白质与蛋白质相互作用方法总结

蛋白质与蛋白质之间相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分,蛋白-蛋白互作网络与转录调控网络对调控细胞及其信号有重要意义。把原来spaces空间上的一篇蛋白质与蛋白质间相互作用研究方法转来,算是实验技巧分类目录的首篇。 一、酵母双杂交系统 酵母双杂交系统是当前广泛用于蛋白质相互作用组学研究的一种重要方法。其原理是当靶蛋白和诱饵蛋白特异结合后,诱饵蛋白结合于报道基因的启动子,启动报道基因在酵母细胞内的表达,如果检测到报道基因的表达产物,则说明两者之间有相互作用,反之则两者之间没有相互作用。将这种技术微量化、阵列化后则可用于大规模蛋白质之间相互作用的研究。在实际工作中,人们根据需要发展了单杂交系统、三杂交系统和反向杂交系统等。Angermayr等设计了一个SOS蛋白介导的双杂交系统。可以研究膜蛋白的功能,丰富了酵母双杂交系统的功能。此外,酵母双杂交系统的作用也已扩展至对蛋白质的鉴定。二、噬茵体展示技术 在编码噬菌体外壳蛋白基因上连接一单克隆抗体的DNA序列,当噬菌体生长时,表面就表达出相应的单抗,再将噬菌体过柱,柱上若含目的蛋白,就会与相应抗体特异性结合,这被称为噬菌体展

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培养箱温度失控处理措施

1、每天上班记录培养箱、冰箱的温度于温度记录本上,如发现普通培养箱的温度超过37℃(不包括37℃)或低于34℃(不包括34℃);真菌培养箱温度超过31℃(不包括31℃)或低于25℃(不包括25℃);冷藏冰箱的温度超过8℃(不包括8℃)或低于2℃(不包括2℃);冷冻冰箱的温度超过-10℃(不包括-10℃)或低于-30℃(不包括-30℃),应立即追溯其失控的时间和原因。1.1如失控的原因可以马上纠正(如冰箱断电、冰箱门未关好、温控调节器未正确控制、冰箱严重结霜、温度计损坏等),则由本室人员马上纠正并填写失控报告。如冰箱、培养箱本身出现机械故障,本室人员应马上通知维修部或维修商,同时根据排除故障时间的长短是否会对其中的物品质量造成影响而采取相应的措施(如把里面的物品转移到能满足需要条件的环境中),并填写失控报告单。2、培养箱中的培养物应全部拿到工作台,检查培养物的生长情况。2.1. 如果培养基的菌落生长良好,则按常规程序进行检验。2.2.如果培养基的菌落生长受抑制,则取标本重新接种,如标本确实无法再次接种,则应与临床医生联系、解释并请医生重新采集标本送检。2.3.如有细菌生长,则应补做药敏试

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RayBiotech膜芯片操作与技巧

一、 试剂及材料(试剂盒包含内容) 1. 膜芯片---(RayBio®Human Cytokine Antibody Array membranes ,2/4/8张膜) 2. 生物素标记抗体---(Biotin-Conjugated Anti-Cytokines, 1/2/4 管, 每2张膜配1个管) 3. 1000×HRP-链霉亲和素---(HRP-Conjugated Streptavidin,1管) 4. 1X封闭缓冲液---(Blocking Buffer,2/4张膜配25 ml,8张膜配50 ml) 5. 20X的洗液I ---(20X Wash Buffer I,2/4张膜配10 ml,8张膜配20 ml) 6. 20X 的洗液II---(20X Wash Buffer II,2/4张膜配10 ml,8张膜配20 ml) 7. 2X细胞裂解液---(2X Cell Lysis Buffer,2/4张膜配10 ml,8张膜配20 ml) 8. 检测缓冲液C---(Detection Buffer C, 2/4张膜配1.5 ml,8张膜配2.

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常用医学实验动物及选择原则

一、常用的医学实验动物 1. 小鼠(mouse, mus musculus) 医学实验中常用的小鼠,属于哺乳纲,啮齿目,鼠科,鼠属,小家鼠种动物。其体型小易捉,操作方便,而且其生长期短、成熟早、繁殖力强。性情温驯,胆小怕惊,对环境反应敏感。小鼠作为成熟的实验动物,具有很多的品系,是医学实验中用途最广泛和最常用的动物。适合作药物和肿瘤学研究。 2. 大鼠(rat, rattus noivegicus) 我国医学实验中常用的大鼠为大白鼠,属于脊椎动物门,哺乳纲,啮齿目,鼠科,大鼠属动物。其性情较温顺。受惊时表现凶狠,易咬人。大白鼠的嗅觉灵敏,对噪音敏感,而且对营养缺乏也非常的敏感。由于大白鼠繁殖力强,易饲养,体型大小合适,给药容易,采样量合适方便,故在医学实验中的用量仅次于小鼠。适合作药物和肿瘤学研究。 3. 豚鼠(guinea pig, cavia porcellus) 豚鼠又名海猪、天竺鼠、荷兰猪。属哺乳纲,啮齿目,豪猪形亚目,豚鼠科,豚鼠鼠动物。其性情温驯,胆小怕惊。很少咬人或抓手。由于豚鼠的迟发性超敏反应与人类相似,所以豚鼠是过敏性休克和变态反应研究的首选动物。而且豚鼠

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蛋白质组学研究的完整解决方案

人体内真正发挥作用的是蛋白质,蛋白质扮演着构筑生命大厦的“砖块”角色,随着破译生命密码的人类基因组计划进入尾声,一个以蛋白质和药物基因学为研究重点的后基因组时代已经拉开序幕,蛋白质将是今后的重点研究方向之一。然而,蛋白质的分离和鉴定非常费时,目前测定蛋白质的技术远远落后于破译基因组的工具,最好的实验室每天只能分离和识别出100种蛋白质。据估计,人体内可能有几十万种蛋白质,这大概需要10年时间进行识别。为了加快蛋白质组学研究进程,以专业生产蛋白质组学研究设备而著称的美国Genomic Solution Inc.公司开发了完整的蛋白质组学解决方案,由一系列机械手臂与软件 ,并结合了二维电泳实验设备与质谱仪,可以进行高效、自动化且具重复性的试验分析。在Genomic solution值得信赖的技术平台上,你的研究工作将更富成效,重复性更好。在这一整套Investigator平台上,各仪器之间配合无隙,由于它的整合性及标准性,使得研究进程大大加快,原来需要9―12个月才能获得数据结果发表的时间减少到9―12周。这套完整的系统具备蛋白质组研究所需的众多功能:2-D电泳、图像获取、2-D胶分析、蛋

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电穿孔和电融合技术

实验原理 当细胞置于非常高的电场中,细胞膜就变得具有通透性,能让外界的分子扩散进细胞内,这一现象称为电穿孔。运用这一技术,许多物质,包括DNA、 RNA、蛋白质、药物、抗体和荧光探针都能载入细胞。作为一种基因转导方法,电穿孔已被广泛用于各种细胞类型,包括细菌、酵母、植物和动物细胞;而且,它还能作为注射方法(称为电注射),把各种外源物质引入活细胞。与其他常用的导入外源物质的方法相比,电穿孔具有很多优点。首先,不必象显微注射那样使用玻璃针,不需要技术培训和昂贵的设备,可以一次对成百万的细胞进行注射。第二,与用化学物质相比,电穿孔几乎没有生物或化学副作用。第三,因为电穿孔是一种物理方法,较少依赖细胞类型,因而应用广泛。实际上,对大多数细胞类型,用电穿孔法基因的转移效率比化学方法高得多。 除了能使细胞膜具有通透性,让外界的分子扩散入胞液中以外,高强度的电场脉冲也能引起细胞融合,这一现象叫做电融合。然而,在用电脉冲融合前必须使细胞相互紧密接触,这一电融合方法在原生质融合制取杂交植物,胚胎细胞相互融合制备动物克隆方面非常有用,尤其在制取杂交瘤细胞制备单克隆抗体方面

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称重法测定植物叶片的蒸腾速率

蒸腾速率是计量蒸腾作用强弱的一项重要的生理指标,其快慢受植物形态结构和多种外界因素的综合影响。所以在研究植物水分代谢时,测定蒸腾速率很有必要。本实验采用离体快速称重法测定蒸腾速率,此法简便、快速,定量较准确。一、原理植物蒸腾失水,重量减轻,故可用称重法测得植物材料在一定时间内所失水量而算出蒸腾速率。植物叶片在离体后的短时间内(数分钟),蒸腾失水不多时,失水速率可保持不变,但随着失水量的增加气孔开始关闭, 蒸腾速率将逐渐减少,故此实验应快速(在数分钟内)完成。为了快速称重,可用1/100g的电子顶载天平或用普通托盘天平稍加改制成为快速称重天平。二、仪器与用具防风玻璃箱及木架;电子顶载天平(感量0.01g),或托盘扭力天平(感量0.01g附法码),或经改制的横梁式托盘天平(感量0.1g附法码);镊子;剪刀;铁夹;透明方格板。三、方法1. 普通托盘天平的改制:取一架具横梁游码的托盘天平(感量0.1g),将一块扇形硬纸或白塑料板固定在天平的中央,并用细铁丝加长指针,使指针尖端恰在纸片的上缘。调节天平零点,使指针偏于扇形板左方,记下记号作为零点。再在天平右盘内增加1g法码,使指针偏右,再作下记号

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 蛋白质合成的抑制剂

网络蛋白质合成的抑制剂 影响蛋白质生物合成的物质非常多,它们可以作用于DNA复制和RNA转录,对蛋白质的生物合成起间接作用,本节主要讨论抑制蛋白质生物合成翻译过程的阻断剂。 (一)抗生素类阻断剂: 许多抗生素都是以直接抑制细菌细胞内蛋白质合成而对人体副作用最小为目的而设计的,它们可作用于蛋白质合成的各个环节,包括抑制起始因子,延长因子及核糖核蛋白体的作用等等。 1、链霉素、卡那霉素、新霉素等: 这类抗生素属于基甙类,它们主要抑制革兰氏阴性细菌蛋白质合成的三个阶段:①S起始复合物的形成,使氨基酰tRNA从复合物中脱落;②在肽链延伸阶段,使氨基酰tRNA与mRNA错配;③在终止阶段,阻碍终止因了与核蛋白体结合,使已合成的多肽链无法释放,而且还抑制70S核糖体的介离。 2、四环素和土霉素: ①作用于细菌内30S小亚基,抑制起始复合物的形成,②抑制氨西藏酰tRNA进入核糖体的A位,阻滞肽链的延伸;③影响终止因子与核糖体的结合,使已合成的多肽链不能脱落离核糖体。四环素类抗生

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克隆心经——一套帮助新手快速作出克隆的Protocol

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创,我在其基础上进行了一些改动,主要是DNA回收上采取了更简单的方法。 (本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断,也可以使用本方法,但需要加倍起始酶切DNA的量。) 一、片断平移的克隆(也适用于多片断连接) 简介:将用作载体的质粒A(制作大片断)酶切3μL ,要切出小片断的质粒B酶切7μL;琼脂糖回收胶电泳;切胶回收来自质粒A的大片段,和来自B的小片断,并回收到一管中;酚氯仿法回收DNA,酒精沉淀,干燥;加入8μL水、1μLligase Buffer、1μL ligase ,4℃过夜;次日转化涂板。 酶切 1. 配置可酶切共10μL质粒的酶切反应体系(双酶切): (提示 在克隆设计时尽量使用好切的内切酶,且注意这两个酶有比较兼容的Buffer,即在这种公用Buffer中,两酶的效力变化不大。酶切体系根据需要,可加入BSA。) 酶切体系 A质粒酶切-制作载体片断 公用Buffer 3μL 酶 I 1μL 酶 II 1μL 质

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硫化氢的使用安全

(一)理化性状和用途无色有臭蛋气味的可燃气体。易溶于水。自然点:246℃,爆炸极限;4.3-46%。硫化氢很少用于生产,一般作为化学反应或蛋白质自然分解产物而存在于多种生产过程中以及自然界中。凡含硫的有机物发酵腐败均产生硫化氢。含硫石油开采和提炼、人造丝、鞣革等生产过程都有硫化氢产出。(二)毒性硫化氢是强烈的刺激神经的毒物,可引起窒息。对粘膜也有明显的刺激作用。最高容许浓度10mg/m3(三)短期过量暴露的影响吸入:鼻烟部灼热感,咳 、胸闷、头晕、头痛、乏力、恶心、呕吐、意识模糊或出现昏迷。暴露于1000mg/m3以上时,可发生“电击样”中毒,瞬间内呼吸停止但心脏可仍搏动数分钟。眼睛接触:出现畏光、流泪、眼刺疼(浓度为16-32mg/m3以上时)。暴露于200-300mg/m3时,还可有眼睑痉挛、视力模糊等症状。(四)长期暴露的影响长期接触低浓度硫化氢,可致嗅觉减退。暴露于100mg/m3以上浓度时可能引起肺部损害。(五)火灾和爆炸本品极易燃,严禁明火、火花和吸烟。其蒸汽与空气混合物具有爆炸性。燃烧时会产生二氧化硫有毒气体。生产场所应有防爆装置。(六)化学反应性与金属离子反应生成盐,对

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TLR4与M-R家族分子NOD2的相互作用

TLR4 与 M-R 家族分子 NOD2 的相互作用 应该指出,对不同TLR家族成员启动的信号通路,参与的衔接蛋白和蛋白激酶可能不同。TLR4即是一例。首先,TI~R4结构有其特殊性。受体分子由同源二聚体TLR4-TLR4组成,一旁还结合有IL-14跨膜蛋白,并有一个称为MD2的分子参与。而且,该受体与配体LPS结合,往往通过前面提到的模式识别分子LBP。第二,TL4R信号途径还有MyD88依赖和不依赖两种。后者通过其他携带TlR结构域的衔接蛋白启动信号转导。因为只要有TlR,皆可通过同型互作与TLR胞内段的TlR结构结合。参与TLR4非MyD88依赖途径的衔接蛋白为TRAM(Toll receptor-associated molecule)和TRIF(Toll receptor associated activator of interferon),它们可激活NF-gB,也可激活一种称为干扰素调节因子3(1FN-regulatoryfactor 3,IRF3)的成分,后者直接转位至胞核,参与基因转录。MyD88依赖途径还可以与胞质溶胶中NLR家族的NOD2分子相互作用,通

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预制胶——轻松应对蛋白电泳

相关专题 现在,聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)已经成为实验室的最常规实验了。不过可别小看了这个实验,它比核酸电泳可复杂多了,需要准备的试剂多,耗时也长,而且每一次跑出来结果可能都不一样。有时只是为了补一张漂亮的电泳图片,却花了好几天时间,横 竖还是不满意。这时,你就可以考虑一下预制胶了。 蛋白专家Pierce公司推出了与多种电泳槽兼容的Precise Protein Gel预制胶。Precise Protein Gel是pH值中性的,蛋白不易降解,完整性好,而凝胶也稳定易保存,保质期可达12个月以上。同时,配合Tris-HEPES-SDS缓冲液,分辨率更高,且电泳速度更快,只需45分钟就可以完成电泳。最重要的是,Precise Protein Gel可以与多种电泳槽相兼容,包括实验室中最普遍的Bio- Rad Mini-PROTEAN 3、Invitrogen 的Novex XCell II Surelock?和Hoefer等电泳槽,这样你就不用为了几盒胶而特地去买一个槽了,而且说明 书也很贴心,针对不同的电泳槽都有详细的步骤和图示。

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刺激强度对肌肉收缩的影响

[实验目的]   学习神经-肌肉实验的电刺激方法和记录肌肉收缩的方法。 观察刺激强度与肌肉收缩之间的关系;掌握阈刺激、阈下刺激、阈上刺激、最大(最适)刺激等概念。 [实验原理]   对于单根神经纤维或肌纤维来说,对刺激的反应具有“全或无”的特性。神经-肌肉标本是由许多兴奋性不同的神经纤维(细胞)-肌纤维(细胞)组成,在保持足够的刺激时间(脉冲波宽)不变时,刺激强度过小,不能引起任何反应;随着刺激强度增加到某一定值,可引起少数兴奋性较高的运动单位兴奋,引起少数肌纤维收缩,表现出较小的张力变化。该刺激强度为阈强度,具有阈强度的刺激叫阈刺激。此后随着刺激强度的继续增加,会有较多的运动单位兴奋,肌肉收缩幅度、产生的张力也不断增加,此时的刺激均称为阈上刺激。但当刺激强度增大到某一临界值时,所有的运动单位都被兴奋,引起肌肉最大幅度的收缩,产生的张力也最大,此后再增加刺激强度,不会再引起反应的继续增加。可引起神经、肌肉最大反应的最小刺激强度为最适刺激强度,该刺激叫最大刺激或最适刺激。 [实验对象]   蟾蜍或蛙

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【原创】基因功能研究策略

随着人类基因组计划的顺利进行,越来越多的新基因被发现,基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题,目前基因功能研究方法主要有基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA 干涉等。一、 正常情况:DNA→mRNA→蛋白质→功能(遗传效应以及表型)二、 基因功能研究策略:1、基因功能的获得(gain-of-function)如:GFP转基因鼠1)、基因转移(transgenic):(1)、 指外源基因导入受体细胞后能随即整合到受体的染色体中,而相对稳定地表达,通过观察细胞生物学行为的变化来认识基因的功能,是目前应用最多、技术最成熟的基因功能研究方法。(2)、若受体细胞不具备该外源基因,则其获得新的功能;若受体细胞具有该基因,则该基因在受体细胞内得到过渡的表达,即基因诱导超表达技术。(3)、包括:1、DNA介导的基因转移:由于基因表达受转导效率和是否持续稳定表达两方面因素影响,因此需慎重选择转导系统。常用的基因转导系统分为非病毒性表达系统和病毒性表达系统。2、染色体介导的基因转移(只用于少数情况): 将大的DNA 片段克隆入酵母人工染色体、细菌人工染色体中可产生较好的表达水平和

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超速离心机使用注意事项

一、离心机操作步骤1.接通电源,打开离心机盖。2.按要求装配好离心管。3.按要求安装离心转头。4.关上离心机盖。5.输入离心数据,编离心程序。6.抽真空,并开始运行程序。7.程序结束后,去真空。8.打开离心机盖,取出转头。9.取出离心管并进行分析。二、离心管的选用1.玻璃离心管绝对不能在高、超速离心机上使用。2.PA管:化学性能稳定,半透明,能耐高温消毒。3.PP管:化学性能稳定,半透明,能耐高温消毒。PC管:透明度好,硬度大,能耐高温消毒。但不耐强酸强碱及某些有机溶剂。主要用于5万(转/分)以上离心。CN管:质地较软,透明,但不耐强酸强碱及某些有机溶剂,不能高压消毒。适合于蔗糖、甘油等密度梯度离心。应透明,利于收集。对称平衡:当离心转速达1~5万(转/分)时,如对称管相差1克,转头半径5厘米,则离心力公式F=m×RCF查表得:1万(转/分)RCF=6000代入公式F=1×6000=6(公斤)5万(转/分)RCF=150000代入公式F=1×150000=150(公斤)此时引起两边不平衡可达6~150(公斤),这对离心机的损伤是很大的,至少将缩短离心机的使用寿命。4、如离心管盖子密封性

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蛔虫及寄生蠕虫卵的检查

蛔虫及寄生蠕虫卵的检查   一、目的   了解蛔虫的形态结构以及线形动物(假体腔动物)的一般特征;学习几种常见寄生蠕虫卵的检查方法。   二、内容   (一)观察蛔虫浸制标本的外部形态。   (二)解剖并观察蛔虫内部结构。   (三)显微镜下观察蛔虫横切玻片标本。   (四)寄生蠕虫卵的检查。   (五)线形动物重要代表示范。   三、实验材料和用具   人蛔虫或猪蛔虫、马蛔虫浸制及横切面玻片标本。事先准备的学生自己粪便样品。   放大镜、解剖镜、显微镜、蜡盘、尖头镊、解剖剪、解剖针、大头针、三角量杯(或称锥形量杯)、长吸管、筛子、玻璃漏斗、玻璃棒、载玻片、盖玻片、离心机、离心管、锥形瓶、烧杯、竹签、火柴棒或牙签、4%煤酚皂、试管及试管架等。   生理盐水、饱和盐水(37.5g Nacl或食盐,加热水100mL)或33%硫酸锌。   四、实验操作及观察   检查蠕虫卵时,盛粪便的容器应洁净,粪便要新鲜且量不宜太少;鉴别虫卵时,要与气泡、脂肪滴、孢子等杂物区别开来。

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分光光度技术系列一——基本原理

有色溶液对光线有选择性的吸收作用,不同物质由于其分子结构不同,对不同波长线的吸收能力也不同,因此,每种物质都具有其特异的吸收光谱。有些无色溶液,光虽对可见光无吸收作光光度技术吸收用,但所含物质可以吸收特定波长的紫外线或红外线。分光谱来鉴定物质性质及含量的技术,其理论依据是(分光光度法)主要是指利用物质特有的Lambert和Beer定律。分光光度法是比色法的发展。比色法只限于在可见光区,分光光度法则可以扩展到紫外光区和红外光区。比色法用的单色光是来自滤光片,谱带宽度从40-120nm,精度不高,分光光度法则要求近于真正单色光,其光谱带宽最大不超过3-5nm,在紫外区可到1nm以下,来自棱镜或光栅,具有较高的精度。基本原理一、光的基本知识光是由光量子组成的,具有二重性,即不连续的微粒和连续的波动性。波长和频率是光的波动性和特征,可用下式表示:式中λ为波长,具有相同的振动相位的相邻两点间的距离叫波长。V为频率,即每秒钟振动次数。C为光速等于299770千米/秒。光属于电磁波。自然界中存在各种不同波长的电磁波,列成表1-1所示的波谱图。 分光光度法所使用的光谱范围在200nm-10μ(1μ=

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电子自旋共振法测定膜流动性

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一,主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动,主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性,不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性,从而增加膜的流动性,短链能减低脂肪酸链尾部相互作用,在相变温度下,不易于凝集,此外,脂肪酸烃链围绕C- C键由全反式构型到歪扭(CAUCHE)的旋转异构运动,也可使流动性加大。 生物膜适宜的流动性是体现生物膜正常功能的必要条件,在一定范围内,膜流动性增加,有利于膜中酶分子的扩散和旋转运动,使酶活性增加。一些载体蛋白分子的运动性也取决于膜中脂类分子的流动性。研究发现肿瘤对化疗药物产生的耐药性主要与细胞膜P糖蛋白过度表达谷胱甘肽及其相关酶系活性改变有关,也有许多研究表明耐药细胞膜流动性较亲代敏感细胞明显增加。另有实验研究发现腹水癌细胞的恶性程度随着膜流动性的增加而增加,白血病及转移的肿瘤细胞的膜流动性远远高于非转移细胞。因此,对敏感及耐药的肿瘤细胞膜流动

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细胞生长检测9:染料染色法测定细胞数

一、结晶紫检测法 1、在96孔细胞培养板各孔中加0.1ml含5×104 ~104 WEHI-164细胞的培养液(含10%小牛血清的RPMI-1640培养液),37℃ 5% CO2 的二氧化碳培养箱中培养2~3小时,让细胞帖壁。2、用RPMI-1640培养液10倍递次稀释TNF标准品,根据需要3~5倍递次稀释待检样品,每孔加0.1ml稀释的标准品或待检样品,每个稀释度3个重复孔。对照孔6个,3个阳性对照孔各加0.1ml含4μg TNF的RPMI-1640培养液,3个阴性对照孔各加100μl RPMI-1640培养液。继续培养18~24小时。3、甩去培养液,用PBS小心洗涤一次,每孔加0.1ml 10%甲醇溶液固定细胞30秒钟。4、吸去甲醇溶液,每孔加0.1ml结晶紫染液,室温中放置20分钟。5、轻轻甩去染色液,用蒸馏水洗涤各孔,将培养板倒置于吸水纸上吸干水分。自然干燥或37℃烘干。此板可以在室温中长期保存。6、测定前,每孔加0.1ml 33%醋酸脱色,充分振荡后在570nm处测定光吸收度。用光吸收度(OD)值对样品稀释度作图,比较标准品曲线和待检样品曲线即可得到待测样品中的细胞因子活性二

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