一、关于ELISPOT 1、什么是ELISPOT检测? 酶联免疫斑点（ enzyme-linked immunosorbent spot， ELISPOT） 检测技术是通过两种高亲和力的特异性抗细胞因子抗体来检测淋巴细胞分泌细胞因子情况的一种方法。淋巴细胞在体内被抗原激活后，或者在体外培养中被培养液中含有的特异性抗原或刺激剂激活后，将这些细胞转入ELISPOT培养板中。这些活化的淋巴细胞所分泌的细胞因子，在孵育的过程中可在分泌细胞原位被ELISPOT培养板上包被的特异性细胞因子抗体所捕获。将细胞和过量的细胞因子洗除后，加入生物素标记的检测抗体，孵育后洗去多余检测抗体。然后加入酶标记的链亲和素（二抗），孵育后洗去多余酶标链亲和素（二抗）。最后加入酶的底物，作用后可形成不溶的颜色产物即斑点（SPOT）。每个斑点是激活的淋巴细胞分泌的细胞因子区域，代表一个活性淋巴细胞。实验结果可在显微镜下观察或使用酶联免疫斑点自动图象分析仪（BioReader 4000 Pro-X）来进行计数分析。该方法可在单细胞水平检测淋巴细胞对特异性抗原的反应能力及记数特异性抗原刺激下分泌性淋巴细胞产生的情况。2、EL

近日，赛业生物科技（Cyagen Biosciences）宣布推出其全球专利技术TetraOneTM KO，一种不仅在速度上媲美TALEN、CRISPR/Cas9（把ES打靶基因敲除/敲入鼠的定制周期降低至6个月），而且避免了TALEN、CRISPR/Cas9脱靶效应困扰的革命性技术。TetraOneTM KO的出现，是ES打靶技术制备基因敲除鼠的一个重大突破。基因组编辑的技术进展传统ES打靶、TALEN和CRISPR/Cas9是基因组编辑的三大技术及主要工具。新一代核酸酶基因编辑技术TALEN和CRISPR/Cas9作为现代分子生物学技术上的一次革新，它结合了转基因技术简便快速，没有物种限制及ES细胞基因打靶技术精准的优点，在短短的几年时间里便受到广大科研人员的青睐。但由于其脱靶效应至今无法避免，且难以胜任大片段的基因敲入，所以还远远谈不上成熟。如何提高TALEN和CRISPR/Cas9的效率和降低脱靶效应将是未来的主要研究方向。基于同源重组的ES打靶是基因敲除的业内金标准，它通过同源重组技术将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造基因组某一基因的目的。基

原代分离 细胞培养 是指从供体内取出组织后，经机械以及消化分离成单个细胞或单一型细胞群，使之在体外模拟人体生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，生存、生长和繁殖。原代培养细胞常有不同的细胞成分，生长缓慢，但是更能代表所来源的组织细胞类型和表达组织的特异性特征。利用原代 细胞培养 做各种实验，如药物测试、细胞分化及病毒学方面的试验效果很好。其操作步骤如下。 1. 剪切组织　先将所取得的组织，用D-Hanks或Hanks液清洗，以去除表面血污，并用手术镊去除黏附的结缔组织等非培养所需组织。再次清洗后，用手术刀将组织切成若干小块，移入青霉素小瓶或小烧杯中，加入适量缓冲液，用弯头眼科剪，反复剪切组织，直到组织成糊状，约1mm3大小。静置片刻后，用吸管吸去上层液体，加入适当的缓冲液再清洗一次。 2. 消化分离　消化分离的目的是将细小的组织块消化分离成细胞团或分散的单个细胞，以利于进一步的培养，常用的消化酶有胰蛋白酶和胶原酶。 3. 培养　细胞悬液用计数板进行 细胞计数 。用培养液将细胞数调整为（2～5）×10

软琼脂(soft agar)实验一般用来检测细胞的集落形成能力。现在这种方法越来越多的用于分离癌细胞，也可以用来确认癌细胞是否具有癌化特性，为进一步做肿瘤小鼠移植模型奠定理论基础。该方法看似简单，但如果细节掌握不好，往往导致实验失败或数据缺乏说服力。如果你曾经在这个实验上栽了跟头，请不妨在如下几个方面进行尝试： 1.要确保在整个实验过程中所使用的琼脂处于完全液体状态（>80℃），尤其是在做基底时，如果琼脂凝固过快会导致基底不均一； 2. 做琼脂基底是应避免产生小气泡，一旦有小气泡产生，应该立即将气泡赶走； 3. 应使用2倍浓度的培养基，并加入20%FBS 和2%的P/S； 4. 在制备上层时，混合液体需要有顺序，一般为在同一个移液管中先吸取液态琼脂，再吸取同体积的2倍浓度的培养基，最后在吸取2倍体积的细胞悬液，这样既可以保证琼脂不立即固化，又可以有效避免细胞因温度过高而烫死； 5. 因为该实验周期较长，为避免过度蒸发而导致琼脂裂解，需要保证小环境持久湿润，一般可在六孔板或培养皿下面垫上三到四层湿润的薄纸。

摘要：通过PCR，从E.coli K12 Y1090株系中扩增获得glgC基因，插入pUC19的PstI和SacI 位点之间，得到重组质粒pAGP。对所克隆的glgC基因进行全序列测定，结果表明，与已发表的序列相比，有7个核苷酸发生了改变，核苷酸顺序的同源性为99.4 %; 推导的氨基酸序列的同源性为99.2 %, 其中，第296位由赖氨酸变为谷氨酸。通过寡核苷酸介导的定点诱变，将第1007位核苷酸由G变为A，从而使第336位氨基酸由甘氨酸变为天门冬氨酸，将此glgC的突变基因定名为glgC336。经I2-KI染色法鉴定，突变基因的表达可提高细菌中的糖原含量。关键词：AGPase; E.coli ; PCR；glgC基因；序列分析；定点突变Cloning And Site-directed Mutagenesis of glgC Gene From E.coli Y1090Dong Yunzhou Wang Xiaofeng Jia Shirong（Biotechnology Research Center, Chinese Academy of Agricultural Scienc

一、操作步骤： 1. 涂平板：为取得最佳的感受态效率，必须先把甘油菌或其它形式保存的菌种涂LB平板，并培养过夜。 2. 接种：取一有新鲜培养的菌种的LB平板，后续操作均在超净台内进行。把镊子的顶端在70%酒精中蘸一下，并在酒精灯上略略烧一下，使镊子的顶端处于无菌状态。用镊子夹取一个无菌的塑料枪头或牙签，从平板上挑取一个单克隆，然后把蘸有菌种的塑料枪头或牙签放到装有3毫升LB的细菌培养试管内。上述操作也可以使用接种环等进行操作。 3. 培养：37℃约200rpm培养过夜，通常培养时间控制在16小时左右为宜。绝对不宜超过18小时。 4. 再接种培养：根据需要制备的感受态细菌的量，按照1:100的比例用新鲜培养的过夜菌接种培养。例如取500微升的新鲜过夜菌到50毫升的LB中继续37℃约200rpm培养。通常在大约培养2-2.5小时后OD600可以达到0.3-0.5。 5. 制备感受态细菌：在培养的细菌OD600达到0.3-0.5时，4℃2000g离心5分钟收集细菌。如果离心沉淀前的菌量为50毫升，按后续操作进行，如果是其它体积则按比例换算后进行后续操作。用5毫升预冷的LB重新悬

丝状真菌的鉴定主要根据形态特征。形态特征包括群体形态和个体形态。1. 群体形态群体形态即菌落的形态。观察菌落形态时多采用固定的培养基，将固体培养基制成平板，以点植法接种，即用接种针尖沾取少量孢子点植在平板上适当的位置，例如中心，或三角形的三点。然后于25－28℃培养一定时间（如2、4、7、10天）进行观察，观察时可用肉眼或借助放大镜、低倍镜、解剖镜等。观察的要点一般包括下列几项：（1）大小：它反映生长或发育速度，通常测量菌落的直径。（2）颜色：包括菌落表面子实体、气生菌丝、菌核的颜色和基内的颜色，还应注意培养基颜色的变化。（3）菌落表面的纹饰：如皱纹、辐射沟纹、同心环、整个菌落致密或疏松等。（4）菌落的质地：即菌落外观呈毡状、绒毛状、棉絮状、粉粒状、革质状，有无成束状或绳状的气菌丝。（5）菌落的高度：菌落扁平或凸起，中心部分凸起或凹陷。气生菌丝的高度。（6）菌落的边缘：全缘、锯齿状、树枝状等。（7）渗出物：指菌落表面有无液滴、液滴的颜色和数量。2. 个体形态个体形态指菌丝的特征，子实体的形态(如孢子囊。子囊壳、子囊、担子果等的形态)，孢子的形态（如孢囊孢子、分生孢子、芽孢子、节孢子、厚

相关专题 做蛋白表达 实验的时候，有时候实验会觉得参考实验方法和克隆的蛋白基因序列完全没有问题，蛋白电泳就是没有结果。就个人经验总结和一些网络资源汇总了下蛋白不表达的原因。 1.载体 构建错误。这个屡见不鲜，很多克隆新人经常弄错读码框。比如Qiagen的pQE系列载体，其克隆位点常有一两个碱基的区别;另外有些酶产生粘端有些酶产生平端，这些都容易导致读码框错误，从而表达不出来。 2.宿主菌选择不当。不同的宿主菌其基因型是不一样的。有些经过特殊修饰的载体 ，或者特殊用途的载体，或者有特殊启动子的载体，必须选择合适的宿主菌进行表达。因此，当你的蛋白没有表达出来时，可以考虑更换宿主菌。 3.密码子的使用频率低。有些基因其本身含有许多稀有密码子，尤其是起始密码之后的15个碱基之内的稀有密码子，对蛋白表达有着很重要的影响。优化密码子对原核表达似乎效果很好，对真核表达系统未见得有很好的效果。曾经有某人在毕赤酵母表达某蛋白两年未果，试图将密码子优化进行表达，结果还是没有表达。一气之下将该优化的基因序列克隆到原核表达载体 ，表达量居

基本原理 TNF的生物学活性之一是能直接杀伤肿瘤细胞。TNF与相应受体结合后向细胞内移，被靶细胞溶酶体摄取导致溶酶体稳定性降低，各种酶外泄，引起细胞溶解。肿瘤细胞株对TNF-α的敏感性有很大的差异，用放线菌素D、丝裂酶素C、放线菌酮等处理肿瘤细胞，可明显增强TNF-α杀伤肿瘤细胞活性。 材料和试剂 1，完全培养基（1）10%FCS-DMEM培养液（V/V）。 2，完全培养基（2）3%FCS-DMEM培养液（V/V）0.5-1μg/ml放线菌素-D。 3，0.05%结晶紫溶液： 取50mg结晶紫，用20ml无水乙醇溶解后，加水定容至100ml，室温保存。 4，脱色液： H2O 50mg 无水乙醇 50ml 乙酸 0.1ml 混匀即可。 5，TNF标准品：由中国药品生物制品检定所提供。 实验操作 1，此实验在无菌环境下进行，实验前超净工作台应用紫外灯照射30分钟以上。 2，用完全培养基（1）将生长状态良好的小鼠L929细胞调至1×105/ml的细胞悬液，100μg/孔加入96

设置参数：旋转参数调节旋钮来调节箭头所在的位置，来选择需要修改参数的地方。按一下旋钮，选择该参数项，再旋转旋钮来调节参数大小，调好后，再按一下旋钮，返回到参数设置界面。在选择其他需要修该的参数。基本上所有参数都是这样设置的。可以设定的参数有：电压，脉冲宽度，脉冲次数。保存程序：在设置好参数后，选择“SAVE”，按住旋钮不放，直到出现新的界面：“savedcurrent parameter to setN”，再旋转旋钮选择要存储的编号。最后再长按旋钮返回到参数设置界面。调用程序：在参数设置界面，选择调用程序项。按下再松开旋钮，选择需要调用程序的编号，再长按旋钮直到出现：“loaded set N to current parameter”。仪器操作步骤：1．开机自检。2．根据实验的要求设置参数。3．所有参数都设好后（或者调用的已保存的程序后），按下start switch开始进行实验。4．当听见“嘀”的一声后，说明放电结束。5．结束后，屏幕会显示放电时的一些实际运行参数，如果需要的话，可以记录下来。返回ready界面，进行下一个实验或者关机。

饲料的分类实验动物的饲料原料以植物为主，为了弥补蛋白质的不足，也采用少量的动物性饲料。1、粗饲料 包括干草类及绝干物质中粗纤维含量≥18%的糟渣类、农副产品类,树叶类等。2、青绿饲料 天然水分含量≥60%的青绿饲料类、树叶类及非淀粉质的块根、 块茎瓜果类。3、青贮饲料 用新鲜的天然植物性饲料调制成的青贮饲料及加有适量糠麸或其他添加物的青贮饲料。4、能量饲料 在绝干物质中粗纤维含量＜18%，同时粗蛋白质含量＜20%的谷实类、糠麸类、草籽树实类、淀粉质的块根块茎瓜果类。5、蛋白质饲料 绝干物质中粗纤维含量＜18%，同时粗蛋白质含量为≥20%的豆类、油饼类、动物性饲料等。6、矿物质饲料 包括人工合成的、天然单一的矿物质饲料，多种混合的矿物质饲料，以及配合有载体或赋形剂的痕量、微量、常量元素的饲料。7、维生素饲料 指工业合成或提纯的单一维生素或复合维生素，但不包括某些维生素含量较多的天然饲料。8、添加剂 分为非营养性添加剂如防腐剂、着色剂、抗氧化剂、药物性添加剂、生长促进剂；营养性添加剂如矿物质微量补充料和人工合成氨基酸等。饲料营养价值的评定评定饲料的优劣主要看它对动物的饲养效果

趋化因子根据结构分类 1．CXC型 又称为。趋化因子，特征为第1、第2个半胱氨酸残基之间隔有一个其他氨基酸。CXC趋化因子由一黏蛋白茎状结构支持而表达于细胞表面。此类趋化因子的功能主要是促进中性粒细胞的游走和趋化。人的CXC趋化因子构成一个亚家族，大多数成员的编码基因位于染色体4q12―2l，一般有3个内含子和4个外显子。该亚家族根据第一个半胱氨酸残基前有谷氨酸―亮氨酸―精氨酸(ELR+)和没有这三个氨基酸(ELR-)再分两类，功能上两者分别参与中性粒细胞和淋巴细胞的趋化作用。IL-8是典型的CC类趋化因子，它专门吸引中性粒细胞离开血流而游走到周围组织。IL-8还能促进血管生成。这一作用估计与IL-8的4―6位氨基酸残基为ELR三联体有关，因为缺乏ELR结构的干扰素诱导蛋白(1P-10)和血小板因子4(PF-4)则具有拮抗血管生成的功能。另外，各种CXC成员还可就其来源而加以区分：有的来源于血小板。颗粒，如血小板碱性蛋白(PBP)、结缔组织活化肽、p血栓环蛋白、中性粒细胞活化蛋白2、血小板因子4(PF-4)等；有的为非血小板来源，包括上面提到的IL-8和IP-lO、干扰素诱导

将克隆化基因插入合适载体后导入大肠杆菌用于表达大量蛋白质的方法一般称为原核表达。这种方法在蛋白纯化、定位及功能分析等方面都有应用。大肠杆菌用于表达重组蛋白有以下特点：易于生长和控制；用于细菌培养的材料不及哺乳动物细胞系统的材料昂贵；有各种各样的大肠杆菌菌株及与之匹配的具各种特性的质粒可供选择。但是，在大肠杆菌中表达的蛋白由于缺少修饰和糖基化、磷酸化等翻译后加工，常形成包涵体而影响表达蛋白的生物学活性及构象。表达载体在基因工程中具有十分重要的作用，原核表达载体通常为质粒，典型的表达载体应具有以下几种元件：（1）选择标志的编码序列；（2）可控转录的启动子；（3）转录调控序列(转录终止子，核糖体结合位点)；（4）一个多限制酶切位点接头；（5）宿主体内自主复制的序列。原核表达一般程序如下：获得目的基因－准备表达载体－将目的基因插入表达载体中（测序验证）－转化表达宿主菌－诱导靶蛋白的表达－表达蛋白的分析－扩增、纯化、进一步检测。一、试剂准备1、LB培养基。2、100mM IPTG（异丙基硫代-β-D-半乳糖苷）：2.38g IPTG溶于100ml ddH2O中,0.22μm滤膜抽滤，-20℃保存

[ 实验目的 ] 通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测 DNA 的方法和技术。 [ 实验原理 ] DNA 分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。 DNA 分子在高于等电点的 pH 溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖 - 磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链 DNA 几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极移动。在一定的电场强度下， DAN 的迁移速度取决于分子筛效应，即 DNA 分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的 DNA 片段泳动速度不一样，可进行分离。 DNA 分子的迁移速度与相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可以分离不同相对分子质量的 DNA ，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的 DNA 分子。不同构型的 DNA 分子迁移率不同。 凝胶中的 DNA 可与荧光染料溴化乙锭 (EB) 结合，在紫外灯下可看到荧光条带，籍此可分析实验结果。 [ 仪器、材料与试剂 ] （一）仪器 1. 水平电泳槽 2 ．电泳仪 3 ．紫外灯或凝胶成像仪 （二）材料 1. 冰醋酸 2. 三羟甲基氨基甲烷（ Tris ） 3. 乙二胺四乙酸（ EDTA

转膜是把DNA从琼脂糖凝胶中转移到固相支持物(一般是尼龙膜)上固定，是进行各种后续研究(如 RFLP 分析，阳性克隆的筛选验证等所有涉及分子杂交的研究)的前提。 实验目的： 掌握 Southern blotting 的原理及操作步骤 实验原理： 1. 转膜的方式： 向上的毛细管转移 向下的毛细管转移 同时向两张膜转移 电转移 真空转移 2. 固相支持物的种类及选择： 硝酸纤维素膜：非共价结合，易脆，易丢失DNA ， < 500 bp 的DNA 无效，转膜前的工作(从提高转膜效率，利于转膜后使用等)。 尼龙膜(带正电荷的)高强度，不易破损，具有较大的DNA 结合容量，它能够吸附变性DNA ，核酸以共价结合方式不可逆的结合在尼龙膜上。尼龙膜两边均有吸附DNA 的功能，无论用哪边均可以经久耐用，可反复利用 10 次以上( 10-20 次)，经毛细管(毛细吸附)作用，把DNA 从凝胶上转到膜上。DNA 转到膜上是复制胶上的带型，在 80-100

一. 病原微生物： 1.细菌性抗原：细胞壁：蛋白质、脂多糖等。 鞭毛：蛋白质 菌毛：蛋白质 夹膜：多糖 2.病毒性抗原： 衣壳：蛋白 包膜：糖蛋白 3.其它：立克次体、螺旋体、真菌等。 二．细菌的外毒素与类毒素 外毒素：细菌分泌的毒性蛋白质。 类毒素：经0.3%～0.4%甲醛处理过的失去毒性保留免疫原性的外毒素。 三．异种动物血清 异种动物的血清蛋白对人具有免疫原性。如：抗毒素血清（马血清）破伤风，抗毒素血清（如各类毒蛇毒素血清），白喉抗毒素血清等。四．异嗜性抗原（heterophil antigen，又称Forssman抗原）不同种属生物间存在的共同抗原。 Forssman抗原：豚鼠脏器(生理盐水悬液) à 家兔 à 抗豚鼠抗体 à + 豚鼠脏器抗原 à 反应（+）+ 绵羊RBCà凝集反应(+)(交叉反应) 实际意义： 肾小球基底膜+溶血性链球菌——共同抗原—— 急性肾小球肾炎 心肌+溶血性链球菌 ——风湿病 结肠粘膜+大肠杆菌O14型——溃疡性结肠炎五．血型抗原：——人类血型抗原已报导23个系统 血型（Blood Group）──血细胞膜

PCR技术（一）PCR (Polymerase chain reaction) 是用一对寡聚DNA作为引物，通过加温变性－退火－DNA合成这一周期的多次循环，使目的DNA片段得到扩增。由于这种扩增产物是以指数形式积累的，经25－30个循环后，扩增倍数可达106。 Dr. Karry Mullis 1985年发明，获1993年度诺贝尔化学奖；（二）基本要素1、Taq DNA聚合酶：水生栖热菌(thermus aquaticus,Taq)的DNA聚合酶①5’→3’DNA聚合酶活性；②无3’→5’外切酶活性，35轮0.25%错配，与原始模板有差别；最适聚合酶 温度72℃，选择72℃延伸半衰期：92.5℃ 130min95℃ 40min97.5℃ 5―6min变性温度：≤95℃使其在整个扩增循环中保持足够活性pfu DNA 聚合酶 耐热5’→3’DNA聚合酶活性3’→5’外切酶活性精确度：pfu %26gt;Taq但pfu扩增效率通常比Taq酶略差文献报道：Taq+pfu 会起到较好效果2、引物人工合成短寡核苷酸20bp-25bp→Tm=55℃-60℃，Tm值要相近，每条10-50pmol

一、生物大分子色谱纯化方法的选择思路通常在做纯化前对自己的目标物质特性了解越多对纯化将会越有利，如果不太了解，也可以通过电泳知道目标物质和杂质的情况，找到一种简单的鉴定方法，此外在纯化前必须先建立可靠的活性测定的方法。如果是未知的蛋白，那么通常可以有几种简单的摸索：1.凝胶过滤色谱。这个方法很常用，但是效率不高，对低浓度的样品没有富集作用，上样量小。2.离子交换色谱。此法很常用，但是样品必须没有高浓度的盐。3.疏水色谱。此法较好，它分离效率高，上样量大，特别适合分离盐析沉淀的样品。4.亲和色谱。是最有效的手段，关键了解目标物质的特性以便选择合适的亲和色谱填料。二、主要用途介绍1.去除内毒素内毒素也叫热源，一般是磷脂A ，糖类和蛋白，在中性条件下带有负电荷。内毒素的磷脂部分有很强的疏水性，一般的在高盐情况下它们会聚合，所以不能用疏水色谱，如果蛋白本身的疏水性强，可以选择把目标蛋白结合到疏水色谱填料（苯基琼脂糖凝胶FF ，丁基琼脂糖凝胶FF ）上和内毒素分离。内毒素因为带有很强负电荷，如果目标蛋白带阳电荷，用DEAE 琼脂糖凝胶FF 或Q 琼脂糖凝胶FF 把内毒素吸附，达到去除内毒素的目的

蒸发光散射检测器（Evaporative Light-scattering Detector）是通用型检测器，可以检测没有紫外吸收的有机物质，如人参皂苷、黄芪甲苷等。1993才由Alltech公司商业化生产。一、ELSD原理恒定流速的色谱仪（高效液相、逆流色谱、高效毛细管电泳等）洗脱液进入检测器后，首先被高压气流雾化，雾化形成的小液滴进入蒸发室（漂移管，drift tube），流动相及低沸点的组分被蒸发，剩下高沸点组分的小液滴进入散射池，光束穿过散射池时被散射，散射光被光电管接收形成电信号，电信号通过放大电路、模数转换电路、计算机成为色谱工作站的数字信号——色谱图。二、特点1.洗脱液需要雾化，所以雾化气流的纯度和压力会影响检测器的信噪比。2.因为流动相要蒸发掉，　　a、所以不能使用不易挥发的物质来调节流动相的pH值。　　b、可以通过蒸发温度的调节来使比被测物质沸点低的组分蒸发。　　c、在不使被测物质蒸发的前提下，温度越高，流动相蒸发越完全，色谱图基线越好、信噪比越高。　　d、如果被测物质沸点接近或低于流动相的蒸发温度，则无法检测；不过，100%的水做流动相，蒸发室温度也才设为150摄氏

基本原理 斑点金免疫渗滤测定法是在斑点免疫渗滤测定法基础上，改用胶体金标记物代替酶，省去底物显色的步骤。试验方法是以硝酸纤维素膜（NC膜）为载体，将试剂及标本滴加在膜上，通过渗滤而逐步反应。全过程可于数分钟内完成，阳性结果在膜上呈红色斑点。 试剂及材料 1. 渗滤装置：为一塑料小盒（4x3x0.6cm），分为底、盖两层，盖的中央有一个直径0.5cm的小孔。盒底充填吸水性较强的垫料，盖孔下，紧贴垫料放置一片NC膜。紧闭盒盖，即为渗滤装置。在孔中的NC膜上点加1-2ml特异性抗体(一抗)或抗原，室温自然干燥，保存于放干燥剂的密封塑料袋中备用。 2. 封闭液：含0.2%BSA和0.05%吐温-20的洗涤液。 3. 洗涤液：50mol/L，pH7.2 PBS。 4. 特异性抗体(一抗)或抗原 5. 金标抗体 操作方法 1. 取出渗滤器，先在小孔的NC膜上，滴加2滴（约100ml）封闭液； 2. 待其渗入盒内，在NC膜上，加待检标本1滴（约50ml）； 3. 待其渗入盒内，在NC膜上，滴加2滴（约100ml）洗涤液； 4. 待其渗入盒内，在NC膜上，加金标抗体1滴（约