动物样品的采集及处理方法 遗传学数据在野生动物和圈养动物的保护和管理中变得日益重要。在本文中，我们总结了一些能简便而有效地获得样品及数据的方法。我们在采集样品之前，最好对将要进行的遗传学分析有所了解。然而，采集者并非都是研究者，当采集地与实验室有相当距离时，采集者常常要保存好样品直到有合适的接受者或存放地，这就要求采集者应具备一定的经验。首先，所有样品均应以个体序号进行标注，并且应写上种名、性别、采样者姓名以及采集日期，越详尽越好，以便同一个体的不同类数据可以相互引用，另外，地理来源的标注也很重要，需要注明。对于野外捕获的动物，有条件者最好在地图上标明捕获地及其经纬度。对圈养动物的每个野外捕获种源都要有同样的记录和详尽的谱系图，因为谱系图可用于计算近交系数。总之，背景资料越详细越好，即使不能得到这里所列的全部信息，也要尽可能详尽。1 样品的测量方法 在一定数量的分类群中采用的标准测量方法可用于以下四个方面：（1）分类学上：一套理想的测量方法应能大致上重建机体每个主要硬件部分的形状和大小。（2）不对称性分析：机体各部分的起伏不对称，也许表明进化过程在一定程度上正在变得不稳定，这可能是环境

蛋白印迹(Western Blot) 常用试剂 >>>蛋白抽提 货号 品名 规格 价格 备注 WB003 组织蛋白抽提试剂 100ml 300 全蛋白抽提 WB004 RIPA裂解液 100ml 100 全蛋白抽提 WB005 细胞核蛋白与细胞浆蛋白抽提试剂 100次 680 　 WB006 膜蛋白和胞质蛋白抽提试剂 100次 680 　

吖啶橙区分活细胞 DNA 和 RNA 的荧光组织化学染色法 吖啶橙《acridine oran。AO)属于三环杂芳香类异嗜性阳离子荧光染料，主要以两种方式与核酸结合，一是嵌入核酸双链的碱基对之间；二是与单链核酸的磷酸发生静电相互作用。当吖啶橙与DNA或RNA结合时，最大发射波长分别为525nm或650nm，产生绿色荧光或橙红色荧光，因此，吖啶橙是研究核酸的一种常用荧光组织化学染料。下面介绍应用吖啶橙区分活细胞和原位组织细胞DNA和RNA荧光组织化学染色法。 1．溶液配制 (1)吖啶橙浓缩液(4℃、避光，可保存数月) 双蒸水 50ml 吖啶橙 50mg (2)甲液 双蒸水 200ml HCl 16ml NaCl 1．74g Triton X-100 0．2ml (3)乙液 0．2mol／LNa2HP04／0．1mol／L枸橼酸缓冲液(pH 6．0) 双蒸水 100ml Na2 HP04・12H20

蛋白质的提取工作是将经过处理或破碎的细胞，置于一定的条件和溶液中，让被提取物充分释放出来的过程。影响提取的因素主要是被提取物质在提取的溶液中溶解度的大小及由固相扩散到液相的难易程度。某一物质在溶剂中溶解度大小与该物质的分子结构及溶剂理化性质有关，一般遵守“相似相溶”的原则。扩散作用对蛋白质的提取有一定的影响。减小溶剂的黏度、搅拌和延长提取时间可以提高扩散速度，增加提取效果，提取的原则是“少量多次”，即对于等量的提取溶液，分多次提取比一次提取效果好得多。大部分蛋白质都可以溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液，少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中，因此，可采取不同溶剂提取分离和纯化蛋白质。 一、水溶液提取法 稀盐和缓冲系统的水溶液对蛋白质的稳定性好，溶解度大，是提取蛋白质最常用的溶剂，通常用量是原材料体积的1～5倍，提取时需要均匀地搅拌，以利于蛋白质的溶解。提取的温度视其有效成分的性质而定。一方面，多数蛋白质的溶解度随着温度的升高而增大，因此温度高利于溶解，缩短提取时间。但另一方面，温度升高会使蛋白质变性失活，因此基于这一点考虑，提取蛋白质时一般采用低温（5℃以下）

目的和要求 了解核糖核酸（RNA）的提取方法及其组成成分的定性测定。 原理 核酸在机体生命活动中具有重要意义，核酸可分为核糖核酸和脱氧核糖核酸两类。酵母中富含的核糖核酸在碱处理下成为可溶性的钠盐与蛋白质等其它成分分开，然后用乙醇提取。加酸水解核酸，可鉴定其组成成分。 用硫酸水解RNA时，可以生成磷酸、戊糖和碱基。各种成分以下列反应鉴定： （1） 磷酸与钼酸铵 试剂 作用能产生黄色的磷钼酸铵沉淀。 （2） 核糖与地衣酚 试剂 反应呈鲜绿色。 （3） 嘌呤碱与硝酸银能产生白色的嘌呤银化物沉淀。 操作方法 一、酵母RNA的提取 （1）取酵母3克置于研钵中，加入25毫升0.5%氢氧化钠溶液研成匀浆。 （2）将匀浆移入三角瓶中，在沸水浴上加热水30分钟。 （3）离心沉淀10-15分钟。 （4）取上清液用3M醋酸4-5滴酸化至兰色石蕊试纸变红色 。 （5）一面搅拌一面加入含2%HCL的95%酒

纯化病毒第一步 剪碎法CEF的制备 实验前准备 PH7.2 PBS（SW配）﹑平皿一小包（３个）﹑饭盒１（器械，玻璃漏斗）﹑饭盒2（纱布）﹑离心管２﹑碘酊﹑废液缸﹑０.１％新洁尔灭溶液﹑０.２５％胰酶﹑９日龄ＳＰＦ胚２﹑Ｍ１９９培养基 实验步骤 Ⅰ 首先SPF胚新洁尔灭溶液表面消毒，再碘酊﹑酒精消毒，最后小心敲破气室 Ⅱ 准备两把眼科弯头镊子，一把撕破尿囊膜和羊膜，另一把夹鸡胚。用镊子把鸡胚取出，浸泡于已倒入PBS的平皿中　①去爪②去内脏 Ⅲ 把鸡胚从平皿中取出，置于另一含PBS的平皿中，再一次洗涤 Ⅳ 重复Ⅳ步骤 Ⅴ 把鸡胚移至５０ml小烧杯内，小剪子剪成肉泥 Ⅵ 把肉泥吸入离心管中，如出现肉块较大，可继续剪，直至全部肉泥吸入离心管中。在离心管中加入PBS,洗３次。上清由红至清 Ⅶ 加入８ml０.２５％胰酶消化，肉泥由块状→絮状（胰酶pH7，于37℃水浴中预热） Ⅷ 加入Ｍ199培养基终止，注意在加入培养基后轻轻混匀，切勿吹打

对于大的基因组，DNA 酶切图谱凭肉眼是分辨不开的（EB 染色），因为大小不等的分子呈现弥散分布，只有借助灵敏的放射性同位素（或其他化学发光物质），将靶 DNA 在凝胶上（膜上）的带型通过特定的探针与之杂交，转换成 X 光片上直观的带型，才能进行相关分析。另外如果需要鉴定或寻找与已知 DNA 同源的 DNA 片段如：染色体步查、基因组文库的评价和利用、阳性克隆的分析鉴定、转基因拷贝数分析等也都需进行 DNA 的分子杂交实验。实验目的：掌握同位素的操作及防护方法；掌握预杂交、探针的标记及分子杂交技术实验原理：依据碱基配对原则，用放射性同位素标记的 DNA 探针，与固着在膜上的靶 DNA 杂交，经放射自显影，确定靶 DNA 的位置。1．预杂交：膜上有许多没有结合 DNA 分子的地方，若不在杂交前用一些封闭剂结合位点，加入探针后，探针 DNA 分子将会结合在这些位点上，导致杂交背景深，预杂交的目的是用非特异性 DNA 分子（鲑精 DNA ）及其它高分子化合物（封闭剂）将待杂交膜中的非特异性位点封闭，从而减少杂交背景。2．探针的标记：体外标记 DNA 或 RNA 的方法有多种，如：末端标记，随

　一、标本制作　　可制作涂片、印片、细胞单层培养物、组织切片，经适当固定或不固定，作免疫荧光染色用。　　二、荧光抗体染色方法　　（一）直接法　　1．染色 切片经固定后，滴加经稀释至染色效价如1：8或1：16的荧光抗体（如兔抗人γ-球蛋白荧光抗体或兔抗人IgG或IgA荧光抗体等），在室温或37℃染色30min，切片置入能保持潮湿的染色盒内，防止干燥。　　2．洗片 　倾去存留的荧光抗体，将切片浸入pH7.4或pH7.2PBS中洗两次，搅拌，每次5min，再用蒸馏水洗1min，除去盐结晶。　　3．用50%缓冲（0.5mol/L碳酸盐缓冲液pH9.0～9.5）甘油封固、镜检　　4．对照染色　　①正常免荧光血清染色，如上法处理切片，结果应为阴性。 ②染色抑制试验（一步法）：将荧光抗体和未标记的抗体球蛋白或血清（相同）等量混合，如上法处理切片。结果应为阴性。为证明此种染色抑制不是由于荧光抗体被稀释所致，可用盐水代替未标记抗血清，染色结果应为阳性。此法结果较二步法稳定。 ③类属抗原染色试验，前面已作叙述。　　直接法比较简单，适合做细菌、螺旋体、原虫、真菌及浓度较高的蛋白

生物化学笔记 针对王镜岩等《生物化学》第三版 适合以王镜岩《生物化学》第三版为考研指导 教材的各高校的生物类考生备考 目 录 第 一 章 概 述------------------------------01 第 二 章 糖 类------------------------------06 第 三 章 脂 类------------------------------14 第 四 章 蛋 白 质（注1）-------------------------21 第 五 章 酶 类（注2）-------------------------38 第 六 章 核 酸（注3）--------------------------------------48 第 七 章 维 生 素（注4）-------------------------56 第 八 章 抗 生 素------------------------------60

从孕17-18天的雌鼠的胎儿分离神经元细胞。孕雌鼠麻醉然后解剖，胎儿收集到HBSS-1中然后快速断头。剥离脑膜和白质后，大脑皮质收集入HBSS-2 液中机械磨碎。皮质碎片移到有0.025%胰酶的HBSS-2液中37°C消化15分钟。胰酶消化后，细胞用含有10%胎牛血清的HBSS-2液冲洗两次，用神经基础培养液重悬细胞（培养液添加了0.5mM左旋-谷氨酰胺，25μM左旋-谷氨酸，2%B27和0.12mg/mL庆大霉素）。以1×105cell/cm2接种到事先用多聚赖氨酸包被的培养皿上，放到37°C，5%CO2湿温培养箱里进行培养。每3天用吸管换液，一次换0.5mL。体外培养8天细胞就能用于实验。 选用17-18天的胎鼠能够提高神经元培养的效率，因为与乳鼠相比胚胎组织的细胞连接还很少。因此，用乳鼠会使神经元的分离更加困难，会造成细胞连接不可逆的损伤，细胞之间的共同的轴突和树突更容易发生损伤。另外，用出生后1天内的大鼠皮质培养容易有胶质细胞污染，而用胎鼠则可以避免这种情况。如果用的是乳鼠，一般是在培养36个小时后加入阿糖胞苷，抑制胶质细胞生长。 另外，如果把分化的影响看成是考虑的重要因素，可

佚名 细菌在自然界必然不断经受周围环境中各种因素的影响。当环境适宜时，细菌能进行正常的新陈代谢而生长繁殖；若环境条件变化，可引起细菌的代谢和其他性状发生变异；若环境条件改变剧烈，可使细菌生长受到抑制或导致死亡。因此掌握微生物对周围环境的依赖关系，在医疗实践中，一方面可创造有利条件，促进微生物的生长繁殖，从病理材料中分离培养病原微生物，有助于传染病的诊断以及制备疫苗，来预防某些传染病；另一方面，也可利用环境对细菌不利因素，抑制或杀灭病原微生物，以达到消毒灭菌的目的。本节重点介绍外界环境对细菌不利因素，提高对消毒灭菌的认识以便在实际工作中加以应用。 消毒(Disinfection)杀灭病原微生物的方法。用以消毒的药物称为消毒剂(Disinfectants)一般消毒剂在常用浓度下，只对细菌繁殖体有效。对于芽胞则需要提高消毒剂的浓度和延长作用的时间。 灭菌(Sterilization)杀灭物体上所有的微生物(包括病原体和非病原体的繁殖体和芽胞)的方法。因此，灭菌比消毒的要求高；但在

　一、率的标准化法 　　率的标准化法，就是在一个指定的标准构成条件下进行率的对比的方法。当我们对两个频率指标进行比较时，应该注意这两组（或两组以上）对象内部构成是否存在差别足以影响分析结果，如果存在的话，可应用标准化法加以校正。这种经标准化校正后的率，称为标准化率，简称标化率(standardized rate)。率的标准化法有直接法的间接法。试以年龄别的标准化法介绍如下。 表20-3 某年甲乙两厂石棉工的石棉肺发病比较 年龄组（岁） 甲厂 乙厂 接触人数 病人数 发病率（‰） 接触人数 病人数 发病率（‰） ＜45 400 4 10.0 800 10 12.5

相关专题 细胞最基本的生命活动是细胞的生长、分化与分裂。细胞分裂周期可分为DNA 及蛋白质合成 作准备的G1 期、DNA 合成的S 期、为有丝分裂作准备的G2 期与有丝分裂的M 期以及细胞呈相对稳定状态的G0 期。生物信息通过一系列复杂的信号传递过程来诱导相关基因的表达、调控细胞分裂,决定细胞的转归。衰老细胞的细胞周期常阻滞于G1/ S 期或G2/M期,尤其是G1 末期的限制性调控点“R”点的阻滞。 促分裂素原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAP激酶,MAPK)链是真核生物信号传递网络中的重要途径之一，在基因表达调控和细胞质功能活动中发挥关键作用。MAPK链由3类蛋白激酶MAP3K-MAP2K-MAPK组成,通过依次磷酸化将上游信号传递至下游应答分子 。 MAPK信号通路 包括：MAP激酶(MAPK)、MAPK激酶(MEK、MKK或MAPK 激酶)和MEK激酶(MEKK、MKKK或MAPK激酶激酶)。在哺乳动物机体中，已经发现五种不同的MAPK信号转导通路。其中ERK1/2信号转导通

一、本实验室超临界CO2萃取设备由专人保管、专人负责，任何人未经责任人允许，不准擅自开机使用。二、负责管理设备的责任人，有义务承担实验教学和为其他教师提供科研服务。三、若利用实验室场地或仪器设备进行非教学实验活动，应具备书面报告，经中心主任批准后方可施行，不得擅自安排。四、设备责任人有权拒绝不遵守操作规程和不具备使用条件者使用有关仪器设备。五、设备使用者要爱护仪器、设备，尽量做到正确使用仪器、设备，要对仪器设备进行经常性的检查工作，每次完成实验，应当即检查仪器设备的完好性及完整性，以保证每次实验中设备、仪器都正常使用，如有损失，应及时书面向中心主任报告，查明情况后，按有关规定处理。六、学生使用该仪器时，指导教师应把仪器的使用原理、操作程序。实验注意事项详细地解释清楚，并亲自演示一遍给学生看。学生上机时，必须十分熟悉该仪器的性能，操作规程，才可上机操作。七、仪器使用后，使用者应认真填写操作记录（包括仪器的性能是否正常、状态是否完好无损），若有故障，应及时维修，若自己不能维修的，应及时报请实验室负责人及中心主任，由中心主任向有关部门申请及时维修。八、设备使用者要维护实验室的整洁卫生，定期进

1.适用范围适用于YRT-3型药物熔点仪的使用与维护。2.职责检验员：严格按照SOP进行操作、维护保养，并作好记录。QC主管：监督检查SOP执行情况。3.主要技术指标熔点测定范围：室温至270℃升温速率：0.5℃/分、1.0℃/分、1.5℃/分、3.0℃/分四档线性升温速率偏差：<5%熔点测定精度：＜200℃时不大于±0.5℃，＞200℃时不大于±1.0℃温度予置：室温至250℃范围内任意予置，误差±1℃传温介质：甲基硅油传温液杯：250ml高型烧杯使用环境温度：10℃～30℃电源：220±22 V ﹤200W4.使用方法4.1.将装有传温液（140～150ml）的烧杯置机座上，并加入转子，接通电源，开机，仪器即处于复位状态。4.2.预置温度在复位状态时利用“+”、“一”两个键设置预置温度（低于样品熔点温度10℃），此时数码管显示的为预置温度，“+”、“一”键按下后其上面对应的指示灯亮，约3秒钟后自动熄灭，此时仪器已经记录下了本次预置值，下次开机时预置温度即为本次预置值。若指示灯没有熄灭即按了其它键，则本次顶置温度值不被记忆，下次开机时预置温度为上次预置值。4.3.温度预置好后按

详细介绍： 蒸馏水:通过蒸馏冷凝制得的水所以里面的无机盐会含的很少.如果只是经过一次蒸馏得到的水里面虽然那些不挥发的组分（盐类）被除去但水中挥发的组分（氨、二氧化碳、有机物）还是会进入蒸馏水中. 双蒸水:两次蒸馏 三蒸水:三次蒸馏 超纯水:超纯水又称高纯水，是指将水中的导电介质几乎全部去除，又将水中不离解的胶体物质、气体和有机物均去除至很低程度的水，。超纯水的含盐量在0. 1mg/L以下,电导率小于0. 1μs/cm。常见纯化仪器:NANOpure或Milli-Q 去离子水:应用离子交换树脂去除水中的阴离子和阳离子，但水中仍然存在可溶性的有机物，可以污染离子交换柱从而降低其功效，去离子水存放后也容易引起细菌的繁殖。 从自来水到去离子水一般要经过几步处理 先通过石英砂过滤颗粒较粗的杂质再分别依次通过阴阳离子交换柱去除离

【实验目的】 通过观察影响尿生成的若干因素，加深对尿生成过程及其调节机制的理解。 【实验原理】 尿生成的过程包括肾小球的滤过、肾小管和集合管的选择性重吸收和分泌三个基本环节。凡能影响上述过程的因素，都可以影响尿的生成，从而引起尿的质或量发生改变。 【实验对象】 家兔。 【实验器材】 兔手术台、哺乳动物手术器械、生物信号采集处理系统、血压换能器、记滴器、动脉插管、气管插管、膀胱插管、注射器、试管及试管夹、酒精灯、20％氨基甲酸乙酯溶液、生理盐水、20％葡萄糖溶液、1：10 000去甲肾上腺素溶液、垂体后叶素、肝素、呋塞米(速尿)、班氏 试剂 。 【方法和步骤】 一、动物准备 耳缘静脉注射20％氨基甲酸乙酯溶液(5ml／kg)麻醉家兔，仰卧位固定于兔手术台。 二、手术 1. 颈部手术 (1)分离右侧迷走神经，穿上丝线备用。 (2)分离左侧颈总动脉，做动脉插管。插管内应预先充满肝素溶液，并通过血压换能器连接到计算机生物信号采集系统，描记血压。 2. 腹部手

大脑与神经元 人类大脑由大约 100 亿个神经元组成，神经元之间通过突触相互连接成复杂的功能网络，因而大脑是人体最复杂的器官。目前，人们对大脑的功能机制的认知还停留在较低的水平，研究大脑的功能也成为科学家的终极目标。2013 年 1 月，人脑工程成为欧盟「未来新兴旗舰技术项目」之一，未来 10 年内将获得 10 亿欧元的科研经费。随后，奥巴马宣布将从 2014 财年的政府预算中拿出 1 亿美元，启动"人脑活动图"项目研究（Brain Activity Map project）。这两大脑科学研究计划势必将掀起神经科学研究的热潮。 神经元，又称神经原或神经细胞，是构成神经系统结构和行使功能的基本单位。神经元是具有长突起的细胞，它由细胞（Soma）和细胞突起-轴突（Axon）和树突（dendrite）构成。 神经元与神经元之间会发生频繁的信号传递与交互，从而构成非常复杂的神经网络。神经元之间的信号传递依赖于细胞膜上的离子通道（Ion channel）。离子通道的开闭会引起膜内外离子的交换，如 Na+/K+ 离子，从而引起膜电位的变化。所以说神经元的信

1、基本原理真核生物中，从个体的生长、发育、衰老、死亡，到组织的得分华、调亡以及细胞对各种生物、理化因子的应答，本质上都涉及基因的选择性表达。高等生物大约有30 000个不同的基因，但在生物体内任意8细胞中只有10%的基因的以表达，而这些基因的表达式安事件和空间顺序有序地进行着，这种表达的方式即为基因的差异表达。其包括新出现的基因的表达与表达量有差异的基因的表达。生物体表现出的各种特性，主要是由于基因的差异表达引起的。由于基因的差异表达的变化是调控细胞生命活动过程的核心机制，通过比较同一类细胞在不同生理条件下或在不同生长发育阶段的基因表达差异，可为分析生命活动过程提供重要信息。研究基因差异表达的主要技术有差别杂交（筛选）（differential hybridization）、扣除（消减）杂交（subtractive hybridization of cDNA， SHD）、mRNA差异显示（mRNA differential display， DD）、抑制消减杂交法（suppression subtractive hybridization， SSH）、代表性差异分析（represen

1973年重组DNA获得成功，开创了基因工程的新时代。以此为基础，生物技术作为前途远大的高新技术产业在世界范围兴起，生物工程将成为现代化的大工业，与此同时还极大地推动了医学和农业科技的发展，在这些领域中正展示出广阔的应用前景。 培育转基因动物的设想始于20世纪70年代。科学家大胆设想，如将所需要基因转入产乳量高的牛、羊等家畜体内，从动物的乳汁中获取、提炼珍贵的蛋白质药物，成本将会大为降低。 自1982年第一只转基因动物(小鼠)降生以来，各种转基因动物相继问世。1998年，中国科学家成功获得了首批(5只)转基因山羊。其中一只奶山羊的乳汁中，含有堪称血友病人救星的药物蛋白――有活性的人凝血因子。 目前，世界上已有数十家转基因动物公司，重点研究通过动物乳汁生产贵重的药用蛋白质和营养药物，一些走在前面的公司已获得巨大的经济效益。荷兰一家公司用转基因牛生产乳铁蛋白，每年销售额达数亿美元；英国罗斯林研究所(第一个研究出克隆羊)用转基因羊生产可治疗肺肿的一种蛋白酶，每升羊奶可售6000美元。饲养转基因动物将成为具有高额利润的新型高科技产业。 在转基因植物方面，1983年科学家培育