一、实验原理：2-DE的第一向电泳等电聚焦是基于等电点不同而将蛋白粗步分离，第二向SDS-PAGE是基于蛋白质分子量不同，而将一向分离后的蛋白进一步分离。这样就可以得到蛋白质等电点和分子量的信息。二、实验步骤：1.样品的溶解取纯化后的晶体蛋白3.0mg，加入300μl裂解液(1mg蛋白:100μl裂解液)振荡器上振荡10min左右，共处理一个小时。其中每隔10～15分钟振荡一次，然后13200rpm离心15min除杂质，取上清分装，每管70μl，—80℃保存。2.Bradford法测蛋白含量取0.001g BSA（牛血清白蛋白）用1ml超纯水溶解,测定BSA标准曲线及样品蛋白含量。取7个10ml的离心管，首先在5个离心管中按次序加入0μl,5μl,10μl,15μl,20μl 的BSA溶解液，另2管中分别加入2μl的待测样品溶液，再在每管中加入相应体积的双蒸水（总体积为80μl），然后，各管中分别加入4ml的Bradford液（原来配好的Bradford液使用前需再取需要的剂量过滤一遍方能使用），摇匀，2min在595nm下，按由低到高的浓度顺序测定各浓度BSA的OD值，再测样品OD值

转基因生物(GMO)的检测在农业与食品工业中的用途十分广泛 。学术界对转基因生物的观点各不相同，一方面可以利用转基因技术来产生抗病、抗虫害型作物来增加农业产量，而另一方面，转基因生物与野生群落的共同分布可能会威胁到物种的多样性。从长远看来，转基因生物对整个环境和人类的影响还是未知的。这也就是一些国家的议员们始终对转基因作物实行严格地控制，并使其不能普及的原因。在欧洲，必须明确标示食物中的转基因成分。而对于那些标有不含转基因成分的食物来说，生产商必须确定其所用的原材料一定是不含转基因成分的，为此政府已建立了检测食品中转基因成分的体制。其中，最重要的是转基因检测方法的可靠性和有效性。所以我们利用分子生物学技术建立起一套基于PCR反应的实验方案，用于食品质控实验室的工作。最要害的是第一步：DNA提取，我们做了很严格的监控 。我们依据植物基因组和质粒DNA的提取效率来选择DNA提取试剂盒。整个提取过程包括破坏细胞壁、去除RNA和利用沉淀去除蛋白质，然后将DNA吸附在层析柱上，经过洗涤后再洗脱下来。类似的方法已经用于从其他一些植物和病毒中提取DNA。PCR反应的过程分为三个阶段：(1)通过加热使

一 设计引物应遵循以下原则 1 、引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。2 、引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。3 、引物碱基：G+C含量以40-60%为宜，G+C太少扩增效果不佳，G+C过多易出现非特异条带。ATGC最好随机分布，避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。上下游引物的GC含量不能相差太大。附加序列(RT site, Promoter sequence)加到5'端, 在算Tm值时不算,但在检测互补和二级结构是要加上它们. 引物对的Tm差异不超过5℃， 设计时温度和GC含量是个主要的参数，做复合扩增时更要设计成相近的温度，而且引物加个尾影响不大。但要切记BLAST，包括查阅文献的引物.如果两个引物Tm不同，将退火温度设定为比最低的Tm低5℃, 或者为了提高特异性，可以在根据较高Tm设计的退火温度先进行5个循环，然后在根据较低Tm设计的退火温度进行剩余的循环。4 、避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，特别是3'端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。引物序列在模板内应当没有相似性较高，尤其是3’端

相关专题 引物设计 一步步教你设计简并引物 　　近日看到两位虫友发帖交流有关CODEHOP方法设计简并引物，这让我想起两年前因为需要获得几个家族的未知序列特异基因而学习利用codehop方法设计简并引物的经历。当时，通过常规方法设计出来的简并引物扩增效率极低，而且特异性非常差，为此纠结了好一段时间。后来从一同事那里得知设计简并引物可以利用codehop方法，但是他对该方法也只是听说没有用过，所以我只能自己在网上查找资料并且试图询问有经验的朋友的帮助。除了找到几篇经典文献，在网上寻求帮助几乎没有什么信息。也许是因为用过该方法的人比较少，多数帖子只是看到有人在讨论，但是没有使用经验。 　　通过我的经验，感觉codehop方法设计简并引物的确有它的优点可实用性。今天又看到有人求助，所以索性把自己的经验说一说，让更多需要的朋友能够从中获益。 　　首先我想说codehop本身是一种简并引物设计 理论方法(COnsensus DEgenerate Hybrid Oligonucleotide Primers )。传统简并引物设计 方法通

从一九八五年起，DNA 鉴定即被应用于亲子鉴定，目前全世界的亲子鉴定几乎毫无例外都采用 DNA 鉴定。DNA 的全名为去氧核醣核酸，所有生物无论动物或植物细胞的染色体上，都具有这个来自父母双方，外观呈双股螺旋状的遗传因子，基本上仍延续父母某部分的遗传特性，但在每个生物体的表现却与双亲不尽相同。 DNA 亲子鉴定是从口腔细胞、血液或培养的组织中提取 DNA，先用酵素将 DNA 样本切成小段放进凝胶内，用电泳槽推动 DNA 小块使其分离，再将分离开的基因放在尼龙薄膜上，使用 DNA 探针寻找基因，相同的基因会凝聚在一起，经由特别的染料染色，在Ｘ光照射下便显出由 DNA 探针凝聚在一起的黑色条形码。这条形码一半与母亲的基因条形码相符合，另一半则与父亲的相符合。用几组不同的探针，重复上述的过程，每一种探针用于寻找 DNA 不同的部位并形成独特的条形码，即可得到超过 99.9% 的分辨率。 上述基因鉴定其实是针对人体 DNA 的碱基对进行鉴定，所谓碱基对到底是什么？我们如果从人体解剖由大而小来介绍可能比较容易了解。一个人的个体包含许多系统，诸如消化系统、呼吸系统、生殖系统。由系统而器

趋化因子受体 趋化因子受体属七次跨膜受体家族(STSR-F) 趋化因子受体的分类 趋化因子受体因配体的种类不同而相应地分成四组。迄今共确定19种趋化因子受体：6种CXCR，11种CCR，CXsCR和XCR各一种。 1．CXCR趋化因子受体 CXCRl和IL-8结合；CXCR2可与多种配体结合；CXCR3表达于激活的T细胞；CXCR4含352个氨基酸残基，编码基因位于人染色体2q21，主要表达于单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和激活的T细胞，后来发现它是HIV感染T细胞的一种协同受体。CXCR5表达于成熟的B细胞表面。SCID鼠由于缺乏成熟的B细胞，脾脏内的CXCR5的水平大大降低。CXCR6主要表达于NKT细胞和活化的工型CD4T细胞和CD8T细胞。 2.CCR趋化因子受体 CCR／基因位于人染色体3p21，成熟分子含355个氨基酸残基，配体为MIP―l。和RAN―TE5；CC只1主要表达于单核细胞、中性粒细胞、T细胞、B细胞和嗜酸粒细胞，以及肺、肝等组织，类风湿关节炎患者的外周血和关节滑液中也检出CCRl。CCR2主要与MIP―1和MI

1、不同鼠群的管理不同的鼠群，管理方式、方法或要求是不同的。核心种鼠群担负着为生产鼠群提供种鼠的任务。管理上要求比较细致。当采用一种公鼠与五只种母鼠循环配种时，种公鼠与种母鼠在同一鼠罐中同居10天，然后将怀孕种母鼠单罐饲养，再使种公鼠与另一鼠罐的种母鼠同居10天。依此类推，循环往复进行。根据需要和培育方向，有计划地配种、留种。留种时按1：1的比例进行选留，多余仔鼠予以淘汰。选留的仔鼠，要延长哺乳期至23天，离乳时体重要求达13克以上。保证向生产种鼠群提供优质后代。生产种鼠群交配繁殖频繁，尤其种母鼠的负担重，体质消耗大，要保证供给充足的营养，定时补充少量的葵花籽、麦芽和拌有鸡蛋的软料，保证供给清洁饮水。按照选种、选配的要求，将一只种公鼠与一只种母鼠放在同一鼠罐中进行配种繁殖。配种后20天仍未受孕者，可采取鼠罐之间倒换各公鼠的方法，提高种母鼠的受孕率，并及时作好配种、产仔、离乳等项登记及统计工作。生产繁殖群中离乳后的幼鼠转入待发鼠群饲养。待发鼠群在管理上一定要将雌雄分开，并根据不同日龄、体重、品系等将它们分别放入铁盘中饲养。大型铁盒装15克以下幼鼠60只，25克以上幼鼠30只。不同铁盒中的

一、生活习性家兔虽然经人类长期的驯化和培育已成为一种常用的实验动物，但仍然继承了其祖先野生穴兔的大部分生活习性。1. 夜行性嗜眠性家兔在夜间十分活跃，据测定，家兔晚上所采食的饲料占全天的75％左右，饮水占60％左右。在白天，家兔表现安静，除喂食时间外，常常闭目睡眠。若使其仰卧，顺毛向抚摸其胸腹部并按摩太阳穴时，可使其进入睡眠状态。利用这一特点，在不麻醉的情况下可进行短时间的实验操作。2. 听觉嗅觉灵敏家兔具有发达的听觉和嗅觉器官并特别灵敏，但异常胆小，如受惊过度往往乱奔乱串,甚至冲出笼门。可凭嗅觉来判断仔兔,对非亲生仔兔常拒绝哺乳，甚至把仔兔咬死。散养的家兔喜欢穴居，有在泥土地上打洞的习性。3. 性情温顺群居性差如果群养，同性别成兔经常发生斗殴咬伤，因此实验兔适于笼养，较易于管理。虽性情温顺，但若捕捉不当常被其利爪抓伤皮肤，在饲养管理和实验操作中要注意正确的抓取方法。4. 厌湿喜干耐寒怕热家兔的被毛较发达，汗腺较少，能够忍受寒冷而不能耐受潮热。当气温超过30℃以上或环境过度潮湿时，成年母兔易引起减食、流产、不肯哺乳仔兔等现象，在炎热的夏季还是家兔传染病易于爆发的季节。5. 啮齿行为家兔

问：哪位大侠做过病毒纯化，可以提供一个病毒立离心纯化的详细protocol吗？拜托了，先谢谢大家了！答：病毒提纯有很多方法的 ，可以用理化方法浓缩，吸附法，超速离心法等。我以前用PEG沉淀法，比较简单。1、用超声波或冻融的方法使细胞破碎释放出病毒；2、慢慢搅动并加入NaCl终浓度是0.5mol/L,有助于病毒的沉淀，再等量加入10％PEG；3、4度过夜或放置一段时间；4、8000/min离心30分钟，收集病毒沉淀；5、将病毒沉淀加入适量的pbs中，4度过夜；6、10000/min离心1小时。还可以用梯度离心或其他方法进一步纯化。问：您的方法对我现在太有帮助有了，谢谢。但有几个地方不是很清楚，可以向你请教码？1、我的是鸡胚鸟囊液，病毒效价为1：640，只有6ml左右，效果怎样？2、第二步加等量10％PEG是什么意思？您用的PEG的分子量是多大的？10％是PEG溶液的浓度吗？3、最后 一步离心后还是收集沉淀吗？答：一般使用的是PEG6000就可以了。如果对样品的纯度不是严格要求的话，可以建议使用Millpore 公司的 离心浓缩柱，Amicon 系列的可以一次浓缩15ml样品。记得有一篇关

一、经乙二醛和二甲基亚砜变性处理后进行的RNA电泳 这一方法原于McMaster和Carmichael(1977)。 含有乙二醛－DMSO的凝胶比含有甲醛的凝胶更难于进行电泳， 因为前者泳动速率较慢而且需将电泳液时行循环以避免电泳过程中形成过高的H＋梯度。尽管上述两种凝胶具有近乎相等的分辨率（Miller，1987），但用含朋乙二醛－DMSO的凝胶对RNA进行分级离，通常Northern杂交所显示的RNA条带更为锐利。1、在灭菌的微理离心管内，混匀下列液体：6mol/L乙二醛 5.4μlDMSO 16.0μl0.1mol/L磷酸(pH7.0) 3.0μlRNA（多达10μl） 5.4μl市售乙二醛通常为40％溶液（6mol/L）。 由于接触空气的后乙二醛易于氧化，所以使用前需通过混合床树脂（Bio-Rad AG 501-X8 对乙三醛溶液进行去离子处理，直至溶液pH值大于5.0为止，然后可分装在小份， 用盖紧的小管贮存于－20℃。每小份乙二醛溶液只用1次，剩余液体应予丢弃。0.1mol/L磷酸钠（pH7.0）的配法如下：将3.9ml 1mol/L磷酸二氢钠、6.1ml 1mol/L磷酸

【 目的和原理 】 一条坐骨神经干是由许多兴奋性不同的神经纤维所组成的。保持足够的刺激时间不变，刚好能引起其中兴奋性较高的神经纤维产生兴奋，表现为受这些神经纤维支配的肌纤维发生收缩，此时的刺激强度即为这些神经纤维的阈强度(threshold intensity)，具有此强度的刺激叫阈刺激(threshold stimulus)。随着刺激强度的不断增加，有较多的神经纤维兴奋，肌肉的收缩反应也相应逐步增大，强度超过阈值的刺激叫阈上刺激。当阈上刺激强度增大到某一值时，神经中所有纤维均产生兴奋，此时肌肉做最大的收缩。再继续增强刺激强度，肌肉收缩反应不再继续增大。这种能使肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度称为最适强度(optimal intensity)。具有最适强度的刺激称为最大刺激(maximal stimulus)。可见在一定范围内，骨骼肌收缩力的大小决定于刺激的强度。不同频率的电脉冲刺激神经时，肌肉会产生不同的收缩反应。若刺激频率较低，每次刺激的时间间隔超过肌肉单次收缩的持续时间，则肌肉的反应表现为一连串的单收缩(twitch)；若刺激频

（一）物化性状和用途深棕色片状，遇光变色，极易潮解，稍具有盐酸臭味。密度：2.90，熔点：约3000℃，沸点：约3060℃。用作表焊、照相制版、印刷线路、金属板刻度腐蚀以及净水剂、催化剂。（二）毒性本品经口和腹腔摄入高毒。高温时分解释出剧毒烟雾。（三）短期暴露的影响对眼睛、皮肤和粘膜有刺激作用。（四）长期暴露的影响直接接触眼睛、鼻、呼吸道及皮肤能引起化学灼伤，并使眼、鼻、粘膜和皮肤感到灼痛。对很多金属有腐蚀性。（五）火灾和爆炸本品可燃。着火时用水、二氧化碳、泡沫灭火。（六）化学反应性易溶于水，水溶液呈酸性。易溶于乙醇、丙酮、乙醚和异丙醚。溶于二硫化碳、苯胺。不溶于甘油、三氯化磷和氯化亚锡。（七）人身防护皮肤：应使用手套、工作服、工作鞋。工作场所应备有可用的安全淋浴和眼睛冲洗器具。眼睛：如需要应戴用面罩。（八）急救皮肤接触：先用水冲洗，再用肥皂彻底洗涤。眼睛接触：用大量水冲洗。（九）储藏和运输储存于阴凉、干燥处。包装必须严密封闭，防止受潮融化沾污其它物品。与铜、铜合金的制品及镀锡、镀镍等制品隔离储运，以免腐蚀。包装方法：（Ⅲ）类。（十）安全和处理用大量水冲洗，经稀释的污水排入废水系统。

一、 常见故障1、 打印机不工作（1） 酶标仪后部DIL开关设置不正确。DIL标准设置：左 下下下下下下上下 上上下下上下上上 右（人站在仪器后部，面向仪器）。（2） 酶标仪内置打印机开关处于开的位置。应在总参数中设置内置打印机为关。（3） 打印机接口接错（接在了计算机接口上了）。应将打印机联系接在DIL开关正下方的打印机接口上，RS-232接口为计算机接口。（4） 打印机联线有问题：有些配备的新打印机联线仍有问题，请确保打印机联线无问题。（5） 打印机未联机，请确认打印机上的联机键已联机。（6） 打印机无纸或纸未装好，请装好打印纸。（7） 有些打印机有开机顺序，有的需先开打印机，后开仪器;有的需先开仪器，后开打印机。2、 调不出所编程序必须在相应程序模块下调出。如在临界值模块下编辑储存的程序必须要在临界值模块下调出。3、 肉眼结果与酶标仪测定结果差异较大3.1 滤光片设置不正确：请在“参数”中按滤光片轮中实际的情况设置滤光片。3.2 空白或阴性位置不正确。二、 仪器的检查测试1、 检测电源部分的输出电压电源部分输出电压可以通过检测MUSCU板上X11元件得到，每个点的正确对地电压应该

相关专题 试想一下，若没有各种方法来分离组成细胞的不同区室和组分，那么现代生物学将困难重重。从细胞信号通路 到新陈代谢，人们一直想知道，它们在哪儿，过去、现在及将来。 赛默飞世尔科技 的市场部经理Monica O’Hara Noonan介绍，研究人员对细胞进行分级分离(fractionate)的原因有很多。他们可能希望，当感兴趣的蛋白在某些条件下或某种处理之后转位时，对其进行追踪。对细胞进行分级分离能增强低丰度蛋白的检测能力，或降低下游分析或功能分析的复杂性。 如果您正在从事这一方面的研究，请继续往下读。从细胞 上讲，我们会帮助您将小麦和谷壳分开。 细胞的组分 如何对细胞进行分级分离取决于很多因素，包括哪些仪器 、知识可以利用，您想要分离什么，以及这些组分的下游应用是什么。 离心是细胞分级分离中最常用的技术之一，它们单独使用，或与其他方法结合。例如，对于高尔基体 或过氧化物酶体，大部分操作都要求高速的密度梯度离心。然而，O’Hara Noonan也指出，超速离心也有一些缺点，包括超速离心机是高价的仪器，有些实验室无

相关专题 一、原理 植物 组织中的可溶性糖可分为还原糖（主要是葡萄糖和果糖）和非还原糖（主要是蔗糖）两类。还原糖具有醛基和酮基，在碱性溶液中煮沸，能把斐林试剂中的Cu2+还原成Cu+，使蓝色的斐林试剂脱色，脱色的程度与溶液中含糖量成正比。 二、材料、仪器设备 及试剂 （一）材料：新鲜植物样品或烘干粉碎过的植物样品。 （二）仪器设备：1. 分光光度计 ；2. 分析天平（感量1／10000）；3. 水浴锅；4. 具塞刻度试管；5. 刻度吸管；6. 容量瓶；7. 研钵；8. 离心机。（三）试剂：1. 斐林试剂A液：40gCuSO4.5H2O溶解于蒸馏水定容至1L。 2. 斐林试剂B液：200g酒石酸钾钠（KNaC4H4O6.5H2O）与150g NaOH溶于蒸馏水中，并定容至1升。A、B两液分别贮存，使用前等体积混合。 3. 0.1％葡萄糖标准液：取80℃下烘至恒重的葡萄糖0.1000g，加蒸馏水溶解，定容至100ml。 4. 0.1NNaOH。 5. 甲基红指示剂：0.1g甲基红溶于250ml 60％乙醇中。 6. 10％Pb（Ac

放射免疫分析(RIA)是由美国生物学家Yalow和Berson于1959年创建的一种体外放射分析技术，该技术有其结果可靠。简便易行，成本低廉，高灵敏度，高特异性的优点。其超微量测定可达ng至pg水平，目前可测物质已达300余种，对临床的诊断和治疗起着积极而重要的作用。在实际工作实践中，标准曲线的制做非常重要。它可对整批实验结果产生重大影响。在放免分析测定中被测物质浓度是根据标准曲线计算得来的。标准曲线的精确度直接影响测定结果的精确度。而根据少数的几个离散点建立起来的标准曲线如何尽量精确地反应B/B0％与样品抗原浓度之间的真实函数关系，却要尽可能地从实验中把关，因此制定标准曲线的每一步骤都要严格和精确。现就放免分析中有关标准曲线制做的影响因素进行一番分析。供同仁们参考。一、试剂组份（一）标准品标准品的活性、免疫反应性以及纯度往往影响放射免疫分析的正确性，从而极大地影响结果。要求标准品活性与免疫反应性和被测物质相一致，须是同源系统的。且稳定性好，易保存，不含交叉反应物质和干扰免疫反应的物质，定量应准确并与国际标准品一致。所谓标准品纯度不是指化学纯，它可以含杂质，但不应含有对放射免疫分析有干

祝贺MIT张锋研究组所取得的重要发现，并感谢他们选用来自Sellckchem的高质量产品。 自2013年以来，CRISPR/Cas9成为目前最热的基因编辑系统。MIT的科学家对CRISPR/Cas9进行了改造。现在，科学家可以用这一技术在细胞中有效启动任何基因，更简便地研究不同基因的功能。这一成果发表在2014年12月10日的Nature杂志上。领导这项研究的张锋（麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGovern 脑研究所和Broad研究所核心成员，Feng Zhang，音译张锋）说，改造后的CRISPR技术，可以快速对整个基因组进行功能筛选，帮助人们鉴定涉及特定疾病的基因。张锋等人在该研究中就鉴定了让黑色素瘤细胞抵抗癌症药物的几个基因。基因编辑技术，是指对DNA核苷酸序列进行删除和插入等操作。基因编辑技术使得人们可以依靠自己的意愿改写遗传密码。长期以来，对DNA的编辑只能通过物理和化学诱变、同源重组等方式来实现。这些方法要么编辑位置随机，要么需要花费大量人力物力进行操作。因此，能够方便而精确的对DNA和核苷酸序列进行编辑，是科研工作者们长期以来的梦想。CRISPR-Cas9系统的诞

四氯甲烷（四氯化碳）：CCl4（一）理化性状和用途无色透明易挥发液体，有特殊气味。沸点：76.8℃，密度：1.59。用作制冷剂和喷气发动机燃料氟隆气的原料。还用作萃取剂、溶剂、干洗剂、脱漆剂、灭火剂熏蒸剂、杀虫剂以及氯化剂。（二）毒性本品为毒害品。有轻度的麻醉作用，对心脏、肝、肾有严重的损害。（三）短期暴露的影响人口服2—4ml即致死。由呼吸道吸入或经皮肤吸收也能中毒，是最危险的溶剂。（四）长期暴露的影响吸入过量蒸汽，最初刺激咽喉引起咳嗽、头痛、呕吐，尔后呈现麻醉状态，昏睡，有时在兴奋后失去知觉，最后肺出血而死亡。（五）火灾和爆炸本身是灭火剂，不会燃烧。但遇高温与明火产生剧毒的光气。在火场中操作必须戴好氧气防毒面具，以防中毒。（六）化学反应性在潮湿的空气中逐渐分解成光气和氯化氢。（七）人身防护吸入：蒸汽或烟雾浓度不明或存在可检测出的浓度时，应戴有黄色标志滤毒盒的防毒面具。皮肤：应使用手套、工作服、工作鞋。工作场所应有可用的安全淋浴和眼睛冲洗器具。眼睛：戴化学防溅眼镜或面罩。（八）急救吸入：使吸入蒸汽的患者脱离污染区，安置休息并保暖。如果呼吸停止，立即进行人工呼吸。眼睛：用水冲洗并就医诊

摘要：本文介绍了国内LIS发展的历程，分析了国内LIS存在的问题，介绍了国外LIS的发展现状。本文同时对国内外LIS特点作了比较，找到国内LIS存在的主要差距和产生差距的原因。文章重点对国外先进的LIS的主要优点作了剖析，为国内广大LIS开发者提供了引进时需要注重的意见。关键词：LIS 检验仪器 数据采集 1． 国内LIS发展的历程： 国内医院的大多数检验仪器都是进口的，从80年代后期，大多数检验仪器就都采用了计算机进行数据处理，但多数是单片机，输出对象主要是微型打印机，用微机来处理的很少。进入90年代，随着计算机价格下降和技术的发展，用微机处理数据的检验仪器逐渐多了起来，不用微机处理的，也为微机提供输出接口。但是这种接口通常为单向的，即只能够把检验结果输出到微机中，到了90年代中期，逐渐出现了可以支持双向通讯的大型检验仪器，即可以支持计算机对仪器的反向控制。 随着医院计算机管理的发展，一些医院开始考虑到建设LIS，但是开始多数只是把单个检验仪器联到微机中，或者几台仪器联在一起处理数据，并没有真正形成系统。国内最早的比较完整的LIS是辽宁抚顺中心医院在93年开发的，该系统在94

对于PCR实验来说，如何在得到理想的扩增产物的前提下尽可能加快反应进度、缩短反应时间是每个PCR实验人员关心的热点。下面我就这一问题谈谈自己的看法，以便抛砖引玉。 PCR实验所耗的时间大体上可分为三个方面：模板制备、PCR加样与上机反应、反应后的电泳检测和拍照。 一．模板制备 对于模板制备阶段，尽量缩短模板提取时间既有利于缩短整个PCR反应时间又可以尽可能的减少模板降解。对于纯度要求不高的模板来讲，可以尝试煮沸法提取；而对于纯度要求较高的模板来讲，可以购买核酸提取试剂盒来替代繁琐的手工提取法。对于比较容易裂解的细胞和组织的DNA（如血细胞），可以尝试直接拿来（或适当稀释后）作为PCR反应的模板，这样就可以省略模板制备阶段。 二．PCR加样与上机反应 PCR加样中尽可能将能混合的溶液都混匀在一起，分装后再往各反应管中加入其它溶液，这样既可以加快进度又提高了不同反应间的重复性。 在PCR仪中进行的PCR反应所耗时间＝变性、退火和延伸时间＋仪器从一个温度变到另一个温度所用的时间。 变性、退火阶段的时间可以通过多次实验摸索后适当降低，对于扩增一些长度很短的片段，甚至可以