人-鼠嵌合抗体 人-鼠嵌合抗体，即抗体的可变区来自小(大)鼠McAb，而恒定区则来自人的抗体。这样的抗体既保持了原来McAb的特异性和亲和力，又大大减少了在人体内的免疫原性。要生产这样的嵌合抗体，第一步也是关键的一步是要从杂交瘤细胞中获得McAb的特定可变区基因，然后再与人的抗体恒定区基因连接，最后将构建好的人-鼠嵌合抗体基因导入骨髓瘤细胞中表达。主要步骤包括制备目的基因、选择载体、将目的基因和载体重组，然后将嵌合抗体的DNA重组体导入受体细胞，筛选阳性细胞和表达产物的鉴定。 为了从杂交瘤细胞中获得目的基因VH和VL，以及人类Ig的C区基因，构建重组DNA，以往的构建方法是使用不同的限制性内切酶对基因组DNA进行酶切，采用Southern印迹法对酶解片段进行分析，从而获得目的基因，在体外连接，插入到合适的载体中进行表达。近年来随着分子生物学技术的发展，PCR技术已被广泛地应用于克隆Ig的VH和VL基因，根据小鼠及人Ig重链和轻链V区基因5’及3’端相对保守的特点，可以设计相应的引物，通过逆转录PCR来扩增重链及轻链的相应区。引物的设计不一定要与基因序列完全匹配，但必须

一、凝胶过滤层析法凝胶过滤层析又称分子筛过滤、排阻层析等。它的突出优点是层析所用的凝胶属于惰性载体，不带电荷，吸附力弱，操作条件比较温和，可在相当广的温度范围下进行，不需要有机溶剂，并且对分离成分理化性质的保持有独到之处。对于高分子物质有很好的分离效果。⒈凝胶的选择根据实验目的不同选择不同型号的凝胶。如果实验目的是将样品中的大分子物质和小分子物质分开，由于它们在分配系数上有显著差异，这种分离又称组别分离，一般可选用 Sephadex G-25 和 G-50，对于小肽和低分子量的物质（1000-5000）的脱盐可使用 Sephadex G-10，G-15 及 Bio-Gel-p-2 或 4 。如果实验目的是将样品中一些分子量比较近似的物质进行分离，这种分离又叫分级分离。一般选用排阻限度略大于样品中最高分子量物质的凝胶，层析过程中这些物质都能不同程度地深入到凝胶内部，由于 Kd 不同，最后得到分离。⒉柱的直径与长度根据经验，组别分离时，大多采用 2-30 cm 长的层析柱，分级分离时，一般需要 100 cm 左右长的层析柱，其直径在 1-5 cm 范围内，小于 1 cm 产生管壁效应，大于

1. 免疫动物：两只新西兰兔2. 佐剂：首先用完全弗氏佐剂（CFA），后用不完全弗氏佐剂（IFA）。3. 免疫原：蛋白或KLH偶联的多肽。每次免疫100-200μg免疫原。4. 免疫：用生理盐水稀释免疫原，然后与相应的佐剂进行1:1混合。抗原和佐剂完全混合形成稳定的乳剂，将该乳剂在兔子双肩周围的皮肤下进行皮下注射和后大腿进行肌肉注射。每个区域大约用1/4的免疫原。这样免疫原可以持久存在从而提高免疫应答。5. 取血：用19号针头对兔子进行耳动脉取血，室温过夜析出血清。6. 时间：第1星期 采血2ml（获得0.5-1ml免疫前血清）完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔。第2星期完全弗氏佐剂（CFA）混合的200μg抗原免疫兔。第4星期不完全弗氏佐剂（IFA）混合的100μg抗原免疫兔。第5星期取检测血清20-30ml取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测，溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔。第6星期如果检测阳性第一次采血20-30ml,溶解在生理盐水中的100μg抗原免疫兔；如果上次检测是阴性，取适当的细胞或组织进行ELISA和WB检测。第7星期第二次采血20-30ml

相关专题 1、原理与应用 结核分枝杆菌对苯胺染料一般不易着色，若加温或延长染色时间使其着色后，再用3%盐酸酒精处理也不易脱色，经此染色后，结核分枝杆菌及其他分枝杆菌呈红色，而非抗酸菌和细胞杂质等呈蓝色。 2、材料 (1)结核病人痰 (2)抗酸染色液 (3)玻片、片夹、滤纸片、竹签、空平皿、污物盆。 3、方法 (1)取洁净的竹签沾取痰中血丝或脓性痰，在清洁无油脂玻片上涂开。涂抹区约拇指盖大。用过的竹签放到空平皿内待高压灭菌。 (2)涂片自然干燥后，用片夹挟住玻片一端，通过火焰固定。 (3)涂抹面用滤纸片盖上，然后往滤纸片上滴加石炭酸复红染液，使滤纸片完全被染液浸湿，持玻片在小火上加温片刻然后离开火焰，此时可见到玻片上冒出蒸气。待蒸气消失后再加温，如此反复3～4次，约5min，加温时随时添加染液勿使纸片干涸。 (4)玻片冷却后，用接种环挑去滤纸扔到污物盆内，流水冲洗玻片。 (5)滴加3%盐酸酒精脱色，至涂抹均匀部位基本没有红色再脱下为止，水洗。 (6)滴加吕氏美蓝染

一、磁性微球在核酸纯化上的应用 核酸是现代生物学、医学研究中的重要课题。核酸作为遗传信息的携带者，是基因表达的物质基础，除了在生物体正常的生长、发育、和繁殖等生命活动中具有十分重要的作用外，它与生命的异常情况，如肿瘤发生、放射损伤、遗传疾病等也有密切关系。因此核酸是现代生物学、医学研究中的重要课题。无论是进行核酸结构与功能的研究，还是进行基因工程、蛋白质工程，首先需要对核酸进行分离纯化。超顺磁性磁性微球是细胞分离、鉴定，基因分析，细菌和病毒的病原体诊断，核酸分离分析，蛋白质纯化的一个有效手段。通过寡聚核苷酸[Oligo（dT）]序列或链霉亲和素等将DNA和RNA连接磁性微球表面已开发了许多应用。1、DNA/RNA结合蛋白分离在基因表达中，蛋白质也是一个重要角色，然而与DNA/RNA特异性结合得蛋白质通常寿命都很短，且含量少，链霉亲和素修饰的磁珠可用来提取分离DNP/RNP。结合有生物素的DNA或RNA序列与链霉亲和素修饰的磁珠相互作用，蛋白质识别了这些序列，就可在几分钟内结合到固定化DNA/RNA上，这种方法已被用来分离转录因子，限制性内切酶，复制蛋白等。2、mRNA分离在研究基因表达

酶联免疫斑点（ELISPOT）技术是当今世界上检测生物体细胞免疫水平的最佳技术。它集高灵敏度、高可信度、高通量、单细胞水平、功能性检测与低成本等诸多优点于一身，在国内外免疫学界获得了广泛的应用，成为主流免疫学检测技术之一。我们来一一详述这些优点。一、灵敏度高理论上，ELISPOT高达百万分之一，也就是说哪怕一百万个阴性细胞中只有一个阳性细胞，ELISPOT能把这个阳性细胞检测出来。说来也没什么神奇之处，只要细胞状态好，阴性细胞就不会产生斑点。而有一个阳性细胞，就会产生一个斑点，反过来，一个斑点就证明了一个阳性细胞的存在，样哪怕这个阳性细胞混杂在一百万个阴性细胞中，ELISPOT能把这个阳性细胞检测出来。实践中，由于一个ELISPOT孔容纳不了100万细胞，最多只能放万细胞。再者，50-60万阴性细胞出一两个自发斑点也算正常，所以实验组的孔要想有显著的统计学意义，需要出4-5个斑点。这也就是说，只要阳性细胞频率大于4个/60万细胞，就可以被ELISPOT检测出来。这算出来的实际灵敏度为十五万分之一。这样的灵敏度在一般客户的实验室都能达到，如果实验再精细一些，细胞处理得再好一些，灵敏度还可

IMVIC与硫化氢试验 　　一、目的要求 　　了解IMVIC与硫化氢反应的原理及其在肠道菌鉴定中的意义。 　　二、基本原理 　　IMVIC是吲哚试验（indol test）、甲基红试验（methylred test）、伏-普试验（Voges-Prokauer test，V．P．试验） 和柠檬酸盐试验（citrate test）的缩写。这四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠杆菌（Enterobacter aerogenes），而且主要是用于水的细菌学检查，因为大肠杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定数量则表示受粪便污染，而产气肠杆菌则广泛存在于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。 　　硫化氢试验也是检查肠道杆菌的生化试验。 　　吲哚试验。有些细菌含有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，就会形成红色的玫瑰吲哚。 　　色氨酸水解反应： 　　吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应： 　　吲哚 对二甲基氨基苯甲醛 　　大肠杆菌吲哚反

1、取0.1~0.2 g左右小麦叶片于1.5 ml的Eppendorf离心管中，将离心管直接放入盛液氮的冰壶中冷冻。从冰壶中取出离心管，用小玻璃研棒直接插入离心管中迅速研磨，至淡黄色粉末为宜；2、向离心管中加入600 ml的DNA提取缓冲液S，振荡充分混匀，65 ℃水浴30 min，其间温和混匀几次；提取缓冲液“S”配制：100 mmol/LTris-HCl pH8.0100 mmol/LNaCl50 mmol/LEDTA pH8.02% SDS3、加入等体积的酚-氯仿（V/V=1：1）温和混匀，8000 rpm，4 ℃离心10 min；4、取出离心管，吸上清液移入另一干净离心管中，加入等体积的氯仿混匀后8000 rpm，4 ℃离心10 min；5、取上清，加入2/3体积预冷的异丙醇，温和混匀，静置5~10 min，勾出絮状的DNA沉淀，用70%的乙醇洗2~3次，无水乙醇洗1次，然后置于通风厨中自然风干或冷冻抽干机抽干；6、根据DNA量的多少，加入20~100 靗 ddH2O或TE充分溶解；7、增加体积至600 ml，加入1.8 ml RNaseA（10 µg/μl），37

【基本原理】 碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶染色法(APAAP法)，是一种免疫组化技术。用兔抗鼠IgG起搭桥作用，其中一个Fab段连接McAb ，另一个Fab段连接APAAP复合物，再通过复合物中的碱性磷酸酶催化底物显色来判断抗原分子的存在。该方法由于使用免疫桥联技术，故其敏感性高，结果易于判断，同时又减少了内源性酶的影响，特异性强。目前已广泛用于淋巴细胞分化抗原、活化抗原、MHC-I、II类抗原表达的检测等。 【试剂及材料】 ① APAAP试剂盒 ② TBS缓冲液(pH7.6 0.05mol/L Tris-HCl)： Tris 30.25g，NaCl 40.0g，HCl 11ml，加蒸馏水溶解至500ml，调pH值至7.4～7.6。抗体稀释用含1％牛血清白蛋白的TBS。 ③ Mayer苏木精复染液：苏木精0.1g，钾明矾5g，柠檬酸0.1g，水合氯醛5g，碘酸钠0.02g，蒸馏水100ml。将苏木精、钾明矾和碘酸钠溶于蒸馏水，再加温搅拌溶解，加柠檬酸和水合氯醛，混合后煮沸5min，冷却后过滤备用。 ④ 纯丙酮 ⑤ McAb 【操作

【 实验目的 】 掌握定磷法测定核酸含量的原理和方法 【 实验原理 】 核酸分子结构中含有一定比例的磷(RNA含磷量约为8.5%~9.0%，DNA含磷量约为9.2%)，测定其含磷量即可求出核酸的量。 核酸分子中的有机磷经强酸消化后形成无机磷，在酸性条件下,无机磷与钼酸铵结合形成黄色磷钼酸铵沉淀，其反应为： 在还原剂存在的情况下,黄色物质变成蓝黑色,称为钼蓝。在一定浓度范围内，蓝色的深浅与磷含量成正比，可用比色法测定。若样品中尚含有无机磷，需作对照测定，消除无机磷的影响，以提高准确性。 【 实验材料 】 1.实验器材 恒温水浴,721分光光度计 2.实验 试剂 （1）标准磷溶液：将磷酸二氢钾于110℃烘至恒重，准确称取0.8775g溶于少量蒸馏水中，转移至500ml容量瓶中，加入5ml 5mol／L硫酸溶液及氯

醋酸纤维素是提纤维素的羟基乙酰化形成的纤维素醋酸酯。由该物质制成的薄膜称为醋酸纤维素薄膜。 种薄膜对蛋白质样品吸附性小，几乎能完全消除纸电泳中出现的“拖尾”现象，又因为膜的亲水性比较小，它所容纳的缓冲液也少，电泳时电流的大部分由样品传导，所以分离速度快，电泳时间短，样品用量少，5 μg 的蛋白质可得到满意的分离效果。因此特别适合于病理情况下微量异常蛋白的检测。 醋酸纤维素薄膜与滤纸相比较，有以下优点： （1）分离效果好。对蛋白质样品吸附极少，无“拖尾”现象，染色后背景能完全脱色，各种蛋白质染色带分离清晰，因而提高了定量测定的精确性。 （2）快速省时。由于亲水性较滤纸小，电渗作用小，电泳时大部分电流是由样品传导的，所以分离速度快，电泳时间短，一般电泳45~60分钟即可，加上染色、脱色，整个电泳完成仅需90分钟左右。 （3）灵敏度高，样品用量少，血清蛋白电泳仅需2 μl 血清，故常用于检测在病理情况下微量异常蛋白质的改变。 （4）应用面广。某些蛋白质在纸上电泳不易分离，如胎儿甲种球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等用醋酸纤维素薄膜电泳能较好地分离。 （5）易保存，易定量。醋酸纤

一、筛选之前确定G418浓度：1. 由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1 g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722 g。2. G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对真核细胞无作用而G418对细菌和真核细胞都起作用。neo就是编码3'磷酸转移酶的基因，它表达的蛋白能够分解新霉素和G418。在进行转染时细胞膜受到影响，抗生素可能对细胞产生较大影响，加上G418有杀菌作用，所以有人主张转转染时不加其它抗生素。3. 汇合度对G418筛选结果的影响很大，一般筛选时汇合度不宜超过50%。4. G418的活性不尽相同，所以在筛选之前，一定要确定G418的最佳筛选浓度。具体如下：将细胞稀释到1000个细胞/ml，在100 ug/ml~1 mg/ml的G418浓度范围内进行筛选，选择出在10~14天内使细胞全部死亡的最低G418浓度来进行下一步的筛选试验。一个具体试验：undefined106个细胞电转后，分别接种1/4000，1/1000，1/300细胞到24孔板中，48 h后加药筛选，此时1/300细

1.相似性序列发生Cross－react引起脱靶效应。2.监测手段：对脱靶效应的监测一般通过基因芯片来监测。Gene expression profiling对脱靶效应。3.脱靶效应的特性：转录物表达模式有序列特异性和靶特异性两种。4.大部分脱靶效应具有siRNA序列特异性。低浓度也可能产生脱靶效应，不仅仅是高浓度能产生脱靶效应的假象。脱靶效应在蛋白和mRNA水平同时考虑进行分析，要缜密分析和确定分析的时间点。特别是要确定脱靶效应是否是蛋白被knock－down的次级效应，因此要分时序性进行分析。对靶蛋白和目的转录本进行半衰期分析或者获取相关的资料。在蛋白效应以前通过表达图谱分析已经确认非次级效应影响。看降解靶转录本和靶蛋白效应时间分水岭可以判定是否为次级基因表达改变所影响的。从脱靶效应来看，正义和反义链都有可能引起脱靶效应，主要看是哪条链产生干扰作用。脱靶效益可能是独立于基因沉默效应的，可能是序列依赖性的。11-15核苷酸序列相似性的序列都可能产生脱靶效应。正义链的3’和反义链的5’端对基因沉默的贡献相对较大。我们叫其core 序列。5.避免off-target效应来说都是相对的，也

致病性胞外细菌主要有革兰阳性的葡萄球菌、链球菌、志贺菌、霍乱弧菌、致病性大肠杆菌和革兰阴性的脑膜炎球菌和淋球菌、白喉杆菌、破伤风梭菌等。胞外菌致病机制主要通过分泌外毒素和细菌死亡时释放的胞壁内毒素致病。细菌代谢中分泌至菌体外的毒性蛋白为外毒素，其毒性极强，可致死。白喉毒素抑制宿主细胞蛋白质合成；破伤风梭菌外毒素可阻断神经元间正常抑制性神经冲动传递；霍乱弧菌肠毒素可激活肠黏膜腺苷环化酶，增高细胞内cAMP水平导致肠道功能紊乱。革兰阴性菌胞壁中的LPS是内毒素，其主要毒性组分是脂质A，导致发热、激活补体、激肽和凝血系统导致休克、DIC等。外毒素的免疫原性强，可诱导中和抗体产生；而内毒素免疫原性较弱。 1．抗胞外细菌固有免疫 数量少、毒力低的胞外菌，可很快被中性粒细胞、单核细胞和组织巨噬细胞吞噬杀灭。在无抗体存在时，革兰阳性菌的胞壁肽聚糖或革兰阴性菌的LPS均可通过替代途径激活补体，降解细菌；能表达甘露糖受体的细菌还能同血清中的MBP结合，通过MBL途径激活补体杀菌。激活过程产生的C3b能调理增强吞噬杀菌效应，C5a、C3a等参与炎症反应中对免疫细胞的招募和活化。LPS能刺激Mrp、

荧光能量共振转移 （FRET）检测活体中生物大分子纳米级距离和纳米级距离变化的有力工具，广泛应用于生物大分子相互作用分析、细胞生理研究、免疫分析等。原理当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠，并且两个分子的距离在 10nm 范围以内时，就会发生一种非放射性的能量转移，即 FRET 现象，使得供体的荧光强度比它单独存在时要低的多（荧光猝灭），而受体发射的荧光却大大增强（敏化荧光）。应用1、生物大分子结构和功能研究：细胞膜受体之间相互作用、细胞内分子之间相互作用、膜蛋白的定位修饰、检测酶活性变化等2、核酸杂交分析3、免疫分析：不仅适用于小分子 （如半抗原），而且适用于大分子 （如蛋白质）。特点1、实验背影低，但抗原、抗体纯度要求较高；2、简便的均相检测（不需要洗板），操作简单；3、实验产物比较稳定，可用于固相分析或利用特殊的荧光显微镜进行单细胞分析，但需要特殊的辅助设备；4、应用灵活多样检测组合丰富，需要融合蛋白的表达5、可用于复杂环境下的分析，研究活细胞生理条件下研究蛋白质-蛋白质间相互作用。6、有效的作为 1.0～10.0nm 距离范围。Duolink PLA 技术蛋白质

T7Select™ 噬菌体展示系统是Novagen开发的基于T7噬菌体(而非传统的M13)创新的基因发现研究产品。目的序列(C-端)与T7基因10 衣壳蛋白而表达得到的多肽和蛋白即可暴露(展示)与病毒(T7噬菌体)的表面。复制周期短，细胞质蛋白组装，操作和储存方便，超高克隆效率，以及T7噬菌体强大的天然特性使Novagen的T7Select成为替代传统M13系统的更好选择，用于高效文库构建和亲和淘洗。由于T7噬菌体展示系统能构建和筛查更大的文库，能使研究者更有可能发现“沧海一粟”的目标分子。该系统以多种产品形式提供，包括T7Select噬菌体克隆试剂盒，包含OrientExpress™ cDNA合成的试剂盒以及T7Select噬菌体克隆系统。另有12种预制人正常组织和病理组织来源的cDNA文库提供，这些文库都是用T7Select10-3载体构建的。T7噬菌体展示系统与M13系统有什么区别？ M13和T7噬菌体最大的区别就在于成熟病毒从宿主细胞中释放的方式不同。M13噬菌体在周质中组装，必须经细胞膜分泌；而T7在细胞质中完成组装后直接从细胞裂解出来。因此，任何抑制分泌过程的蛋白和多肽都不

英文的标点符号中有几个长短不同的横线，包括连接符(hyphen，- ) ，短划线(en-dash，– ) ，长划线(em-dash，— ) 和减号(minus sign，- )，中国作者很容易把它们混淆，我们把它们放在一起更容易看出差别来（- – — - ），这里我们来介绍一下它们的主要用法： 1.连接符： 这是几种横线中最常用的一种，通常用在下面几种情况： 1)用来连接复合单词的几个部分，比如 X-ray， Editor-in-Chief，meta-analysis；或者连接单词和前缀，比如anti-inflammatory， non-coding。 这种用法非常常见，使用起来却没有一定之规。有的单词不同的作者会选择不同的格式，比如说 Editor in Chief， noncoding 也是常见的写法，而有的单词以一种写法为主，比如 X-ray， meta-analysis， anti-inflammatory。有些单词在语言演变的过程中可能从一种写法为主转变成另一种写法为主，比如 up-regulate，down-regulate，现在普遍的写法是 upregulate

摘要：本文介绍了在对有关物质检查所用的分析方法进行方法学验证时，各项指标的可接受标准，以利于判断该分析方法的可行性。关键词：有关物质检查 分析方法验证 可接收标准 　　药品中的有关物质泛指在药品的生产与储存过程中产生的工艺杂质或降解产物。由于这些有关物质的存在会影响到药品的纯度，进而可能会产生毒副作用，所以有关物质的控制是药品研发的一个重要方面，也是我们在药品审评中一直重点关注的要点之一。而要对有关物质进行严格的控制，就离不开专属性强、灵敏度高的分析方法，这就涉及到分析方法的筛选与验证。从现有的申报资料看，药品研发单位已基本上意识到分析方法验证的重要性，但是对验证时各具体指标是否可行尚没有一个明确的可接受标准，从而难以对验证结果进行评判。为解决这一问题，本文结合国外一些大型药品研发企业在此方面的要求，提出了在对有关物质检查方法进行验证时的可接受标准，供国内的药品研发单位在进行研究时参考。1．准确度该指标主要是通过回收率来反映。验证时一般要求根据有关物质的定量限与质量标准中该杂质的限度分别配

一. 实验目的及背景 高等动物，高等植物的基因组相当庞大， 如人类细胞基因组由30亿个碱基对组成，果蝇基因组有1.4×108个碱基对，水稻基因组有1.4×109个碱基对。真核细胞基因组中，约1万－1.5万个可表达的结构基因，其它大量存在的是调控序列和内含子序列。可以说某特定物种的基因组，包含了该物种生长，发育，繁殖等各项生理活动的几乎全部信息量，因而对真核细胞基因组的结构，组成，以及表达调控的研究是至关重要的，而研究的起点就是要获得纯度高－－不含蛋白质、糖类、酚、氯仿等污染；得率好－－以便有足够量用于分析；基因组相对完整－－断裂的基因组以便用于以后PCR分析，RFLP分析，基因文库的构建，基因探测等的研究。 真核细胞基因组在提取过程中一般有以下几步，首先是机械法破细胞抽提；然后去除蛋白质，糖类等细胞内杂质污染；最后纯化出DNA，由于真核细胞基因组较大，在操作中应注意动作轻柔，且在低温下进行，以最大限度地减少机械和化学作用对DNA的剪切，从而获得相对完整的DNA。二．实验试剂及材料 材料：幼嫩的植物材料0.5g左右。 试剂：液氮 CTA

多色微球液相芯片是一个多功能的液相分析平台，其有机整合了有色微球、激光技术、应用流体学、快速信号处理和数据分析系统，故特异度和灵敏度较高。目前，该技术已广泛应用于免疫分析、核酸研究、酶学分析及受体与配体的识别分析等领域中。一、原理及优势1、原理多色微球液相芯片技术的分析基础是由微小的聚苯乙烯粒子组成的微球。这种微球结合了两种不同颜色的荧光染料(红色和橙色)，当微球被635nm的激光照射后，能发射658nm和712nm的荧光。比较二者发射光的比率，最多能够区分100种不同的荧光微球。运用精密的流式细胞技术、数字信号处理器和先进的激光技术，根据事先确定的荧光发射比率，该仪器能鉴定出每一种不同颜色的微球。在分析检测过程中，多色微球可通过羧基或者其他基团与不同的分析物质(抗原、抗体、寡核苷酸探针等)结合．加入检测样本充分混合，再和能与报告分子结合的第三种荧光染料(绿色荧光染料)相互作用。微球被两柬激光照射，第一束激光激发微球本身的荧光，用于鉴别微球的种类；第二柬激光激发与被测物质结合的第三种荧光染料(绿色荧光染料)，通过检测荧光的强度进而对被测物质进行定量分析[1]。该技术是一种多重数据获取和