带电颗粒在电场作用下向着与其电性相反的电极移动的现象称为电泳。如带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。电泳技术是生物化学与分子生物学中的重要研究方法之一，利用电泳技术可分离许多生物物质，包括氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷、核苷酸及核酸等，并可用于分析物质的纯度和分子量的测定等。电泳的基本原理 许多生物分子都带有电荷，在电场作用下可发生移动。由于混合物中各组分所带电荷性质、数量以及分子量各不相同，使在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速度也各有差异，所以在一定时间内，它们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。泳动度 设一带电粒子在电场中所受的力为F，F的大小决定于粒子所带电荷Q和电场强度 E，即 ：F = E•Q根据Stoke氏定律，一球形分子在非真空条件下（例如在溶液中）运动时所受的阻力（F′）与分子移动的速度（v），分子半径（r）、介质的粘度（η）有关，即：F′ = 6πrηv当F=F′时，即达到动态平衡时：E•Q = 6πrηv移项得 v/E = Q/ 6πrη （1）v/E 表示单位电场强度时粒子运动速度，称为迁移率(mobility)，也称电泳速度，以μ表示，

酶切扩增多态性序列（C1eaved Amplified Polymorphic Sequences，CAPS）是一类以PCR为基础的共显性的分子标记，它的基本原理是先用已知位点的DNA 序列去设计一套特异性的PCR引物（19~27 bp）。然后应用这些去扩增该位点上的某一DNA 片段；接着用一种专一性的限制性内切酶切割所得的扩增带并进行RFLP分析。1993年Konieczny和Ausubel首先在拟南芥两种不同的生态型Columbia和Landsberg之间发展出了18套这样的CAPS标记。根据TAIR（The Arabidopsis Information Resource）最新公布的信息。在拟南芥中又有53套新的CAPS标记被鉴定出来。CAPS标记揭示的是特异PCR片段的限制性长度变异的信息，特异引物序列来自基因数据库、克隆 或cDNA 克隆 以及的RAPD条带。CAPS标记是特异引物PCR与限制性酶切相结合而产生的一种DNA 标记，它实际上是一些特异引物PCR标记（如SCAR和STS）的一种延伸。当SCAR或STS的特异扩增产物的电泳谱带不表现多态性时，一种补救办法就是用限制性

Map viewer是NCBI 网站上提供的一个非常有用的寻找基因的工具，通过Map viewer你可以了解你感兴趣基因在基因组中所处的位置、基因序列、内含子及外显子的排列、基因的细胞遗传学图、EST.SNP等等许多有用的信息。进入Map viewer的方法如下：点击NCBI首页的Map viewer 进入Map viewer的首页，在Search下拉框内选择你寻找基因的生物种 类【eg：Homo sapiens(human)】在后面输入你基因的名称(eg：hcn4)或者是关键词【hypertension】单击go 。如果下图显示不清，可单击图形放大观看。 出现下图，图中用红色断棒给出标记的地方即为hcn4基因所处的位置，在找到hcn4基因的染色体 下给出一红色数字1。图形显示不清可单击图形放大。 出现下图，图中用红色断棒给出标记的地方即为hcn4基因所处的位置，在找到hcn4基因的染色体 下给出一红色数字1。图形显示不清可单击图形放大。 单击标记染色体 下面的蓝色数字出现下图，图中给出hcn4基因及其周边基因的信息，hcn

一、原理福林（Folin）－酚试剂法结合了双缩脲试剂和酚试剂与蛋白质的反应，其中包括两步反应：第一步是在碱性条件下，与铜试剂作用生成蛋白质－铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸、磷钨酸试剂还原，生成磷钼蓝和磷钨蓝的深蓝色混合物，颜色深浅与蛋白含量成正相关。在650nm比色测定的灵敏度比双缩脲法高100倍。由于肽键显色效果增强，从而减少了因蛋白质种类引起的偏差。该法适于微量蛋白的测定（范围为5～100μg蛋白质）。二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：各种植物材料（二）仪器设备：1. 722分光光度计；2. 离心机；3. 恒温水浴；4. 定量加样器；5. 冷凝回流装置一套；6. 研钵；7. 离心管；8. 刻度移液管；9. 微量滴定管；10. 试管等；（三）试剂： 标准蛋白质溶液：称取25mg牛血清蛋白，溶于100ml蒸馏水中，使终浓度为250μg／ml；试剂甲；试剂乙。三、实验步骤 （一）标准曲线的绘制1. 取18×200mm试管7支，1～7编号，分别加入0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml标准蛋白质溶液，用蒸馏水补足1ml，使每管含蛋白量分别为0、25、50、100、1

氮素代谢在植物的新陈代谢中占主导地位。植物组织中有机氮化物的含量随着植物的生理状况及环境条件的不同而发生变化。所以测定其含量，对研究植物的氮素吸收、运输和代谢规律，以及确定农产品的品质、营养价值等具有一定意义。一、原理植物组织中的有机氮化物包括蛋白氮和非蛋白氮。非蛋白氮主要是氨基酸和酰胺，以及少量无机氮化物，是可溶于三氯乙酸溶液的小分子。可加入三氯乙酸，使其最终浓度为5％，将蛋白质沉淀出来，分别测定总氮、蛋白氮或非蛋白氮；通常只测定总氮或蛋白氮。将植物材料与浓硫酸共热，硫酸分解为二氧化硫、水和原子态氧，并将有机物氧化分解成二氧化碳和水；而其中的氮转变成氨，并进一步生成硫酸铵。为了加速有机物质的分解，在消化时通常加入多种催化剂，如硫酸铜、硫酸钾和硒粉等。消化完成后，加入过量NaOH，将NH4+转变成NH3，通过蒸馏把NH3导入过量的硼酸溶液中，再用标准盐酸滴定，直到硼酸溶液恢复原来的氢离子浓度。滴定消耗的标准盐酸摩尔数即为NH3的摩尔数，通过计算，可得出含氮量。蛋白质是一类复杂的含氮化合物，每种蛋白质都有其恒定的含氮量，（约在14％～18％，平均约含氮16％）所以，可用蛋白氮的量乘以6.

随着DNA合成技术的发展，特别是自动化合成技术的引入，人们能简便、快速、高效地合成其感兴趣的DNA片段。目前，DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。1. DNA合成在基因工程和分子生物学研究中的应用1.1合成基因　　目前有许多基因和蛋白质的核苷酸和氨基酸序列已得到阐明，人们已经可以根据需要合成出具有实际应用和研究价值的多肽和蛋白质基因。已报道的合成基因有人生长激素、干扰素、胰岛素、表皮生长因子、白细胞介素II、集落刺激因子等，这些基因均已被克隆，绝大多数已在原核和真核系统中获得表达。我国上海生物化学研究所等单位于1984年首次在世界上合成了具有生物学活性的酵母丙氨酸转移核糖核酸，为人类文明作出了应用的贡献。　　目前，合成基因的方式有2种。①全基因合成：一般对于分子较小而又不易得到的基因采用该方式。可将双链基因分成若干寡核苷酸单链片段(尤其待合成基在在100个核苷酸以上时)，每个片段长度控制在40-60个碱基，并使每对相邻互补的片段之间有6个碱基交叉重叠。在体外将除基因两端末端外的所有片段磷酸化。混合退火

细胞内抗原的检测过程与细胞表面抗原检测过程基本一致，只是在与一抗孵育前，需要预先对细胞用非离子去污剂进行透化处理。 操作方法 1. 取已固定好的细胞爬片或甩片或经过预处理的组织切片（石蜡或冰冻切片）； 2. 用含0.2%TritonX-100或NP-40的PBS溶液透化固定后的细胞2min（室温），有些标本可能需要长达15min，时间视抗原而定； 3. 余下步骤接上述“细胞表面抗原的检测-间接免疫荧光法”步骤（2）； 注意事项 1. 在使用前，一抗二抗均应测试其合适的稀释度。 2. 多聚甲醛的固定是不稳定的，标本经多聚甲醛固定后，应再用去污剂处理，如果标本在水溶液中浸泡的时间过长，则会使交联结构解体。因此，应避免固定后的标本在水溶液中浸泡的时间过长。 3. 信号微弱的解决方法： ① 提高一抗和二抗的浓度以增强敏感性 ，这必须测试各种浓度抗体的滴度； ② 延长一抗和二抗的孵育时间。由于细胞染色时抗原吸附在固相载体上，抗原抗体结合时间较在溶液中长。孵育时间可因实验设计作适当调整，但少于20min抗体和抗原几乎不能有效结合。在以上两点中，应摸索出一个最佳条件以产生有效

病例对照研究 　　提要病例对照研究的概念和结构模式；设计特点：病例和对照的选择，样本大小的估计；研究因素测量和资料收集；病例对照研究资料分析（成组资料分析、1:1配比资料分析）；病例对照研究中的偏倚及其控制。 　　案例1973年底至1974年初，湖北省农村发生较多的瘫痪病例，患者多为儿童与青少年。病情多为突然发生，临床上表现为偏瘫、失语、但神志尚清楚。从临床、放射学及病理解剖学等方面的研究，认为是一各脑动脉炎。1973的湖北省雨量较多，一些地区爆发流行急性钩端螺旋体病。脑动脉炎病例的地区分布与钩端螺旋体病流行地区分布相符。据文献报道，钩端螺旋体感染可引起中枢神经系统并发症。因而原武汉医学院流行病这教研室与附属第二医院神经科提出该地区脑动脉炎疾病与钩端螺旋体感染有关。查明这两者关系，对防治脑动脉炎不仅有理论意义，亦具有重要的实际意义。 试问如何追查引起脑动脉炎的病因呢？ 第一节　概念及结构模式 　　一、病例对照研究的概念 　　病例对照研究（case-control study）亦称回顾性研究（retrospective study）。它

目的要求 1．掌握薄层板的制备及薄层层析的操作方法 2．掌握吸附剂活度测定的原理及方法 3．应用薄层层析法检测识中草药化学成分 薄层板的制备 1．不加粘合剂的薄层涂布法 （1）氧化铝薄层 将吸附剂置于薄层涂布器中，调节涂布器的高度，向前推动，即得均匀薄层。本实验主要用下述简易操作涂布薄层，取表面光滑，直径统一的玻璃一支，依据所制备薄层的宽度、厚度要求，在玻璃棒两端套上厚度为0.3~1mm的塑料圈或金属环，并在玻璃棒一端一定距离处套上较厚的塑料圈或金属环，以使玻璃棒向前推动时能保持平行方向，操作时，将氧化铝粉均均地铺在玻璃板上，匀速向前推动。 （2）纤维素薄层 一般取纤维素粉1份加水约5份，在烧杯中混合均匀后，倒在玻璃板上，轻轻振动，使涂布均匀，水平放置，待水分蒸发至近干，于100±2℃干燥30~60分钟即得。 （3）聚酰胺薄层 取锦纶丝（无色干净废丝即可）用乙醇加热浸泡2~3次，除去腊质等。称取洗净的锦纶丝1克，加85%甲酸ml，在水浴上加热使溶，再加70%乙醇6ml。继续加热使完全溶解成透明胶状溶液。将此溶液适量倒在水平放置的，用清洁液洗净的玻璃片上，并

1 按下稳压电源工作电源开关键至“ON”状态。依次接通P680型输液泵、ASI-100自动进样器、柱温箱、检测器、电脑。2 更换蠕动泵清洗瓶中5%的甲醇(如果仪器经常使用则建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。)3 确认洗针瓶中的洗液是否太少，若太少，则需补充或更换。洗液一般为：50%的甲醇。4 排泵内气泡4.1 拧松泵右侧的快速清洗阀（反时针两圈左右）。按下泵前面板右下方的“Purge”键，排泵内气泡，仪器将以6.0ml/min的速度自动快速清洗泵内残留的气泡，5分钟将自动停止。若想手动停止，则再按“Purge”键，将停止清洗。4.2 将每个需要使用的通道分别排完气泡后，拧紧快速清洗阀（顺时针拧紧，注意不要拧得过紧）。5 系统联机5.1 检查确认密码钥匙已与计算机联结，鼠标左键双击桌面下方工具栏的“Chromeleon”图标，打开 [Chromeleon Server Monitor]，点击[Start]，待变色龙图标变成灰色，并显示“Chromeleon Server is running idle”时，关闭[Server Monitor]。5.2 鼠标左键双击桌

长度多态性是个体遗传特征在群体中的反映，对个体遗传标记的表型或基因型分型的技术方法分为限制性片段长度多态性（Restriction Fragment Length polymorphism，RFLP）和扩增片段长度多态性（Amplification Fragment Length Polymorphism，Amp-FLP）。1.限制片段长度多态性限制片段长度多态性（Restriction Fragment Length Polymorphisms）是指DNA限制性酶识别序列核苷酸结构发生改变，导致酶切位点产生、消失或移位，酶切所产生的限制性片断数目及长度发生改变所生呈现的DNA多态现象。上世纪70年代，Wyman和White首先报道人类14号染色体上限制性片段长度多态性RFLP，由于DNA序列的改变甚至一个核苷酸的变化，引起某个限制性内切酶切点的丢失或产生移位，导致酶切片段长度的变化而产生多态性。不同个体酶切片段长度在0.5-20kb之间。RFLP标记具有很多优点：无表型效应，其检测不受环境和发育阶段的影响；RFLP标记在等位基因之间是共显性的，在配制杂交组合时不受杂交方式的影响；在非

核酸分子杂交技术 由于核酸分子杂交的高度特异性及检测方法的灵敏性，它已成为分子生物学中最常用的基本技术，被广泛应用于基因克隆的筛选，酶切图谱的制作，基因序列的定量和定性分析及基因突变的检测等。其基本原理是具有一定同源性的原条核酸单链在一定的条件下（适宜的温室度及离子强度等）可按碱基互补原成双链。杂交的双方是待测核酸序列及探针（probe）,待测核酸序列可以是克隆的基因征段，也可以是未克隆化的基因组DNA和细胞总RNA。核酸探针是指用放射性核素、生物素或其他活性物质标记的，能与特定的核酸序列发生特异性互补的已知DNA或RNA片段。根据其来源和性质可分为cDNA探针、基因组探针、寡核苷酸探针、RNA探针等。 固相杂交 固相杂交（solid-phase hybridization）是将变性的DNA固定于固体基质（硝酸纤维素膜或尼龙滤膜）上，再与探针进行杂交，故也称为膜上印迹杂交。 斑步杂交（dot hybridization） 是道先将被测的DNA或RNA变性后固定在滤膜上然后加入过量的标记好的DNA或RNA探针进行杂交。该法的特点是操作简单，事先不用

经口给药有口服和灌胃两种方法，口服法一般将药物掺入饲料或溶于水中，由动物自由摄取，但为了保证药物的剂量准确性，应使用灌胃法。可供选择的动物有小鼠、大鼠、豚鼠、兔、猫、狗等动物。 灌胃法 (1)小鼠灌胃法：将小鼠放在粗糙面上，用左手手掌及小指无名指夹住尾部，再以拇指及示指抓住两耳和头颈部的皮肤，使口腔和食管成一直线，腹部面朝上，右手持灌胃器（1~ 2ml的注射器和16号兽用针头，把针尖部磨钝，针头长4. Scm），从小鼠口角插入口腔内，经舌面紧沿上腭进入食管，进针2~ 3cm左右即可注药。手法正确，进针很顺。如进针遇到阻力，应退出重插，不能强插。以免刺破食管或误人气管，使动物死亡，灌药量一般为0.l~ 0.3ml/10g体重。 (2)大鼠灌胃法：右手提起鼠尾，将鼠放在粗糙物（鼠笼面）上面 ，轻轻向后拉尾巴，此时大鼠前肢抓住粗糙面不动，用左手的拇指和示指捏住双耳以下的头颈部皮肤，使鼠头不能左右活动，中指、无名指和小指及掌心夹住背部皮肤，使头颈部拉直，腹面朝上，右手持灌胃器（灌胃针头长6~ 8cm，直径约为1.2mm，尖端呈球状或钝状。）自口角插入口腔，从舌面沿上腭

相关专题 二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 技术结合了等电聚焦技术（根据蛋白质等电点进行分离）以及SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳技术（根据蛋白质的大小进行分离）。这两项技术结合形成的二维电泳是分离分析蛋白质最有效的一种电泳手段。 通常第一维电泳是等电聚焦，在细管中（φ1～3 mm）中加入含有两性电解质、8M的脲以及非离子型去污剂的聚丙烯酰胺 凝胶进行等电聚焦，变性的蛋白质根据其等电点的不同进行分离。而后将凝胶从管中取出，用含有SDS的缓冲液处理30 min，使SDS与蛋白质充分结合。 将处理过的凝胶条放在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳浓缩胶上，加入丙烯酰胺溶液或熔化的琼脂 糖溶液使其固定并与浓缩胶连接。在第二维电泳过程中，结合SDS的蛋白质从等电聚焦凝胶中进入SDS－聚丙烯酰胺凝胶，在浓缩胶中被浓缩，在分离胶中依据其分子量大小被分离。 对细胞提取液进行双向电泳时可分辨出1000～2000个蛋白分子 ，也有报道说能够分辨出5000～10000个蛋白斑点。这些报道的数据与细胞中正常存在的蛋白分子的数量很接近，因此可以说蛋白质双向电泳的分辨率较高，

1. 何谓必需脂肪酸？ 有些脂肪酸不能由机体合成，如亚麻酸，亚油酸和花生四烯酸等。需从食物中摄入，故称必需脂肪酸。 2. 何谓载脂蛋白？何谓酰基载体蛋白(ACP)？ 脂类不溶或微溶于水，而正常人血浆中脂类含量高达500 mg/dl，但血浆仍清澈透明。这表明血浆中的脂类不是以自由状态存在的。而是以一种可溶的形式存在和运输的，血浆中游离脂肪酸（非酯化的脂肪酸）由血清蛋白携带运输，每分子的清蛋白借非共价键可结合10个游离脂肪酸分子。血浆中游离脂肪酸量很少，仅占血浆中总脂肪酸的5-10％，其他均以酯的形式参与构成血浆脂蛋白。脂蛋白是蛋白和脂类多组分的复合体。蛋白质和脂类是通过非共价键连接。3. 试比较脂肪酸氧化及合成的异同点。 脂肪酸氧化过程可概括为活化，转移，β氧化，及最后经TAC被彻底氧化生产CO2和H2O并释放能量等四个过程。脂肪酸在肝内氧化时的乙酰CoA可产生酮体，但是肝不能利用酮体，需运到肝外组织氧化利用，特别当饥饿时脑和肌肉组织靠酮体氧化供能。而脂肪酸的合成是在胞液的脂肪酸合成酶体系作用下，以乙酰CoA为原料逐步缩合而成的，但乙酰CoA绝大部分首先羧化成丙二

1、使用范围凡具有芳香环或共轭双键结构的有机化合物，根据在特定吸收波长处所测得的吸收度，可用于药品的鉴别、纯度检查及含量测定。朗伯-比耳定律 A =ECL2、注意事项①空白溶液与供试品溶液必须澄清，不得有浑浊。如有浑浊，应预先过滤，并弃去初滤液。②测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同瓶溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池。③在规定的吸收峰波长±2nm以内测试几个点的吸收度，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确，除另有规定外，吸收峰波长应在该品种项下规定的波长±2nm以内；否则应考虑该试样的真伪、纯度以及仪器波长的准确度，并以吸收度最大的波长作为测定波长。④一般供试品溶液的吸收度读数，以在0.3～0.7之间的误差较小。⑤吸收池应选择配对，否则要引入测定误差。在规定波长下两个吸收池的透光率相差小于0.5%的吸收池作配对，在必要的情况时，须在最终测量扣除吸收池间的误差修正值。⑥由于吸收池和溶剂本身可能有空白吸收，因此测定供试品的吸收度后应减去空白读数，再计算含量。⑦在使用过程中，如需开启试样室盖时或暂时停止测试时，必须及时推入光门钮杆（使光电管前光门关闭），保护光电管，以防止光电管

一、苏木素(1) Harris苏木素：配方：苏木素 1 g 无水乙醇 10 ml蒸馏水 200 ml 钾明矾 20 g HgO 0.5 g先将苏木素溶于无水乙醇中，备用。把明矾放入蒸馏水，加热溶解，再加入备用的苏木素，煮沸 2 分钟，先加入少量的氧化汞，防止氧化过程中苏木素外溢，玻棒搅拌，然后，边搅拌边加入氧化汞。加完后，立即移至冰水中，加速其冷却，静置一夜后，过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长，冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量，可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了，会造成核浆共染，背景不干净；加多了，核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右，视气温而定。使用期要看染色的切片量来定：以每天100张片的量，可使用半个月左右。 其实不及着用的话，不加氧化汞也行。待苏木素自然氧化。[室温不同，氧化的时间也不同，一般需要三个月左右，用前过滤加冰醋酸。这种方法用的时间比较长]（2）Gill改良苏木素液苏木精 2 g 无水酒精 250 ml硫酸铝 17.6 g 蒸馏水 750 ml碘酸钠 0.2 g 冰醋酸 20 ml先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液

【原理】硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐： 产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g﹣1·h﹣1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。【仪器与用具】分光光度计；真空抽气泵（或20ml注射器筒）；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（15ml）；移液管（5ml×2，2ml×8，1ml×2）。【试剂】亚硝酸钠标准液 称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5μg（亚硝态氮近似1μg/ml）的标准液。0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取1.0g加入25m

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丁香园网友“园中木”要做支原体CCU，而不知道这个初始菌液的浓度如何选，因缺少标准的0.5麦氏浓度，所以比较困惑，看了相关文献有说将其定量到10的6次方左右，但又是如何定量的呢？网友“ljksbs”问答：这个我以前做过，只能用倍比稀释法:取12只无菌试管，每管预先加入1.8ml支原体选择性液体培养基，在第一管中加入0.2ml待测菌液，充分混匀后从第一管吸出0.2ml液体加入第二管，再混匀，吸出0.2ml加入第三管，依次类推，到最后一管，放入30度培养，CCU的定值以最后一管出现颜色改变作为，即如果第五管发生颜色改变为最后一管，此CCU为10的5次方/ml.如果第六管颜色改变为最后一管，为10的6次方/ml。由于支原体的液体生长是以颜色改变作为生长想象观察，其生长后的液体培养基仍然是澄清透亮的，只是颜色发生变化，不像大多数细菌液体是混浊的，因此用测OD值定量是行不通的.当然从理论上说固体的cfu平板浇注发也是可以行得通的，但是支原体的菌落很小，一般观察要在低倍镜下观察，照成研究人员的主观观察难度，易出现主观误差.因此支原体较好的定量方法还是倍比稀释的CCU较为简单可行，也是常用的.。