百合胚珠的发育和胚囊的形成　 　　百合花取材比较容易，而且其子房大而细长，中轴胎座，有三个子房室，每一子房室中有两列胚珠。百合胚珠在中轴上排列整齐，着生部位一致，在制作切片时，可在同一切面上同时切到六个胚珠，而且容易得到胚珠切面较正的切片（子房横切，胚珠纵切）。所以，常用百合子房作为观察胚珠和胚囊发育的材料。百合胚珠为倒生胚珠，其胚囊发育类型属于贝母型（四孢子八核类型），即四个大孢子核共同参与胚囊的发育。成熟胚囊虽然也具七细胞八核，但各细胞的染色体倍数与小麦的普通型胚囊有所不同。本实验取不同发育时期百合胚囊永久制片进行观察，了解贝母型胚囊的发育过程，并与普通型胚囊进行比较。同时注意观察百合胚珠各部分的发育过程，进一步熟悉倒生胚珠的基本结构。 　　观察下述各不同时期百合子房永久制片： 　　（一）胚囊母细胞时期 　　取百合幼小子房的横切面制片。首先在低倍物镜下观察切片的全貌。可以看到百合子房横切面近圆形，有三个子房室。每一子房室中在横切面上仅见到二个胚珠。胚珠着生处即为胎座。在对着每一子房室中央凹陷处的子房壁中可见一维管束穿过，此为中央束（或背

【 目的要求】 1. 掌握高铁-硫酸显色法测定血清总胆固醇 的原理和方法。 2. 了解血清 胆固醇的正常值及临床意义。 【 实验原理】 胆固醇（cholesterol）是环戊烷多氢菲的衍生物，它不仅参与血浆蛋白的组成，而且也是细胞 的必要结构成分，在神经组织和肾上腺中含量特别丰富，在肝、肾和表皮组织含量也很多。胆固醇是生物膜和神经髓鞘的重要组成部分，是维持生物膜的正常透过能力不可缺少的。胆固醇还可以转化成胆汁酸、固醇类激素和维生素D3等。胆固醇主要随胆汁从粪便排出体外。血液中的胆固醇仅有不到20%是从食物中摄取的，其余均由机体自身合成，肝、肠、肾、骨髓及内分泌腺等均是合成场所。由于血液与组织内的胆固醇经常不断地交换，因此血清胆固醇水平基本能够反应胆固醇的摄取、合成及转送情况。胆固醇与动脉粥样硬化等有一定联系，据国外报道体内胆固醇长期偏低，是诱发癌症的因素之一。因此，胆固醇的测定是临床最普遍检测项目之一。胆固醇在体内以游离胆固醇（free cholesterol,FC）及胆固醇酯（cholesterol ester，CE）两种形式存在，统称总

Folin—酚试剂法（Lowry法）（一）实验原理这种蛋白质测定法是最灵敏的方法之一。过去此法是应用最广泛的一种方法，由于其试剂乙的配制较为困难（现在已可以订购），近年来逐渐被考马斯亮兰法所取代。此法的显色原理与双缩脲方法是相同的，只是加入了第二种试剂，即Folin—酚试剂，以增加显色量，从而提高了检测蛋白质的灵敏度。这两种显色反应产生深兰色的原因是：在碱性条件下，蛋白质中的肽键与铜结合生成复合物。‚Folin—酚试剂中的磷钼酸盐—磷钨酸盐被蛋白质中的酪氨酸和苯丙氨酸残基还原，产生深兰色（钼兰和钨兰的混合物）。在一定的条件下，兰色深度与蛋白的量成正比。Folin—酚试剂法最早由Lowry确定了蛋白质浓度测定的基本步骤。以后在生物化学领域得到广泛的应用。这个测定法的优点是灵敏度高，比双缩脲法灵敏得多，缺点是费时间较长，要精确控制操作时间，标准曲线也不是严格的直线形式，且专一性较差，干扰物质较多。对双缩脲反应发生干扰的离子，同样容易干扰Lowry反应。而且对后者的影响还要大得多。酚类、柠檬酸、硫酸铵、Tris缓冲液、甘氨酸、糖类、甘油等均有干扰作用。浓度较低的尿素（0.5%），硫酸纳（1

一、开机开机前将样品室内的干燥剂取出，确认电源是否连接。打开仪器电源开关，等待仪器自检通过，自检过程中禁止打开样品室。二、使用自检结束后（7个项目均出现OK字样），仪器进入主菜单，屏幕显示如下七个功能项：1.光度测量；2.光谱测量；3.定量测量；4.动力学测量；5.数据处理；6.多波长测定；7.系统状态设定。仪器经30min热稳定后，就可以进入正常测量。1.光度测量 测定一定波长下的透光率（T%）或吸光度值（A）在主菜单中选中[光度测量]项后，按[ENTER]键进入此功能块 → 按[GOTO WL]键进入波长设置用数字键输入你所需的波长值→ 按[ENTER]键确认→ 屏幕提示：请稍等……，仪器自动将波长移动到你所需测定的波长值→ 按[F1]键，选择测定透光率（T%）或吸光度值（A） → 打开样品室盖，将空白溶液和待测样品分布放置比色皿架R位和S1位，关上样品室盖→ 按[F3]键，仪器自动将比色皿架R位置移动到光路中（即空白溶液），屏幕上显示Cell=R → 按[AUTO ZERO]键，仪器自动对空白溶液调零。屏幕提示：请稍等…… → 按[F2]键，比色皿架移动到S1位（待测样品），

冷冻保存方法 按照冷冻保护液在冻结后是否形成冰晶来划分，冻存方法可分为非玻璃化和玻璃化冻存两种。非玻璃化冻存是利用各种温级的冰箱分阶段降温至-700C～-800C，然后直接投入液氮进行保存；或者是利用电子计算机程控降温仪以及利用液氮的气、液，按一定的降温速率从室温降至-1000C以下，再直接投入液氮保存的方法。以该种方法冻结的细胞悬液或多或少都有冰晶的形成。玻璃化冻存则是指利用多种高浓度的冷冻保护剂联合形成的玻璃化冷冻保护液保护悬浮细胞，直接投入液氮进行冻存的方法。以该中方法冻结的细胞悬液没有冰晶的形成。但目前细胞冻存最常用的仍是前一种方法。 一、非玻璃化冻存方法 下面以肿瘤细胞和杂交瘤细胞为例，介绍非玻璃化冻存细胞的详细过程。 主要材料 1. 仪器设备：普通冰箱、-300C低温冰箱和-700C～-800C超低温冰箱、液氮冻存罐、高速离心机、电子计算机程控降温仪等； 2. 冻存管：容量为1ml或1.5ml； 3. 冷冻保护液：一般是以9份小牛血清或细胞培养液与1份DMSO混合而成。现配现

实验材料： 1. 正常人角膜移植供体角膜 2. 胰蛋白酶/EDTA液：0.05%胰蛋白酶，0.5mmol/L EDTA 3. KGM：无血清角质形成细胞培养液，添加0.15mmol/L 钙、0.1ng/ml 人上皮生长因子、5mg/ml 胰岛素、0.5mg/ml 氢化可的松和30mg/ml 牛垂体提取物；MEM；PBSA；胎牛血清 4. FNC：10mg/ml 纤连蛋白、35ug/ml 胶原蛋白和100mg/ml BSA（bovine serum albumin）。BSA作为稳定剂 5. 6孔培养板：用鼠尾Ⅰ型胶原蛋白涂培养板底壁 6. 不含Ca2+ 和Mg2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素和200000U/L庆大霉素，pH7.4 7. 手术刀、解剖剪、解剖镊、眼科剪，眼科镊 8. 离心管（15ml、50ml） 实验方法： 1. 将供体角膜放于消毒过的容器上，上皮面朝上，用手术刀切成12个三角形组织片。应一刀切下，避免锯割。如此仔细处理角膜可减少对胶原基质的破坏和成纤维细胞的脱落。 2. 将角膜组织片的上皮面朝向下，放入用

一、原代细胞培养原理原代细胞培养是将机体内的某组织取出，分散成单细胞，在人工条件下培养使其生存并不断生长、繁殖的方法。借助这种方法可以观察细胞的分裂繁殖、细胞的接触抑制以及细胞的衰老、死亡等生命现象。• 幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养• 掌握无菌操作技术• 了解小鼠解剖操作技术• 了解原代细胞培养的一般方法与步骤• 了解培养细胞的消化分散• 了解倒置显微镜的使用二、实验材料• 实验动物：孕鼠或新生小鼠• 液体：细胞生长液（内含20%小牛血清）0.25%胰蛋白酶平衡盐溶液70%乙醇• 器材：灭菌镊子、剪刀若干把灭菌培养皿、细胞培养瓶、小瓶、烧杯若干个吸管若干支酒精灯原代细胞培养方法三、胰酶消化法（1）胰酶消化法操作步骤——取材a. 用颈椎脱位法使孕鼠迅速死亡。b. 把整个孕鼠浸入盛有75%乙醇的烧杯中数秒钟消毒，取出后放在大平皿中携入超净台。c. 用无菌的镊子和剪子在前腿下作一腹部水平切口，用无菌镊子将皮肤扯向后腿。d. 用另一无菌的剪刀和镊子切开腹部，取出含有胚胎的子宫，置于无菌的培养皿上。e. 剔除胚胎周围的包膜（若胚胎较大，应剪去头、爪），将

劈接是最常用的枝接方法，既用于果树花木，也用于草本花卉和瓜类蔬菜。在果树花木方面，它适用于直径2～3厘米砧木的枝接。现将果树花木的劈接方法步骤说明如下。(1)削接穗。将采来的接穗去掉梢头和基部叶芽不饱满的部分，截成5～6厘米长，生有2～3个饱满叶芽。然后在接穗下芽3厘米左右处的两侧削成一个正楔形的斜面，削面长2～3厘米。如果砧木较细只能插1个接穗时，则应削成偏楔形，即外侧稍厚，内侧稍薄。接穗削好后，应该用温布包裹，以防止水分蒸发。(2)劈砧木。在离地面2～3厘米或与地面平处锯断砧木的树干，清除砧木周围的土、石块和杂草。砧木断面要用快刀削平滑。在断面上选择皮厚、纹理顺的地方做劈口。劈口应安排在断面中间或三分之二处，垂直向下深约2～3厘米。在砧木断面上劈口时，不要用力过猛，可将劈接刀放在要劈开的部位，轻轻敲打刀背，使劈接刀慢慢进入砧木中。(3)插接穗。用劈接刀楔部撬开切口，将接穗轻轻插入，并使接穗靠在砧木的一边，务必要使接穗和砧木的形成层对准。粗的砧木可以两边各插一个接穗，甚至将砧木劈成十字形，插入4个接穗。插接穗时，不要将削面全插进去，要露出2～3毫米削面，这样做能使接穗和砧木的形成层接

小鼠的饲养管理非常繁琐，要求饲养人员具有高度的责任心，随时检查小鼠状况，出现问题立即加以纠正。为了使饲养工作有条不紊，必须将各项操作统筹安排，建立固定的操作程序，使饲养人员不会遗漏某项操作，同时也便于管理人员随时检查。1、饲喂小鼠胃容量小，随时采食，是多餐习性的动物。成年鼠采食量一般为3～7克／天，幼鼠一般为1～3克／天。应每周添料3～4次，在鼠笼的料斗内应经常有足够量的新鲜干燥饲料，在小鼠大群饲养中，每周应固定两天添加饲料，其它时间可根据情况随时注意添加。 根据小鼠不同阶段的生长发育特点，应有不同的给饲标准。由于种鼠群和生产鼠群交配繁殖频繁，尤其生产种母鼠的负担重，能量消耗大，因此除供给足够的块料外，还要定时饲喂少量葵花籽、麦芽和拌有鸡蛋的软料。葵花籽供应量为0.5～1克／天／只成年鼠。而麦牙和软料由于微生物条件较难控制，目前趋于淘汰不用，而致力于颗粒料的全价营养，即用维生素合剂代替。2、给水用饮水瓶给水，每周换水2～3次，成年鼠饮水量一般为4～7ml／天，要保证饮水的连续不断，应常检查瓶塞，防止瓶塞漏水造成动物溺死或饮水管堵塞使小鼠脱水死亡。小鼠在吸水过程中，口内食物颗粒和唾液可倒

佚名 　　代谢性酸中毒（Metabolic Acidosis）的特征是血浆[HCO - ]原发性减少。 　　代谢性酸中毒又可根据AG是否增加分为二类：AG增加类代谢性酸中毒，病人血浆[Cl - ]水平正常，亦即文献上经常提到的正常血氯性代谢性酸在毒。AG正常类代谢性酸中毒，病人血浆[Cl - ]水平却升高，亦即文献上经常提到高血氯性代谢性酸中毒。这其间的关系我们在本章未尾部分介绍清楚。 （一）原因和机制 1.酸性物质产生过多 　　（1）乳酸酸中毒：乳酸酸中毒（Lactic Acidosis）可见于各种原因引起的缺氧，其发病机制是缺氧时糖酵解过程加强，乳酸生成增加，因氧化过程不足而积累，导致血乳酸水平升高。这种酸中毒很常见。临床上伴有缺氧的病人休克、严重 贫血 、呼吸暂停、心脏停搏、CO中毒、氰化物中毒、癫痫发作及过于剧烈的运动、洒精中毒时的心脏呼

实验原理 核酸分子杂交是通过配对碱基对之间的非共价键（主要是氢键）结合，从而形成稳定的双链区。杂交分子的形成并不要求两条单链的碱基顺序完全互补，所以不同来源的核酸单链只要彼此之间有一定程度的互补顺序（即某种程度的同源性）就可以形成杂交双链。分子杂交可在DNA与DNA、RNA与RNA或RNA与DNA的二条单链之间进行。由于DNA一般都以双链形式存在，因此在进行分子杂交时，应先将双链DNA分子解聚成为单链，这一过程称为变性，一般通过加热或提高pH值来实现。用分子杂交进行定性或定量分析的最有效方法是将一种核酸单链用同位素或非同位素标记成为探针，再与另一种核酸单链进行分子杂交。 随着基因工程研究技术的迅猛发展，新的核酸分子杂交类型和方法在不断涌现和完善。核酸分子杂交可按作用环境大致分为固相杂交和液相杂交两种类型：一、固相杂交 将参加反应的一条核酸链先固定在固体支持物上，一条反应核酸游离在溶液中。固体支持物有硝酸纤维素滤膜、尼龙膜、乳胶颗粒、磁珠和微孔板等。由于固相杂交后，未杂交的游离片段可容易地漂洗除去，膜上留下的杂交物容易检测和能防止靶DNA自我复性等优点，所以最为常用。常用的固相

试剂： RNA提取缓冲液（CTAB）：2% CTAB（W/V），2% 聚乙烯吡咯烷酮PVP（W/V），100 mM Tris-HCl（pH8.0,DEPC处理的水配置），25mM EDTA, 0.5g/L 亚精胺Spermidine，2.0M NaCl，2%巯基乙醇（V/V，使用前加入）。由于在高温灭菌条件下，Tris-HCl要和DEPC发生反应，所以配RNA提取缓冲液时直接用DEPC 处理的水配制即可。 SSTE：1 M NaCl，0.5% SDS（W/V），10 mM Tris-HCl pH8.0，1.0 mM EDTA 10M LiCl 直接用蒸馏水配10M LiCl，加1‰的DEPC过夜后，高温灭菌。 3M NaAc 氯仿:异戊醇（24:1） 酚（pH4.5）:氯仿:异戊醇（25:24:1） DEPC处理水 用1‰的DEPC处理蒸馏水过夜，高温灭菌 无水乙醇 70%酒精 方法： 1. 实验开始前将RNA提取液于65℃水浴锅中预热，离心管中加入ME（巯基乙醇）（10mL加80ul，50mL中加入300ul）。 2.取约0.8g菌丝体（液体培养获得的菌丝

〈一〉实施微生物和寄生虫控制的意义实验动物携带的微生物及寄生虫有严格的控制，尤其是可引起实验动物爆发烈性传染性疾病的病原微生物，及引发严重侵袭病的寄生虫。即使是一般性的病原微生物和寄生虫的携带，都必须严格控制。目的是保证实验动物的品质，防止出现：一、动物及实验的损失。一些疾病，如鼠痘、犬细小病毒出血性肠炎、兔球虫病等会导致动物大批量的死亡，动物群体的健康素质下降，正在进行的科学实验被迫中止，造成难以计算的经济损失; 二、威胁人类健康。实验动物的疾病，有许多是人兽共患的传染性疾病，有很多情况是动物仅呈隐性感染，或仅成为病原携带者，对饲养和动物实验人员潜伏着巨大的危害，并可能造成烈性传染病大规模的扩散。三、影响实验结果。实验动物的微生物和寄生虫感染会不同程度地影响动物实验的结果，从而影响实验数据的准确性和可靠性，甚至会推导出错误的结论。〈二〉实验动物微生物和寄生虫控制的等级普通动物这是微生物和寄生虫控制要求最低的实验动物。要求动物不携带主要的人兽共患病、自身的烈性传染病的病原体及体外寄生。普通级小鼠，要求排除2种细菌、3种病毒、2类寄生虫;普通级大鼠必须排除2种细菌、1种病毒、2类寄生虫，

一般情况下分离病毒可以用传代细胞、原代细胞或者直接用动物接种或者鸡胚接种，只有在找不到适合病毒生长的原代细胞或者传代细胞的情况下才运用动物接种或者鸡胚接种的方法分离病毒。大致过程应该是这样的：第一 获取病毒分离样品，这个要求比较高，采集后如果不能立即操作则必须低温保存，并尽快送实验室操作。另外也可以冷冻保存，一般情况下病毒是不容易冻死的。当然某些特殊病毒除外，这需要查阅相关资料。第二 病毒分离操作，将获取病样研磨，并冻融至少一次，当然研磨过程中必须低温。同时研磨应充分，在研磨时可以加入生理盐水或PBS或者直接加细胞培养液，研磨完全后冻融一到三次，冻融的目的是为了让细胞完全破裂将细胞内的病毒释放到溶液中。然后低速离心，取上清用0.22微米的滤膜过滤，去过滤后的液体接种细胞。此时须注意，并不是所有病毒接种是都需要让细胞完全长满细胞瓶，一般是不能产生细胞病的病毒最好在细胞长到40%左右接种，而能产生细胞病变的则需要完全长满细胞瓶以后再接种病毒。接种过程中为避免污染可以加入双抗，或者其他抗生素。第三 接种后观察，某些能产生细胞病变的病毒很容易观察，直接在显微镜下就能看是否分离成功；如果病毒不产

相关专题 一、实验目的 掌握用费林试剂法测定总糖的原理和方法。 二、实验原理 还原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的单糖和某些二糖(如：乳糖、麦芽糖)。在碱性溶液中，还原糖能将金属离子(Cu2+，Hg2+，Ag+等)还原，而糖本身被氧化成各种羧酸类化合物。 该特性常用于糖的定性和定量测定。本实验采用费林试剂热滴定法，费林试剂是氧化剂，由甲乙两种溶液组成。甲液含硫酸酮和次甲基蓝(氧化还原指示剂)；乙液含氢氧化钠、酒石酸钾钠和亚铁氰化钾。当甲、乙两溶液混合时，硫酸铜与氢氧化钠反应生成天蓝色的氢氧化铜沉淀。在碱性溶液中，酒石酸钾钠与沉淀的氢氧化铜作用形成可溶性的络合物。 费林(Feiling)试剂是含有Cu2+的碱性溶液，能使具有自由基或酮基的糖氧化，其本身则被还原成红色或黄色的Cu2O(由于沉淀速度不同，形成的颗粒大小不同，颗粒大的为红色，小的为黄色)。三、仪器和试剂 仪器 酸式滴定管(25mL)、吸量管(5，10mL)、容量瓶(100mL)、电炉、锥形瓶(250mL)、滴管、点滴板。 试剂 1. 费林试剂

（一）理化性状和用途无色透明棱形结晶或白色颗粒状及结晶状粉末，有冷感和刺激性咸味。密度：2.11，熔点：338℃。用于焰火、炸药、火柴、肥料、试剂、玻璃、冶金、氧化剂、食品保存、医药、肉制品的着色剂等。（二）毒性毒性比较低。（三）短期过量暴露的影响大量饮用时可引起胃肠炎。（四）长期暴露的影响长期持续吸收可引起高铁血红蛋白、高血症。可致嗅觉减退。（五）火灾和爆炸火灾危险中毒、有爆炸危险性。（六）化学反应性与还原剂、碳、硫及钛、锌等金属粉末接触能引起燃烧或爆炸。（七）人身防护吸入：着火时，消防人员须穿戴氧气防毒面具。以防中毒。皮肤：使用手套、工作服和工作鞋，工作场所应备有可用的安全淋浴和眼睛冲洗器具。（八）急救吸入：使吸入毒气的患者脱离污染区，安置休息并保暖。眼睛和皮肤接触：用大量水冲洗。口服：误服立即漱口，急送医院救治。（九）储藏和运输储存于阴凉、干燥处，防止受潮。与可燃物、有机物、还原剂、硫磺、亚硫酸氢钠和强酸隔离储运。（十）安全和处理对泄漏须立即清除。扫起，倒至空旷地方掩埋，被污染地面用水反复冲洗，并用布摸净，以免干燥后遇有机物如纸张、木材、纤维等引起燃烧。（使用“氧化剂”标志）

相关专题 缺氧动物模型复制及中枢神经系统功能抑制和低温对缺氧的影响 【目的】 本实验学习复制乏氧性缺氧和血液性缺氧的动物模型方法，观察缺氧过程中呼吸的反应及血液色泽和全身一般情况的变化，并了解温度和中枢神经系统机能状态对缺氧耐受的影响以及对照实验和控制实验条件重要性。 【原理】 当供应组织的氧不足，或组织利用氧障碍时，机体的机能和代谢可发生异常变化，这种病理过程称为缺氧。缺氧是多种疾病共有的病理过程。许多原因都能使机体发生缺氧。不同类型的缺氧，其机体的代偿适应性反应和症状表现有所不同。根据缺氧的原因不同可将缺氧分为乏氧性缺氧、血液性缺氧、循环性缺氧和组织中毒性缺氧四种类型。 将动物放置于密闭的容器内，使其吸入气中的氧分压逐步降低以复制乏氧性缺氧模型。乏氧性缺氧（又称低张性缺氧），主要表现为动脉血氧分压降低，氧含量减少，组织供氧不足。正常毛细血管血液中氧离血红蛋白 浓度约为26g /L。乏氧性缺氧时，动、静脉血中的氧离血红蛋白浓度增高。当毛细血管血液中氧离血红蛋白浓度达到或超过50g/L时，可使皮肤和粘膜呈青紫色（称为紫

恒温箱是实验室常用加热设备之一。按最高使用温度分为干燥箱（又称烘箱，烤箱），保温箱（又称培养箱）两类。干燥箱最高温度300℃，用以烘干样品、药品、容器等的水分，灭菌及零配件的热处理，功率1000～4000W。保温箱最高使用温度60℃，用以培养、孵化等，功率500W。按特殊用途恒温箱又可分为真空干燥箱、隔水式恒温箱、鼓风干燥箱、防爆干燥箱等。恒温箱一般由箱体、发热体（镍铬电热丝）、测温仪或温度计、控温机构、信号系统等组成，特殊用途的恒温箱还有水箱、鼓风马达、防爆装置等。进气孔一般在箱底部，排气孔在顶部。外壳为铁皮或木质箱体，内为保温箱，常用石棉板、玻璃纤维或珍珠岩等做绝热材料。电热丝装在底层，单根或多根并联，分主加热丝和辅加热丝，有的在侧壁也装有电热丝。箱外涂烤漆，箱体内壁涂耐高温银粉防腐。使用方法：1）使用前做好内、外检查，箱内如有他人存物，取出放好。试验开关、调温手柄等是否灵活好用。打开风顶（排气孔），插好温度计。注意电源和铭牌上标称电压是否相符。箱壳要接好地线，以防漏电。2）通电后指示灯亮，如加热指示红灯不亮应将调温旋钮顺时针方向转动至红灯发亮。恒温箱如有辅助加热丝及鼓风马达，应将

相关专题 DNA双螺旋结构的前前后后 我们拟提出脱氧核糖核酸 (DNA)盐的一种结构。这种结构的崭新特点具有重要的生物学意义。 鲍林和考瑞曾提出过一个核酸结构。他们在发表这一结构之前，欣然将手稿送给我们一阅。他们的模型包含磷酸接近纤维袖，碱基在外周的三条多核苷酸 链。我们觉得这样的结构是不够满意的，其理由有二：(1)我们认为进行过X射线衍射分析的样品是DNA的盐而不是游离的酸。没有酸性氢原子，接近轴心并带负电的磷酸会相互排斥。在这样的条件下，究竟是什么力量把这种结构维系在一起，尚不清楚。(2)范德瓦尔力距似显太小。弗雷泽曾提出过另外一种三条多核苷酸 链的结构(将出版)。在他的模型中，磷酸在外边，碱基在内部，并由氢键维系着。他描述的这种结构也不够完善，因此，我们将不予评论。 我们拟提出一个完全不同的脱氧核糖核酸盐的结构。该结构具有绕同一轴心旋转的两条螺旋链(见图)。根据化学常识我们假定，每条链包括联结β-D-脱氧呋喃核糖的3',5'磷酸二酯键。两条链(不是它们的碱基)与纤维轴旋转对称垂直，并呈右手螺旋。由于旋转对称

孵育一抗 A. 先将需要检测的抗体准备好，并决定好它们的稀释度。 B. 配好5%的Milk(TBST溶解)，按要求稀释好抗体。注意，如需高比例稀释，最好采用梯度稀释。 C. 将稀释好的抗体和膜一起孵育。 一般采用RT 1小时，可根据抗体量和膜上抗原量适当延长或缩短时间。 注意：为了便于后面分析结果，我们一般会选用已确定分子量大小而且纯度高的抗体作为marker与一抗同时孵育。 洗涤 用 TBST先快速洗三次，把milk尽快的wash掉。然后5mins *5。 洗涤是为了洗去一抗与抗原的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅。 孵育二抗 孵育 RT1 小时。 一般采用HRP标记的二抗，稀释比例为1:5000。二抗的稀释比例不能太低，否则容易导致非特异性的结合。注意二抗的选择有多种，要根据一抗来选择抗兔、抗鼠或者抗羊的二抗，以及根据后面的显色条件来选择HRP、AP或者GOD（葡萄糖氧化酶）酶链的二抗或者标志其他探针（如核素等）的。 洗涤 用 TBST先快速洗三次，把milk尽快的wash掉。 然后5mins *5。 洗涤是为了洗去二抗的非特异性结合，洗涤