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WZZ-2型自动旋光仪的原理与使用

(一)仪器的用途 旋光仪是测定物质旋光度的仪器。通过对样品旋光度的测定,可以分析确定物质的浓度、含量及纯度等。WZZ-2自动旋光仪采用光电检测自动平衡原理,进行自动测量。测量结果由数字显示。它既保持了WZZ-1自动指示旋光仪稳定可靠的优点,又弥补了它的读数不方便的缺点,具有体积小,灵敏度高,没有人差,读数方便等特点。对目视旋光仪难以分析的低旋光度样品也能适应。因此广泛应用于医药、食品、有机化工等各个领域。农业:农用抗菌素、农用激素、微生物农药及农产品淀粉含量等成份分析。医药:抗菌素、维生素、葡萄糖等药物分析,中草药药理研究。食品:食糖、味精、酱油等生产过程的控制及成品检查,食品含糖量的测定。石油:矿物油之分析、石油发酵工艺的监视。香料:香精油之分析。卫生事业:医院临床糖尿病分析。(二)仪器的性能 (1)测定范围:±45º(2)准确度:±(0.01°+测量值X5/10000)(3)可测样品最低透过率:10%(对钠黄光而言)(4)读数重复性:≤0.01º(5)显示器自动数字显示最小示值:0.005º速度:1.30º/秒(6)单色光源:钠光灯加滤色片(589.3毫微米)(7)试管:200毫米

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光合作用基础知识讲座系列六:影响光合作用的因素

植物的光合作用受内外因素的影响,而衡量内外因素对光合作用影响程度的常用指标是光合速率(photosynthetic rate)。一、光合速率及表示单位 光合速率通常是指单位时间、单位叶面积的CO2吸收量或O2的释放量,也可用单位时间、单位叶面积上的干物质积累量来表示。常用单位有:μmol CO2·m-2·s-1 (以前用mg·dm-2·h-1表示,1μmol·m-2·s-1=1.58mg·dm-2·h-1)、μmol O2·dm-2·h-1 和mgDW(干重)·dm-2·h-1。CO2吸收量用红外线CO2气体分析仪测定,O2释放量用氧电极测氧装置测定,干物质积累量可用改良半叶法等方法测定(请参照植物生理实验指导书)。有的测定光合速率的方法都没有把呼吸作用(光、暗呼吸)以及呼吸释放的CO2被光合作用再固定等因素考虑在内,因而所测结果实际上是表观光合速率(apparent photosynthetic rate)或净光合速率(net photosynthetic rate,Pn),如把表观光合速率加上光、暗呼吸速率,便得到总光合速率(gross photosyntheticrate)或真光

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小动物行为学仪器的种类和简介

大小鼠转棒仪该仪器用于研究药物对动作协调性和抗疲劳特性的影响,对相关药物筛选有重要价值。实验时将动物放置在滚筒上并避免滑落,转动滚筒后,如果动物滑落下来就会相应停止下面的传感平台进行结果记录,可以同时进行五个大鼠或小鼠实验,大鼠采用直径3.75英寸的滚筒,小鼠采用直径为1.25英寸的滚筒。仪器采用数字控制:  5个标准通道,测试时间可调;  启动速度可调,最终速度可调;  加速度可调,前进反转两种模式选择;  测量距离可记录,标准计算机打印口输出;  RS232 串口输出。大小鼠疲劳测试仪可从一通道扩充至五通道;  每通道配置震动栅格;  每通道可设置测试时间;  每通道可设置测试速度;  每通道可设置倾斜度,分五挡从0度至40度;  标准计算机打印口输出。记录大小鼠(个体或群体)自发性活动及随时间而发生的变化,用于研究毒理学、精神药理学、行为科学等方面,评估药物对动物行为的改变,药物对神经系统的作用,动物对不同环境的行为变化等。设备包括透明观察室,两组相对的红外线阵列记录水平方向的活动和垂直方向的活动(如站立)。通过选配的打印机打印结果或通过软件连接PC。

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流式细胞术中的几点注意事项

一、对照组的设置: 在流式细胞术中所测得的量都是相对值,不是绝对值。如需知道绝对值时必须设置对照组样品。对照组样品包括有阴性对照和阳性对照。1. 阴性对照的设置① 在实验过程中,如做间接标记法,可设置与一抗无关的实验,即在实验中不加一抗而只加上带有荧光标记的第二抗体作为阴性对照管,作为阴性对照。② 在实验过程中,假设做直接标记法,可设置理论上的阴性细胞作为阴性对照管, 实验过程及步骤与实验组务必相同。(做间接标时记法同样也可同时设置“阴性细胞”的阴性对照管作为阴性对照。③ 在实验过程中,假设做直接标记法,可将实验组细胞,取一管,加上与实验抗体所标记的荧光颜色相同的同型对照来作为阴性对照。2. 阳性对照的设置: 在实验过程中如涉及到表达缺失或减少的实验,应设置阳性对照组,其设置方法与阴性对照设置相同。二、几点建议:1. 在实验过程中,在保证实验的科学性和准确性的基础上,应尽量减少实验工序和过程。由于间接标记法的工序多,实验过程长,如再加之操作的不熟练,细胞更容易丢失和受损,而造成实验结果的误差。因此,在条件允许的范围内,建议尽量做直接标记法而不去做间接标记法,以保证实

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生物芯片入门(一):生物芯片及应用简介

一、简介生物芯片(biochip)是指采用光导原位合成或微量点样等方法,将大量生物大分子比如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等等生物样品有序地固化于支持物(如玻片、硅片、聚丙烯酰胺凝胶、尼龙膜等载体)的表面,组成密集二维分子排列,然后与已标记的待测生物样品中靶分子杂交,通过特定的仪器比如激光共聚焦扫描或电荷偶联摄影像机(CCD)对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析,从而判断样品中靶分子的数量。由于常用玻片/硅片作为固相支持物,且在制备过程模拟计算机芯片的制备技术,所以称之为生物芯片技术。根据芯片上的固定的探针不同,生物芯片包括基因芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片,另外根据原理还有元件型微阵列芯片、通道型微阵列芯片、生物传感芯片等新型生物芯片。如果芯片上固定的是肽或蛋白,则称为肽芯片或蛋白芯片;如果芯片上固定的分子是寡核苷酸探针或DNA,就是DNA芯片。由于基因芯片(Genechip)这一专有名词已经被业界的领头羊Affymetrix公司注册专利,因而其他厂家的同类产品通常称为DNA微阵列(DNA Microarray)。这类产品是目前最重要的一种,有寡核苷酸芯片、c

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光合作用基础知识讲座系列五:碳同化

植物利用光反应中形成的NADPH和ATP将CO2转化成稳定的碳水化合物的过程,称为CO2同化(CO2 assimilation)或碳同化。根据碳同化过程中最初产物所含碳原子的数目以及碳代谢的特点,将碳同化途径分为三类:C3途径(C3 pathway)、C4途径(C4 pathway)和CAM(景天科酸代谢,Crassulacean acid metabolism)途径。一、C3途径糖和淀粉等碳水化合物是光合作用的产物,这在100多年前就知道了,但其中的反应步骤和中间产物用一般的化学方法是难以测定的。因为植物体内原本就有很多种含碳化合物,无法辨认哪些是光合作用当时制造的,哪些是原来就有的。况且光合中间产物量很少,转化极快,难以捕捉。1946年,美国加州大学放射化学实验室的卡尔文(M.Calvin)和本森(A.Benson)等人采用了两项新技术:(1)14C同位素标记与测定技术(可排除原先存在于细胞里的物质干扰,凡被14C标记的物质都是处理后产生的);(2)双向纸层析技术(能把光合产物分开)。选用小球藻等单细胞的藻类作材料,藻类不仅在生化性质上与高等植物类似,且易于在均一条件下培养,还可在

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光合作用基础知识讲座系列四:电子传递和光合磷酸化

原初反应使光系统的反应中心发生电荷分离,产生的高能电子推动着光合膜上的电子传递。电子传递的结果,一方面引起水的裂解放氧以及NADP+的还原;另一方面建立了跨膜的质子动力势,启动了光合磷酸化,形成ATP。这样就把电能转化为活跃的化学能。一、电子和质子的传递(一)光合链(photosynthetic chain)所谓光合链是指定位在光合膜上的,由多个电子传递体组成的电子传递的总轨道。现在较为公认的是由希尔(1960)等人提出并经后人修正与补充的“Z”方案(“Z” scheme),即电子传递是在两个光系统串联配合下完成的,电子传递体按氧化还原电位高低排列,使电子传递链呈侧写的“Z”形。叶绿体中的电子传递模式可以看出:(1)电子传递链主要由光合膜上的PSⅡ、Cyt b6/f、PSⅠ三个复合体串联组成。(2)电子传递有二处是逆电势梯度,即P680至P68undefined,P700至P70undefined,这种逆电势梯度的“上坡”电子传递均由聚光色素复合体吸收光能后推动,而其余电子传递都是顺电势梯度进行的。(3)水的氧化与PSⅡ电子传递有关,NADP+的还原与PSⅠ电子传递有关。电子最终供体为水,水氧化时,向PSⅡ传交4

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王泛森院士:如果让我重做一次研究生

摘要:这是王泛森院士写的一篇文章,我觉得对即将读研的同学很有意义,到了研究生阶段,不能再用本科生的思维方式去学习,更应该具备学术研究素质,学会创新,学会主动学习,学会怎样与老师一起进入研究领域,又是人生中的一个新课题。 一、研究生与大学生的区别 首先跟大家说明一下研究生和大学生的区别。大学生基本上是来接受学问、接受知识的,然而不管是对于硕士时期或是博士时期的研究而言,都应该准备要开始制造新的知识,我们在美国得到博士学位时都会领到看不懂的毕业证书,在一个偶然的机会下,我问了一位懂拉丁文的人,上面的内容为何?他告诉我:“里头写的是恭喜你对人类的知识有所创新,因此授予你这个学位。”在中国原本并没有博硕士的学历,但是在西方他们原来的用意是,恭贺你已经对人类普遍的知识有所创新,这个创新或大或小,都是对于普遍的知识有所贡献。这个创新不会因为你做本土与否而有所不同,所以第一个我们必须要很用心、很深刻的思考,大学生和研究生是不同的。 (一)选择自己的问题取向,学会创新 你一旦是研究生,你就已经进入另一个阶段,不只是要完全乐在其中,更要从而接受各种有趣的知识,进入制造知识的阶段,也就是

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PCR扩增分离目的DNA片段实验原理、材料和步骤

一、目的了解多聚合酶链反应DNA 扩增技术的基本原理和实验应用,掌握PCR反应基本技术。二、原理PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域,它不仅可用于基因分离克隆和核酸序列分析,还可用于突变体和重组体的构建,基因表达调控的研究,基因多态性的分析,遗传病和传染病诊断,肿瘤机制探查,法医鉴定等方面。 PCR技术已成为方法学上的一次革命,它必将大大推动分子生物学各学科的研究发展。PCR是一种利用两种与相反链杂交并附着于靶DNA两侧的寡核苷酸引物经酶促合成特异的DNA 片段的体外方法,由高温变性,低温退火和适温延伸等几步反应组成一个循环,然后反复进行,使目的的DNA 得以迅速扩增。置待扩增DNA 于高温下解链成为单链DNA 模板;人工合成的两个寡核苷酸引物在低温条件下分别与目的片段两侧的两条链互补结合;DNA聚合酶在72℃将单核苷酸从引物3'端开始掺入,沿模板5'— 3'方向延伸,合成DNA 新链。由于每一循环所产生的DNA均能成为下一次循环的模板,所以PCR 产物以指

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木瓜蛋白酶的配制

问:我现在正在做神经细胞的培养,听说木瓜蛋白酶的消化作用比较好,购买后发现,不是简单的用三蒸水配制,有哪位高手能告之一二,万分感谢!答:我也用的sigma的木瓜酶,用hepes缓冲液很好溶的,一直没发现溶解度低的问题。其实关于酶的选择,也不能简单的看消化作用如何,还要考虑到实验设计,比如说胰酶的消化效果总体尚可,特点是消化出的细胞电生理状态稳定,膜状态较好,但是胰酶对某些蛋白损伤很大,比如NMDA受体,如果楼主的实验设计是培养细胞后进行NMDA受体电流的记录,那么选胰酶就不是上策;而且从产量上来讲,胰酶并不是最好的。再说木瓜酶,此酶消化的细胞产量好,细胞形态也很好,如果做共聚焦等形态方面的实验,结果非常漂亮。但是此酶消化的细胞电生理特性相比之下不好,膜脆性很大,典型的封接容易吸破难,当然这里指的是神经元,心肌细胞,膀胱细胞等膜比较厚的细胞另论。还有链霉蛋白酶、锯齿肽酶、枯草杆菌蛋白酶、嗜热菌蛋白酶等,均可得到形态完好的神经元,这些神经元具有很长的突起,相差明亮,醋酸荧光素摄取能力强。这些细胞在进行膜片钳操作时极易形成吉欧姆封接,但是很难形成全细胞记录,因为这些神经元膜脆性高而且容易迅速

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基因表达谱聚类分析

对于基因表达谱数据的分析是生物信息学的研究热点和难点。转化为数学问题,分析任务是从数据矩阵 M 中找出显著性结构,结构类型包括全局模型 (model) 和局部模式 (pattern) 。对基因表达谱数据的分析是数据挖掘问题,所采用的方法包括通过可视化进行探索性数据分析( Exploratory Data Analysis )、描述建模 (descriptive modeling) 、分类、聚类、回归和机器学习等。 基因表达谱分析所采用的常用方法是聚类,其目的就是将基因分组。从数学的角度,聚类得到的基因分组,一般是组内各成员在数学特征上彼此相似,但与其它组中的成员不同。从生物学的角度,聚类分析方法所隐含的生物学意义或基本假设是,组内基因的表达谱相似,它们可能有相似的功能。然而,产物有相同功能的编码基因(例如对其它蛋白质有磷酸化作用),不一定共享相似的转录模式。相反,有不同功能的基因可能因为巧合或随机扰动而有相似的表达谱。尽管有许多意外的情况存在,大量功能相关的基因的确在相关的一组条件下有非常相似的表达谱,特别是被共同的转录因子共调控的基因,或者产物构成同一个蛋白复合体,或者参与相同

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Western Blot 中如何选择内参抗体

相关专题Western BlotWestern Blot 即免疫印迹试验,可以利用 Western Blot 来比较在不同条件下,不同细胞组织中目的蛋白表达量的差异,属于定性,半定量试验。既然有差异性比较,参照物必不可少。Western Blot 试验中的标准(表达量)参照物即内参,有了参照物才能准确地比较目的蛋白表达量的差异。内参一般选用管家基因表达的蛋白,它们在各个组织细胞中表达相对恒定,不会因为外部条件变化而引起表达量的变化。而且内参可以监测整个试验体系是否正常,比如蛋白提取过程,转膜体系,显色体系等。beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 等已作为成熟的内参运用到试验中,下面就大致介绍下如何选择内参:样本来源● 如果是哺乳动物的组织或细胞,主要以 beta Actin、beta Tubulin、GAPDH、Lamin B1、PCNA 为代表;● 如果是植物样本,主要以 actin、Rubisco 为代表。目的蛋白定位● 全细胞蛋白和细胞质:beta Actin、beta Tubulin、GAPDH 等;● 细胞核蛋白: PCNA

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miRNA动物实验方法及应用案例集锦

miRNA动物实验方法 简介: miRNA作为生命科学最为热门的研究领域之一,动物实验已经成为阐明miRNA自身功能不可或缺的关键环节,也是搭建基础研究到临床应用的桥梁,其重要性正日益显现。 动物实验影响因素多,难度大,成本高。为了解决广大科研工作者面临的这些难题,锐博生物利用自身多年积累的先进技术,成功开发出国际一流品质miRNA研究工具:micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir。本产品采用特殊化学修饰和末端标记技术,增加体内细胞的吸收作用,提高其抵抗RNA酶降解的能力;经高度脱盐处理,降低毒副作用,使其在动物实验中操作简单,且发挥稳定和高效的作用。 应用: micrONTM miRNA agomir和micrOFFTM miRNA antagomir在miRNA功能实验中具有非常重要的作用,分别通过模拟miRNA的作用和竞争性抑制/特异性降解内源miRNA的作用而进行功能获得性(gain-of-function)和或功能缺失性(loss-of-function)研究。micrONTM miRNA agomir和

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脂肪酶活性测定方法

问:向大家请教脂肪酶活力的测定方法、仪器、试剂。多谢指教!答:这是我从一篇文献中找到的。用酸价作指标, 用95%乙醇作终止剂, 通过酸价的测定反映脂肪酶分解脂肪的程度, 从而求得酶活力。方法:1、粗酶液的制备用电子天平分别称取粗脂肪酶0.010 g、0.020 g 和0.030 g, 用蒸馏水溶解并定容至100 mL, 配成浓度分别为0.01%、0.02% 和0.03%的粗酶液。2、实验设计本实验以10 mL色拉油为底物,以酶用量、水解温度、反应时间为因素,通过酸价的测定选定其水解的最佳条件。3、酸价的测定酸价是指中和1 mol游离脂肪酸所需NaOH的毫克数, 它用于衡量油脂的水解程度。实验中用酸碱滴定法测定水解液的酸价, 参照文献[ 3, 4 ]中所使用的方法, 向所得的水解液滴加1 mL 95%的乙醇溶液, 摇匀, 终止反应, 并加入2滴酚酞指示剂, 迅速用0.05 mol/L的NaOH溶液滴定至溶液呈微红色, 在30 s内不消失为终点, 记录消耗的NaOH溶液毫升数(V ) 。用同样的方法测定空白值, 每个试验重复两次, 以平均值作为测定结果。酸价按下式计算:X = C (V -

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紫外吸收法测定核酸的含量

一、目的学习紫外分光光度法测定核酸含量的原理和操作方法,熟悉紫外分光光度计的基本原理和使用方法。二、原理核酸、核苷酸及其衍生物的分子结构中的嘌呤、嘧啶碱基具有共轭双健系统(-C=C一C=C-),能够强烈吸收250-280nm 波长的紫外光。核酸(DNA,RNA)的最大紫外吸收值在260nm 处。遵照Lambert-Beer 定律,可以从紫外光吸收值的变化来测定核酸物质的含量。在不同pH 溶液中嘌呤、嘧啶碱基互变异构的情况不同,紫外吸收光也随之表现出明显的差异,它们的摩尔消光系数也随之不同。所以,在测定核酸物质时均应在固定的pH溶液中进行。核酸的摩尔消光系数(或吸收系数),通常以ε(ρ)来表示,即每升含有一摩尔核酸磷的溶液在260nm 波长处的消光值(即光密度,或称为光吸收)。核酸的摩尔消光系数不是一个常数,而是依赖于材料的前处理、溶液的pH 和离子强度发生变化。它们的经典数值(pH = 7.0)如下:DNA 的ε(ρ)= 6 000 - 8 000RNA 的ε(ρ)= 7 000 - 10 000小牛胸腺DNA 钠盐溶液(pH = 7.0)的ε(ρ)= 6 600,DNA 的含磷量为9

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蛋白质提取方法大全

一、植物组织蛋白质提取方法 1、根据样品重量(1g样品加入3.5ml提取液,可根据材料不同适当加入),准备提取液放在冰上。2、把样品放在研钵中用液氮研磨,研磨后加入提取液中在冰上静置(3-4小时)。3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃4、提取上清夜,样品制备完成。蛋白质提取液:300ml4.11Mtris-HCl(pH8)45ml4.2甘油(Glycerol)75ml4.3聚乙烯吡咯烷酮(Polyvinylpolypyrrordone)6g 这种方法针对SDS-PAGE,垂直板电泳!二、植物组织蛋白质提取方法 三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜,然后离心(4℃8000rpm以上1小时)弃上清。3、加入等体积的冰浴丙酮(含0.07%的β-巯基乙醇),摇匀后离心(4℃8000rpm以上1小时),然后真空干燥沉淀,备用。4、上样前加入裂解液,室温放置30分钟,使蛋白充分溶于裂解液中,然后离心(15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准),可临时保存在4℃待用。5、用Brandfor

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细胞培养污染拯救及预防方法

概论污染是细胞培养的大敌。预防和避免污染是细胞培养成功的关键之一。一开始就要十分重视,防止污染,否则会前功尽弃,不仅浪费时间,而且浪费人力、物力,甚至造成无法弥补的损失。(一)污染的类型细胞培养过程中的污染不仅仅指微生物,而且还包括所有混入培养环境中的、对细胞生存有害或造成细胞不纯的物质,包括生物和化学物质。1、细菌污染细菌污染是实验室细胞培养中常见的污染,即使在细胞培养液中加入了抗菌素,也可能因为操作不慎而引起污染。最常见的有革兰氏阳性菌,如枯草杆菌以及大肠杆菌、假单胞菌等革兰氏阴性菌,其中又以白色葡萄球菌较常见。培养细胞受细菌污染后,会出现培养液变混浊,pH改变。污染后细胞发生病理改变,胞内颗粒增多、增粗,最后变圆脱落死亡。2、真菌污染真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种,最常见的真菌有烟曲霉、黑曲菌、孔子霉、毛霉菌、白色念珠菌和酵母菌。培养细胞受真菌污染后,可见培养液中漂浮着白色或浅黄色的小点,有的散在生长,培养液一般不发生混浊;倒置显微镜下可见丝状、管状或树枝状的菌丝纵横交错在细胞之间或培养基中,有的呈链状排列。真菌污染后,细胞生长变慢,但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落

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免疫组化各步骤中应注意事项

如何实现完美的免疫组化实验 1 .固定 :最好用4%的多聚甲醛固定液。对于冰冻切片,甲醛固定有时比冰冻丙酮好;但对于不同的组织和抗原 ,可选用不同的固定液。 有时候商品化的抗体会有比较适合而推荐的固定液,请于购置前注意说明书。 Bouin S固定液:饱和苦味酸750ml,甲醛250ml,冰醋酸50ml,其对组织的穿透力较强,固定较好,结构完整,但因偏酸,对抗原 有一定损害,且组织收缩明显,不适于组织标本的长期保存。 PLP液:即高碘酸钠-赖氨酸-多聚甲醛,适于固定石蜡切片。适于富含糖类组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。 2 .组织脱水,透明 :时间不能太长,否则在切片时容易碎片,切不完整。 3 .切片时展片: 有些组织在切片后难以在水中展开,这时可适当地在水中加入几滴乙醇。 4 .烤片: 60℃ 30分钟或37℃ 过夜,温度太高或时间太长,抗原 容易丢失。 5 .蜡块及切片的保存: 最好在4℃保存 6 .脱片问题 : Poly-L-Lysine(多聚赖氨酸)为目前免疫组化 染色工作中最常用的一种防脱片剂,6ml的多聚赖氨酸溶液可按1:10稀释

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PCR技术大攻略

一、PCR技术及步骤 聚合酶链式反应(PCR) PCR扩增产物的克隆 上述两个实验包含基本原理、步骤、问题等。 二、PCR常见问题汇总 1. 没有得到扩增产物 (1)酶失活或在反应体系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或运输不当而失活,往往通过更换新酶或用另一来源的酶以获得满意的结果。 (2)模板含有杂质。特别是对甲醛固定及石蜡包埋的组织常含甲酸,造成DNA脱嘌呤而影响PCR的结果。 (3)变性温度是否准确:PCR仪指示温度与实际温度是否相符,过高酶在前几个循环就迅速失活;过低则模板变性不彻底。 (4)反应系统中污染了蛋白酶及核酸酶,应在未加Taq酶以前,将反应体系95℃加热5-10分钟。 (5)引物变质失效。人工合成的引物是否正确。是否纯化,或因储存条件不当而失活。 (6)使用PCR试剂盒时还应注意: ①是否严格按照说明书操作; ②试剂使用前是否充分混匀; ③试剂储存过久或不当而失效。 2. 扩增产物在凝胶中

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经验分享:简并引物设计实际操作步骤

一、利用ncbi搜索不同物种中同一目的基因的蛋白或cDNA编码的氨基酸序列 因为密码子的关系,不同的核酸序列可能表达的氨基酸序列是相同的,所以氨基酸序列才是真正保守的。首先利用NCBI的Entrez检索系统,查找到一条相关序列即可。随后利用这一序列使用BLASTp(通过蛋白查蛋白),在整个Nr数据库中中查找与之相似的氨基酸序列。 二、对所找到的序列进行多序列比对 将搜索到的同一基因的不同氨基酸序列进行多序列比对,可选工具有Clustal W,也可在线分析[url][/url]http://www.ebi.ac.uk/clustalw/ 。其结果入下图所示,所有序列的共有部分将会显示出来。“”表示保守,“:”表示次保守。 三、确定合适的保守区域 设计简并引物至少需要上下游各有一个保守区域,且两个保守区域相距50~ 400个aa为宜,使得pcr产物在150~1200bp之间,最重要的是每一个保守区域至少有6个aa残基,因为每条引物至少18bp左右。若比对结果保守性不是很强很可能找不到6个aa的保守区域,这时可以根据物种的亲缘关系,选择亲缘相近的物种进行二次比对,若保守

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