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研究记录/实验记录的书写方法

博主推荐:PC系统的Onenote或者Mac系统下的Circus Ponies NoteBook,都是书写实验记录的最好工具。 扩展阅读:Onenote:科研好助手 1 实验记录的座标表尺: 时间! a. 以六位数字表示日期,如 090813 为 2009 年 8 月 13 日; 此串数字,一百年才会重一次。 所有记录均得载入时间,并可作为记录的名称。 b. 设计作 记录表 或 月记录表,可以鸟瞰实验的整体,并作一清楚的纲要。 2 记录方式 a. 每一记录单元独立成篇,以日期命名 (见 2.3); 记录内容分条列举,以 (1), (2), (3) … 编号标示,每一小条单独叙述一个说明或观察。 b. 记录内容以『日记体』为主,详细叙述每一细节,有结果则需表或作图;避免使用奇怪的代号,日后可能自己也忘掉代号的意义。 c. 若有胶片、照片、X-ray 底片、记录纸、转印纸、药品标等,均需小心装在透明袋,或黏贴在记录本上,加以标示及说明,并在记录中详细描述。 d. 每页均得标示页码,页码自始连贯至终,与下述记录的分类命名无关。 3 记录的分类命名法 a. 依记录

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巨噬细胞的分离和纯化

一、从小鼠、豚鼠或家兔腹腔中分离巨噬细胞 1.取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的液体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。  2.如要收集腹腔静置巨噬细胞,不注射刺激物,直接从这一步开始。放血处死动物,以减少腹腔中的红细胞。消毒腹部,沿腹中线注入3~4ml(豚鼠20~40ml,家兔50~70ml)冰中预冷的无菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。轻轻按摩腹部5分钟。  3.以下均无菌操作。剪开腹壁,用吸管吸出渗出液,再用同样容量的预冷PBS-H冲洗腹腔2~3次。合并渗出液于离心管中,4℃离心250×g 10分钟,去上清液。  4.用预冷的RPMI-1640培养液洗涤细胞3次,每次4℃离心250×g 10分钟,去上清液。用预冷的适量RPMI-1640培养液悬浮细胞,台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力。二、家兔肺泡巨噬细胞的分离和纯化 1.取2~3公斤重的家兔,耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥

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第三代PCR技术--纪念Kary Mullis获得诺奖30周年

Mullis博士在发明PCR技术后曾这样描述:“用一个单分子DNA,PCR能在一个下午内产生100百万个相似的分子。反应很容易进行,只需要一个管子、一些简单的试剂和一个用来加热的设备”(Beginning with a single molecule of the genetic material DNA, the PCR can generate 100 billion similar molecules in an afternoon. The reaction is easy to execute. It requires no more than a test tube, a few simple reagents, and a source of heat) 有关Kary Mullis博士的个人主页请登陆 30年来,PCR技术就如同阿基米德拿来撬动地球的杠杆一样撬动了生命科学研究的每一个领域。30年,PCR技术刚好发展到了第三代: 第一代PCR就是常见的定性PCR技术,它采用普通PCR仪来对靶基因进行扩增,采用琼脂糖凝胶电泳来对产物进行分析。定性PCR有几个缺点:

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单核细胞分离原理、方法及要点

基本原理:本文分离单核细胞所用方法是Percoll非连续性密度梯度离心法,主要是根据不同细胞间密度的差别进行细胞分离。此法易操作,且使用通常的实验设备即可完成。试剂与器材1)外周血单个核细胞2)1×PBS和10×PBS(无Ca2+、Mg2+,0.5mM EDTA),胎牛血清(56℃,30分钟加热灭活),HCl 1mol/L。Percoll分层液(密度=1.130g/ml,商品),4g/L台盼蓝染液(溶解在PBS液中)。3)50ml聚丙烯圆锥管,毛细吸管,移液管(1、2、10ml)。4)CO2孵箱,超净台,有旋转桶转子装置的离心机,PH计。操作步骤——所有的操作应该在无菌条件下进行(一)不同密度Percoll分层液的配制1.Percoll分层液储备液的制备:取未稀释的Percoll原液(从瓶中取)9ml+1ml 10×PBS (无Ca2+、Mg2+),用HCl 调节PH至7.42. Percoll分层液(Ⅰ)(密度=1.080g/ml)的配制:取Percoll储备液3.12 ml(前一步配制)+1.88 ml 1× PBS1(无Ca2+、Mg2+)3. Percoll分层液 (Ⅱ)(密度

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端粒酶活性检测操作必知

相关专题 近几年来端粒酶由于与长寿、癌症等的研究相关联而备受关注,而端粒酶活性检测具体方法又有那些呢?小编整理了端粒酶活性检测的原理、基本操作技巧 、结果判断、扩增片段检测等方面内容,以飨读者。 端粒酶 (Telomerase)是由RNA和蛋白质组成的一种核糖核蛋白酶。人端粒酶RNA组分(hTR)于1995年被克隆,其中含有端粒重复序列的模板(5′-CUAACCCUAAC-3′);蛋白质组分具有RNA依赖的DNA多聚酶活性,结构尚不清楚。端粒酶能以自身RNA的模板区为模板复制合成端粒序列。在胚性细胞等增殖活跃的细胞中具有端粒酶活性,而在正常成熟体细胞中端粒酶失活,同时还发现绝大多数肿瘤细胞都呈端粒酶阳性,而在癌旁组织和正常组织阳性率很低,推测端粒酶可能是一个广泛的肿瘤标志物[1]。因此近几年端粒酶在各种肿瘤中的研究日益深入,同时促进了检测方法的改进与完善。本文对其检测方法综述如下。 1 基本原理 端粒酶在体外可以以其自身RNA的模板区为模板,在适宜的寡核苷酸链的末端添加6个碱基的重复序列,用聚丙烯酰胺(PAGE)凝胶电泳可显示6个碱

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蛋白marker是什么?蛋白marker的分类

在Western Blot过程中,分子量Marker就像个螺丝钉一样没虽然是个小细节,然而就是这样一个小细节对实验结果有着不可忽视的作用。这个 Western Blot参照家族的一员的作用主要是用来指示蛋白条带所对应的分子量大小,只有标准量精确无误了,实验结果才有说服力,除此之外,蛋白标准还有表示转移成功或者蛋白在凝胶上的电泳程度等等的作用,所以选择正确的蛋白Marker也是western blot实验成功的必要条件之一。 总体来说,蛋白分子量标准可以分成未染蛋白分子量标准、预染蛋白分子量标准二个级别。以下是关于蛋白分子量标准的小叙: 一. 未染色(pre mixed)蛋白分子量标准 未染色的蛋白分子量标准是最简单,也是最准确的一种。由于没有附带染料分子或者是标记分子,所示大小正好是蛋白原本的大小,是精确判断蛋白大小必须的。现在的Marker多数都选用预混和的Marker,方便不同大小的蛋白比较。预混的Marker通常有几条带加倍浓度作为指示,因为混合的条带越多,越不好记,谁

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原生质体的培养

原生质体(Protoplast):指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞。一、原生质体的应用 由于没有细胞壁,原生质体为作物遗传改良和植物学研究提供了极为有利的试验材料。原生质体可以用于下面几种研究。1. 用作细胞杂交服务于作物改良2. 用作遗传转化的对象3. 研究细胞壁的发生过程4. 筛选突变体5. 膜的结构、运输、激素接受位点等的研究6. 用于分离细胞器和大分子7. 种质资源保存 二、原生质体分离、纯化原生质体分离的最基本原则是保证原生质体不受伤害及不损害它的再生能力。1. 分离方法(1)机械法分离:缺点:产量极低;应用的材料受限制;操作极费力(2)酶法分离:Cocking最早开展这方面研究,克服了机械法分离的缺陷,可分为直接法和顺序法两种。酶法可在短时间内获得大量原生质体,缺点是:不纯的酶制剂所含杂质对原生质体可能有不同程度的毒害作用。2. 影响原生质体分离的因素(酶法)从理论上讲,只要用适当的酶处理,就能从任何活组织中分离得到原生质体。但是对于原生质体培养来说,要得到活性高、能进行分裂、形成愈伤组织、最后再生完整植株的原生质体则受许多因素的影响。3. 原生质体

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siRNA的设计方法

关于设计siRNA以及siRNA设计对siRNA功能的影响,至今还没有可靠的规律。虽然我们可以通过对mRNA实验分析准确的找到一段基因的全部siRNA最佳作用位置,但这个过程十分耗时且昂贵,不推荐常规实验使用。一种做法是每个目标序列设计3-4对siRNAs,实验选择较有效的siRNA。方法一、根据Tuschl的实验的设计要点目前,siRNA设计大都根据Tuschl的实验,要点如下:1.目标基因开放阅读框起始密码下游75至100碱基位置开始,寻找“AA”二连序列后的19个碱基序列。(用非“AA”的“XY”序列后的19个碱基序列同样可以得到很好效果的siRNA)。 设计siRNA时不要针对5' 和3' 端的非编码区。2.分析获得的序列,选择GC比在40-55%之间的靶基因序列作为优选。3.将潜在的序列和相应的基因组数据库(人,或者小鼠,大鼠等等)进行比较,排除和其他编码序列/EST同源的序列。例如使用BLAST等。4.如果您选择shRNA,有报道显示9个寡核苷酸的环是最有效的。方法二:1. 从转录本(mRNA)的AUG起始密码开始,寻找“AA”二连序列,并记下其3' 端的19个碱基序列,

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临床试验设计

临床试验设计   实习目的   1.了解实验流行病学的概念   2.学习临床试验设计的方法和结论判断    时间:2学时   一、糖悄病治疗效果观察   (一)实习目的   1.评价糖尿病的不同治疗方法对预防血管性并发症的效果。   2.研究无胰岛素治疗的成年糖尿病患者中血管性疾病的自然史。   (二)实验方法   本实验由12个临床医院进行协作研究,观察对象均为大学生,治疗计划、选择的病人为成年发作型糖尿病患者,这种类型患者占总观察数的90%以上。自1982年开始共治疗1027例,所有观察对象均按随机化原则分配至以下四个治疗组:   1.不同剂量的胰岛素组(IVAR)为维持患者正常血糖水平,根据血糖情况,给予不同剂量的胰岛素。   2.标准胰岛素组(ISTD)根据身体外型每天给予10~16u胰岛素。   3.氨磺酰组(TOLB)每日1.5g口服。   4.乳糖安慰剂组(PLBO)外形与剂量均与氨磺酰相同。   所有四个治疗组均食用同样的糖尿病饮食。

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基于细胞表面标记的免疫细胞分离方法

1、补体细胞毒分离法 采用特异性抗细胞表面标记的抗体,结合具有该表面标记的细胞,在补体的作用下,使具有该表面标记的细胞发生溶解,将其从混合细胞群体中去除。 2、免疫磁珠分离法 磁性微珠是20世纪80年代初以高分子材料和金属离子(如Fe3 O4 )为原料聚合而成的一种以金属离子为核心、外层均匀地包裹高分子聚合体的固相微粒,即磁性微珠。在液相中,受外加磁场的吸引作用,磁性微珠可快速沉降。以磁性微珠为载体,包被上针对某种细胞表面抗原的特异性抗体即可制成免疫磁性微珠。 免疫磁性微珠主要用于细胞的分离和纯化,其基本原理及步骤是:首先将抗特异细胞表面抗原的抗体致敏到磁珠上,待它与混合体系中的细胞反应后,利用磁力的作用,使与致敏结合的细胞与其它物质分离,达到纯化、分离的目的。通常有二种分离方式:阳性分离和阴性分离。阳性分离是直接从细胞混合液中分离出靶细胞,阴性分离是利用磁珠去除无关细胞,使靶细胞得以分离。 免疫磁珠分离细胞方法简便,快速,无需特殊的设备,且分离纯度高,产率大,近年来已被广泛应用于人类各种细胞的分离,如T、B淋巴细胞、内皮细胞、造血祖细胞、单核/巨噬细胞及胰岛细胞、多种肿

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岛津UV-265型紫外可见分光光度计操作规程

1.操作方法1.1测定前的准备工作1.1.1将电源开关至ON,接通电源。1.1.2电源接通时,分光光度计进行18项自动检查和初始设定,如果一切正常,约4分钟后,存储在参数文件NO.1的参数自动调出设定。在初始化检查时,如仪器存在故障或检查过程中有不正常的步骤,则CRT显示出与之相应的错误显示,此时应纠正错误操作或排除故障后,方能进行正常测定。1.1.3准备好打印机的热敏记录纸。1.2单波长数据测定1.2.1设置参数,按PARAMETER,CRT显示参数设定条件表,根据实验要求,设定或改变表中的基本参数。例如,测定量程方式希望以吸收度显示时,可先按0,ENTER,则第一行光标闪烁,提出3个可供选择项和仪器的现在状态,即(T%=l ABS=2 E=3),如果仪器原设定为T%,现欲改变为ABS,可按2,ENTER。其它参数如狭缝等亦均按实验要求设定。1.2.2测定波长设定,按GOTOλ,输入所需波长,ENTER,即能将分光器的波长快速设定到所希望的数值。1.2.3将样品池和参比池均盛以溶剂或空白溶液分别放在样品和参比池架中,关闭样品室盖。1.2.4按ABS.0/100%T,自动校零。1.2.

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如何获得稳定的细胞株

tydyhan:我一直做细菌这块,对病毒操作不是很懂,请教大家:建立表达某基因的重组逆转录病毒载体的B16细胞系含某基因的重组逆转录病毒载体已获得,需转染PA 317包装细胞,通过G418筛选获得表达某基因的重组逆转录病毒。Polybrene进行转染B16细胞,筛选阳性转化克隆,获得稳定表达的B16细胞株。这里怎么具体进行操作??丁香园网友adychen认为:1、首先最好选择的是带EGFP逆转录病毒载体,方便以后的转染率和感染率的观察.2、重组载体;3、得出载体抗性基因的抗生素最佳细胞筛浓度,比如说,你用的是PLEGF载体,抗性为G418,按不同的浓度检测如:200μg/ml、400μg/ml----1200ug/ml共6个梯度,细胞量最好的1000Cell/ml,以10-14天最低浓度至全部细胞死亡为最佳浓度,我用的是PT67最佳浓度为800ug/ml4、转染,观察24-48h的转染情况,如达40%以上,可加入G418筛选,3-5天换一次带药的培养液,一般在15天即可,具体还看转入不同基因可以有差异,得到较高带EGFP的细胞。5、扩大培养,收集上清。6、收集到的上清可以做密度梯度离心

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alamarBlue的用法

贴壁细胞和非贴壁细胞都适用。所有操作在无菌条件下进行。避免污染细胞,因为微生物污染也会还原alamarBlueTM ,培养基中应添加抗生素如青霉素G(1U/ml)、两性霉素B(amphotericin B,0.0025ug/ml)。 氧化还原指示剂是pH敏感的,推荐使用磷酸缓冲液。10%胎牛血清对比色法检测无影响,但是会淬灭部分荧光;因此,用荧光法检测时对照溶液中需添加10%BSA。酚红对检测也有一定影响,结果会上调0.03%。一般来说,应使用非还原性的培养基,如RPMI1640、Hank’s-Eagle或 Dulbecco’s-Eagle。 在特殊系统中使用时,细胞密度、孵育时间、培养基成分及使用浓度等条件需要先优化. 收集需检测的细胞,以优化的密度铺于加入10%(v/v)alamarBlueTM 的新鲜培养基上,

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班氏试剂的配制与鉴定结果

班氏试剂的配制与鉴定结果班氏试剂的配置 取无水硫酸铜1.47g,溶于100ml热水中,冷却后稀释到150ml,取柠檬酸钠173g,无水碳酸钠100g和600ml水共热,溶后冷却并加水至850ml,再将冷却的150ml硫酸铜倾入即可。 鉴定糖尿的结果:      沸水浴加热后的现象         葡萄糖含量(g/dl) 透明蓝色                  无 加热时无变化,仅冷却后有少量沉淀    微量,约0.5以下  加热1分钟后即出现少量黄绿色沉淀    少量,约0.5-1 加热10-15秒后即出现土黄色沉淀     中量,约1-2 加热时很快出现多量砖红色沉淀      大量,约2以上 班氏试剂与斐林试剂比较: 首先,两者的配方不一样。斐林试剂主要由质量浓度为0.1g・mL-1的NaOH溶液和质量浓度为0.05g・mL-1的CuSO4溶液配制而成。其中0.1g・mL-1的NaOH溶液称为斐林试剂甲,0.05g・mL-1的CuSO4溶液称为斐林试剂乙。而班氏试剂的配方为:①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50mL加热的水中加

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树突状细胞及其培养基

树突状细胞培养操作步骤 准备补充剂 将补充剂混合物在 15~25℃ 解冻。在无菌条件下用移液枪小心地将补充剂混合物混匀。然后,把补充剂混合物全部加到基础培养基中。盖上瓶子,轻轻混匀直到形成均一的混合物。DC生成培养基所附带的相应的细胞因子组合包含有成分A和B,它们都是以100X 的原液状态运输的。 注意:此时不要将化合物B加入培养基中。 DC基础培养基不带细胞因子,因此使用时必须另外自行添加。 新鲜分离的单核 DC 细胞的传代 对于新鲜分离自外周血单核细胞或者单个核细胞的单核树突状细胞的传代 ,P romoCell 建议使用树突状细胞生成培养基 DXF(C-28052)。详情如下: 1、使细胞附着(第 0 天) 新分离的细胞接种到适量的 PromoCell DC 生成培养基DXF中(不含细胞因子)。单核细胞的接种密度为200-300万/cm2,纯化的单核细胞则为50万/cm2。在37℃和5%的CO2 的培养箱中培养1小时。 2、清洗附着的细胞(第 0 天) 用力晃组织培养皿使未附着的细胞脱落并吸去。用温热的 PromoCell DC 生成培养

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二肽的概念与二肽合成的个人心得体会

相关专题 一个氨基酸羧基与另一个氨基酸的氨基失水形成的化合物成为二肽,二肽是最简单的多肽。本文总结了二肽的基础知识以及二肽合成的经验。 二肽的基础知识 二肽的概念 二肽(dipeptide )是二胜肽的最简单的肽,由一分子 氨基酸的α-羧基和另一分子氨基酸的α-氨基脱水缩合形成的酰胺键(即-CO-NH-)组成的蛋白质片段或物质。其分子中仅包含一个肽键。它们是一大类物质的统称。 二肽举例 如由一个含有游离的α-氨基的甘氨酸残基和一个含有游离的α-羧基的丙氨酸残基组成的二肽叫甘氨酰丙氨酸。 制备与保存 蛋白质可由酸、碱或酶水解,在水解过程中蛋白质逐步降解成为蛋白胨、多肽、三肽和二肽等越来越小的蛋白质碎片,直到最后成为氨基酸混合物。 在体内二肽通常能被二肽酶所水解而成为两个游离氨基酸。在体内肠黏膜细胞上也存在着吸收二肽或三肽的耗能主动运转体系,故有二肽吸收入细胞先于游离氨基酸之说。 二肽是一种化合物,是天然氨基酸即阿尔法氨基酸(氨基连在连有羧基的碳上)中的氨基于羧基脱水缩合而成的

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荧光原位杂交技术

荧光原位杂交技术 荧光原位杂交技术(florescence in situ hybridization,FISH)是一种利用荧光信号对原位杂交样本进行检测的技术。它将荧光信号的高灵敏度、安全性及直观性和原位杂交的高特异性结合起来,通过荧光标记的核酸探针与待测样本核酸进行原位杂交。在荧光显微镜下对荧光信号进行辨别和计数,从而对染色体或基因异常的细胞和组织样本进行检测和诊断,为各种基因相关疾病的分型、预前和预后提供准确的依据。自20世纪80年代末,Pinkel和Heiles将FISH技术引入染色体检测领域以来,FISH技术在临床诊断及科研工作中得到广泛运用,并显示出比传统技术的显著优势性。1986年.Dilla等首次用荧光素直接标记DNA探针检测人特异性染色体。接着Pinkel等利用生物素标记DNA探针,建立了间接荧光原位杂交技术,这一技术放大了杂交信号。提高了FISH的敏感性。此后,地高辛和二硝基苯酚等标记物以及各种不同颜色荧光素在FISH技术中被广泛利用,不断完善了该技术的信号检测系统。PCR技术与FISH的巧妙结合,不仅提高了制备探针的能力,也提高了该方法的敏感性,可用于鉴定

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转录因子研究——为论文加“分”

什么是转录因子? ● 转录因子(Transcription factor,TF)是一类能与特异性DNA序列结合并调节基因转录的调控蛋白。 ● 转录因子通常是细胞内信号通路的核心蛋白,是将外界刺激转化为基因表达变化的关键调控者。为什么要研究转录因子? ● 人体的35000多个基因在不同的组织、不同的时间具有表达差异性,转录因子的调控起到重要的作用。 ● 2012年的诺贝尔生理学或医学奖得主山中伸弥,在小鼠成纤维细胞中表达Oct3/4、Sox2、c-Myc以及Klf4四种转录因子,将成纤维细胞逆转形成多能干细胞(iPS)。 ● 转录因子与多种人类重大疾病相关,比如p53、myc、ER、Id与癌症相关;MEF2、HIF1与心脏疾病相关;NFκB与炎症相关;PPAR与肥胖相关等等。 怎样用转录因子研究为论文加“分”? 加“分”Step 1 ● 信号通路以及疾病相关的研究比较容易找到转录因子研究的突破口,已有在研项目的研究人员根据自身的研究背景,找准转录因子研究突破口。 ● 对于还没有具体研究思路的科研人员来说,转录因子研究相对来说容易出结果、

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引物设计重点考虑因素、设计技巧

一、GC% GC含量 对于PCR反应来说GC含量在40%—60%,一般50%左右比较合适;而对于测序引物和杂交探针来说GC含量至少应为50%。产物中GC含量最好大于引物中的GC含量。二、Degeneracy 多义性 当设计多义引物时应尽量减少引物多义性,这样会带来更好的特异性,应尽量避免3‘末端的多义性,因为这里即使一个碱基的错配都能阻止引物延伸。三、3’ End Stability 3’末端稳定性 引物稳定性影响它的错配效率,一条理想的引物应该有一个稳定性较强的5’末端和相对稳定性较弱的3 末端。如果引物3‘稳定性强,有可能在即使5 末端不配对的情况下造成错配,形成非特异性扩增条带(secondary bands) 。而3‘末端稳定性低的引物较好的原因是在引物发生错配时,由于3’末端不太稳定引物结合不稳定而难以延伸。四、GC Clamp GC钳 引物与目的位点的有效结合需要有稳定的5 末端。这一段有较强稳定性的5 末端称为GC钳。它保证引物与模板的稳定结合。选择有合适稳定性的引物能在确保不产生非特异性条带的前提下尽量降低退火温度。五、Secondary Structure

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免疫胶体金稀释液的五原则

制备好免疫胶体金后,还需要将其稀释到一定浓度,并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说,特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的,胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布,通常配方为1%Tween20+适量PVA。介质处理完成后,免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下:1、合适的离子种类和强度免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子,应用时还要面对千差万别的样品,原则上需要稀释在合适PH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有Tris和PB,也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时,有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制,例如钙调蛋白可能与Ca2+离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用,教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。2、大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架这个其实是冻干工艺的理论基础,适用于胶体金干燥工艺,对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个热力学吸热过程,实验表明免疫胶

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