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几种高血压动物模型的建立方法

高血压模型的建立可以用儿茶酚胺类或其它体液加压物质注射来形成,但是这类模型造成的高血压时间短,不适于长时间的研究。因此如果要进行长时间深入的研究则应复制慢性实验性高血压模型。除遗传性高血压动物模型较能模拟人类高血压病的自然过程外,其它各类慢性实验性高血压动物模型(如神经原型、肾型、内分泌型和饮食型等),大多要经过一定的手术、药物或其他附加因素处理,与人类高血压病的临床不完全一致,但是对于筛选有效降压药仍然是十分重要的实验手段。实验中常用的动物为大白鼠和狗,猴来源不易,家兔血压升高不够显著,故后两种动物较少应用,下面就是几种常用的高血压动物模型建立方法.1.听源性高血压采用大白鼠与家鼠杂交生的大灰鼠(比纯种大白鼠较易诱发成功),4月龄,放入隔音室内笼养,噪音刺激可由电铃或扬声器发出,发音器是一个音频振荡器,连接一个20W高音扬声器。噪音刺激应经常在700~1000周/秒中变换,噪音刺激每30秒一次,亦可每隔1分钟刺激30秒。可随时变换毋须恒定,但噪音干扰须日夜不止,连续数月。噪音刺激连续3个月后血压普遍升高,大灰鼠正常平均收缩压为113±8mmHg,此时可升高到130~140mmHg,有

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消毒与灭菌概述

消毒(disinfection)与灭菌(sterilization)两者的意义有所不同。消毒一般是指消灭病原菌和有害微生物的营养体而言,灭菌则是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。消毒与灭菌的方法很多,一般可分为加热、过滤、照射和使用化学药品等方法。 一、加热法 又分干热灭菌和湿热灭菌两类。 1. 干热灭菌 有火焰烧灼灭菌和热空气灭菌两种。火焰烧灼灭菌适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等,无菌操作时的试管口和瓶口也在火焰上作短暂烧灼灭菌。通常所说的干热灭菌是在电烘箱内灭菌,此法适用于玻璃器皿如吸管和培养皿等的灭菌,在热空气160-170℃下保温2小时进行灭菌。 2. 湿热灭菌 (1)高压蒸汽灭菌法 此法是将物品放在高压蒸汽灭菌锅内1.05 kg/cm2(15磅/英寸2),121.3℃保持15-30分钟进行灭菌。时间的长短可根据灭菌物品种类和数量的不同而有所变化,以达到彻底灭菌为准。这种灭菌适用于培养基、工作服、橡皮物品等的灭菌。 (2)间歇灭菌法 有少数培养基例如明胶培养基、牛乳培养基、含糖培养基等用干热灭菌和高压蒸汽灭菌均会受到破坏,则必

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鼠科常用实验品种介绍——大鼠

大鼠(RAT),学名Rattus norvegicus,在生物分类学上属脊椎动物门、哺乳动物纲、啮齿目、鼠科、家鼠属、褐家鼠种。一、生活习性生长发育:新生大鼠体重约5~6克,45天体重可达180克以上,此时可供试验用。成年雄性大鼠体重可达300~800克,雌性可达200~400克。活动规律:大书喜啃咬,白天常挤在一起休息,夜间活动,晚上活动量大,采食量良多,食性广泛,喜肉食。对光照、噪音敏感。繁殖特性:大鼠2月龄性成熟,性周期4~5天,妊娠期为19~21天,哺乳期为21天,每胎产仔平均8支。可根据引导涂片观察性周期中引导上皮变化,判断性周期中各个时期中卵巢、子宫与垂体激素变化的状态。二、常用品系SD大鼠:生长快,繁育性能好,大多用于安全性试验及营养与生长发育有关的研究。该品系对性激素敏感,对呼吸道疾病有较强的抵抗力。广泛用于药理、毒理、药效及GLP实验。一般生物学特性繁殖性能:产仔率:92~95% ;平均窝产仔数:9.96~12.07只;胎间隔:28~52天;离乳存活率:95~98%。Wistar大鼠:Wistar大鼠由美国费城Wistar研究所育成。常用的既有近交系,也有远交群。其被

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神经元自身抗体及相关疾病

概要 中枢神经系统和外周神经系统的很多疾病与抗神经元自身抗体相关,相应的靶抗原包括神经元胞内神经肿瘤抗原和神经元表面抗原。临床上,检测血清或者脑脊液中的这类自身抗体对于疾病诊断具有重要意义。 抗神经肿瘤抗原的自身抗体与不同恶性肿瘤存在一定的对应关系,其实验室检验结果可以为临床医生探查肿瘤提供指导和依据。一系列针对神经元表面抗原的自身抗体阳性发生率高于已知的抗神经元胞内抗原的自身抗体。据国外临床经验显示,全面检测抗神经元自身抗体谱可以有效提高血清检测命中率,比检测单一指标提高一倍多,往往可以获得一些附加的更特异性的重要线索,甚至能够挽救很多患者的生命。 副瘤性综合征 副瘤性综合征(PNS)是神经系统症状伴随恶性肿瘤,它是一种在癌症未转移或未浸润情况下的远隔效应。自身抗体的检测可以帮助诊断PNS,并提供潜在肿瘤的第一个证据。几乎每种PNS疾病都可发现一个以上的神经元自身抗体;反之,每个抗体也可在不同PNS疾病中体现。有数据显示,大约30%的PNS患者可以检测到多个神经元自身抗体。例如,在副瘤性边缘性脑炎中常见抗Hu、Ma2、CV2以及Amphiphysi

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链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法

链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法 ABC法虽然是一种很好的方法,但是在实际应用过程中.确实也存在许多问题,如亲和 素中含有约?%的糖类,它可与组织中含糖基的物质起反应,造成背景着色。亲和素的等电 点约为10左右。可带较多的负电荷,纤维组织可带较多的正电荷,这两种电荷可互相吸引,造成背景着色。亲和素中有4个结合点,其中一半与连接抗体结合,另一半与复合物结合,如此可降低其敏感性。 为解决和克服存在的问题,20世纪90年代初提出了用链霉亲和素(streptavidin)替代ABC法中的亲和素―生物素复合物,形成链霉菌抗生物素蛋白―过氧化物酶法(streptavidin-peroxidasemethod。SP法)。链霉亲和素是从链霉菌中分离出的一种蛋白,含有四个亚基,每个亚基均具有与生物素亲和力极高的结合点。 链霉亲和素的四个亚基可以全部和二抗上的生物素结合,故又称链霉菌抗生物素蛋白,它对组织穿透性强,反应速度快。链霉亲和素的等电点为5.5~6.7,接近中性,所带的负电荷少,不容易与组织中的正电荷发生相互吸引,因而可降低背景着色。此外,链霉亲和素不含糖基,不存在与组

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免疫组织化学图像处理预热篇——图像分析原理及过程 懂原理更精通

图像分析基本原理及分析过程概述在生物及医学研究中,对图像的判读与分析特别是对显微镜下微观图像的观察研究从来都是重要的研究手段。随着技术的进步,分析图像的方法也从眼观尺量进入到了使用计算机软件进行定量分析的阶段。计算机软件的发展速度呈加速前进,采集图像的设备也不断更新,这使得我们能有更多的手段来分析测量复杂的生物图像。现在我们可以使用CCD数码相机来采集图像。使用功能比较强大的图像分析软件来进行图像分析测量。相比之下,在不太久远的十来年前使用的图像分析仪及单色的图像采集摄像机已经过时了。而图像分析的手段也比以前丰富。简单地引用以前的分析方法未必就是最佳的方法,在许多情况下,需要我们依据软件及相机的情况设计与研究目标相适应的分析方法。分析测量图像绝不仅仅是一个软件使用的问题,而是从实验设计开始,就要综合考虑研究目标、样品制作方法、拍摄方式、选择视野等各方面因素,最后才是通过软件实现最有效的图像分析测量。一个完整的图像分析过程应该包括:1.明确需要测量分析的对象。2.使用适当的方法拍摄下这个对象包括进行适当的染色及取样,采集到突出显示的测量对象的照片。3.分析照片上的图像元素,确定能反映测量

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一种优化的PCR 方法——降落PCR 扩增目的基因

多聚酶链式反应( PCR) 是在模板DNA、引物和4 种脱氧核糖核苷酸存在的条件下依赖DNA 聚合酶的酶促反应[1 ] 。在实验室日常工作中经常出现两种情况:一种是因未找到最佳扩增条件导致产生大量非特异性产物,另一种情况是未扩增出任何产物。影响PCR 的因素很多,除了受 PCR 仪器性能的制约外,也取决于反应体系和反应条件的设置,其中Mg2+ 浓度、缓冲液pH 值、循环条件等因素尤为重要,而循环条件中的退火温度又是至关重要的因素。降落PCR 是一种设计多循环以使相连循环的退火温度越来越低[2 ] ,从而达到最佳扩增条件的方法。我们在构建人 CD137 - hIgG1Fc - pCDNA3 融合蛋白真核表达载体以及在检测HBV DNA 多聚酶基因突变的过程中运用降落PCR 进行了扩增目的基因的尝试。1  材料和方法1.1  质粒含有人CD137 全长cDNA 序列的pCDNA3 质粒(CD137 - pCDNA3) ,由Herbert Schwarz 教授惠赠; 含hIgG1 FccDNA的PGEM - T质粒由第二军医大学曹雪涛教授惠赠; HBV DNA ,从6 位慢性HBV 感染者血

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什么情况下细胞必须进行流式分选

流式细胞分选技术原理:利用流式细胞分选仪,以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒,测量其产生的散射光和发射荧光的强度,从而对细胞(或微粒)的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术,它可根据发射光的荧光强度和波长将发光颗粒亚群分开并可实现单克隆分选,能复杂样本中的细胞进行鉴定、分类、定量和分离,单次可同时对其中一种到四种特定细胞进行超高速分选纯化、高通量单克隆分选或细胞芯片制备。分选后的细胞能直接用于培养、移植、核酸提取、单细胞PCR扩增或原位杂交等,可进一步进行细胞基因、蛋白、功能水平的研究和不同细胞之间的差异化研究。实验中样本细胞丢弃的比例低于5%,保证样本中目标细胞的高回收率。 流式分选应用的领域 1、干细胞组织研究 2、疾病细胞如炎症细胞、肿瘤细胞等的发生、发展和转归研究 3、移植和细胞治疗研究等 比如在肿瘤医学研究中,流式分选急性髓系白血病,可以检测(AML)中某些细胞呈现侧群细胞的特性.且能逃离相关药物的控制,从而可能导致该疾病的复发。在再生医学研究中,流式分选人脂肪干细胞,其有成骨活

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Discovery Studio在化合物反向找靶领域的解决方案

药物潜在靶标的识别对于早期药物分子的研发、安全性评价和老药新用等领域都有着非常重要的意义,但是受制于通量、精度和费用的影响,实验手段的应用难以广泛开展。作为一种快速而低成本的手段,计算机辅助的靶标识别算法的开发正在受到越来越多的重视,发展快速、精确的靶标识别预测方法对于靶向性药物开发、药物-靶标相互作用网络图谱的构建和小分子调控网络的分析都具有十分重要的意义。目前,通过计算机辅助进行反向找靶主要有三种方法:反向分子对接(Target Fishing)、药效团模型搜索(Compound Profiling)及基于配体分子相似性分析(Lignad Similarity Search)[1]。创腾科技,作为国内资深的生命科学信息提供商,整合业界颇受好评的分子模拟与分子设计平台Discovery Studio(DS)、业界独一无二的计算流程编辑平台Pipeline Pilot(PP),为国内广大生命科学及医药研究者提供化合物反向找靶的应用解决方案。 药效团模型搜索(Compound Profiling):Discovery Studio为研究者提供基于受体或基于受体-配体相互作用构建代表受

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PCR-ELISA端粒酶检测法

端粒是真核生物染色体末端的特异DNA-蛋白结构,端粒DNA是一系列重复的富含G的DNA序列,这一序列在生物进化中有高度的保守性(人重复序列为TTAGGG)。已确认端粒在保护基因组DNA不被降解、防止染色体有害的结合(如染色体末端融合、重排、染色体移位和染色体缺失)中起重要作用。由于DNA聚合酶不能复制线性DNA的最末端,多数正常体细胞的端粒末端每经一个复制循环就进行性缩短。这一现象在体内和体外都得到证实,并且可能与高级真核生物的正常体细胞有限的繁殖能力有关。这一活性可能在与细胞衰老有关的情况中起作用。与体细胞相对照,生殖细胞是永生性的,它需要为将来器官形成保存全部的遗传信息。因此它必须对抗端粒缩短。这一工作通过在基因组染色体的末端添加新的端粒重复序列而完成。端粒酶是一种核糖核蛋白,它们用自身的RNA成份的互补序列作模板,催化TTAGGG重复序列加到染色体末端。在大多数永生性细胞株和肿瘤细胞株中也可见端粒酶活性的表达。端粒酶反应超越了细胞的增殖限制,这可能是恶性肿瘤发生的一个先决条件。传统的端粒酶研究方法是以探针延伸为基础测定端粒酶活性。由于需要大量的样品材料,且检验灵敏度受局限,这一方

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碱裂解法提取大量质粒

该法是R.Treisman尚未发表的方法,同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效,并可与随后的纯化步骤,如聚乙二醇沉淀或氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心等,一并联合使用。注:括号中给出的体积可适用于未经氯霉素处理的培养。 试验准备: 1、 溶液I:50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tris.Cl(pH8.0) 10mmol/L EDTA(pH8.0)溶液I可成批配制,在10 lbf/in2(6.895x104Pa)高压下蒸气灭菌15min,贮存于4℃。 2、 溶液Ⅱ: 0.2mol/L NaOH(临用前用10mol/L贮存液现用现稀释)1%SDS 盖紧瓶盖,缓缓颠倒离心瓶数次,以充分混匀内容物。于室温放置5-10分钟。当溶液的pH值低于8.0时,溶菌酶不能有效工作。防止NaOH接触空气中的CO2所以要现用现配。 3、 溶液Ⅲ:5mol/L乙酸钾 60ml 冰乙酸 11.5ml 水 28.5ml。所配成的溶液对钾是3mol/L,对乙酸根是5mol/

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双向电泳的样品的制备原则及步骤

样品制备原则 样品制备是双向电泳中最关键的一步,将直接影响 2-DE 结果好坏。目前并 没有一个通用的样品制备方法,尽管处理方法多种多样,但都遵循几个基本的原则:1. 尽可能的提高样品蛋白的溶解度,抽提最大量的总蛋白,减少蛋白质的 损失;2. 减少对蛋白质的人为修饰;3. 破坏蛋白质与其他生物大分子的相互作 用,并使蛋白质处于完全变性状态。 根据这一原则,样品制备需要四种主要的试剂:离液剂(chaotropes),主要包括尿素(Urea)和硫脲(thiourea);表面活性剂(sufactants),也称去垢剂, 如 CHAPS 与 Zwittergent 系列等双性离子去垢剂;还原剂(reducing agents),最常用的是二硫苏糖醇(DTT)和磷酸三丁酯(TBP)等。当然,也可以选择性 的加入 Tris-base,蛋白酶抑制剂以及核酸酶。 样品的来源不同,其裂解的缓冲液也各不相同。通过不同试剂的合理组合, 以达到对样品蛋白的最大抽提。在对样品蛋白质提取的过程中,必须考虑到去除 影响蛋白质可溶性和 2DE 重复性的物质,比如核酸、脂、多糖等大分子以及盐 类小分子。大分子

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踝关节融合术

踝关节融合术 踝关节融合方法很多,显露途径也有不同,常用的有前侧显露与外侧显露。外侧显露比较充分,病灶清除彻底,且较安全;前侧显露较差,病灶清除不易彻底,仅用于融合。本文介绍前者。 ⑴切口及浅层神经、韧带 ⑵找出胫前血管神经束 ⑶踝部前外侧血管及神经 ⑷显露胫骨下端、踝关节、距骨及舟骨 图1 右踝关节前侧显露途径 ⑴踝外侧切口 ⑵切断并下翻腓骨下段,显露踝关节 ⑶复位腓骨,螺丝钉固定 图2 右踝关节外侧显露途径 ⑴显露并脱位踝关节,清除病灶后切除关节软骨面(插图示皮肤切口) ⑵将胫骨下端外面凿槽,再将腓骨胫侧面凿毛 ⑶将腓骨下端嵌入胫骨槽内,用螺钉固定 [适应证] 1.由于关节外伤、炎症、退行性变等原因发生对应关节面不相称,引起严重的关节功能障碍,或顽固的关节疼痛,影响工作和生活,经非手术治疗无效,又不适合用其他手术来保留关节动度者,宜施行关节融合术。例如下肢关节内骨折引起的严重损伤性关节炎,化脓性关节炎后周围软组织有大量瘢痕,不宜行关节成形术等手术者。 2.成人全关节结核,关节面破坏,估计不能保留关节功能,可在病灶清除的同时施

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神经胶质细胞培养

神经细胞(神经元)不易培养,只有在适宜情况下,如接种在胶原底层上,或加入神经生长因子和胶质细胞因子时,可出现一定程度的分化,长出突起等现象,但很难使之增殖。而神经胶质细胞是神经组织中比较容易培养的成分。人、鼠等脑组织即可用于神经胶质细胞培养,不仅能获得生长的胶质细胞,也可形成能传代的二倍体细胞系。一般来说,胶质细胞在培养中生长不稳定,不易自发转化,但对外界因素仍保持很好的敏感性,可用劳氏肉瘤病毒(Rous sarcoma virus,ROUS)和SV4等能其诱发转化。培养方法如下:1、从手术室无菌取脑髓灰质或白质后,仔细剥除脑膜、血管和纤维成分,置Hanks液中漂洗一至二次。2、置于30—50倍体积的Hanks液中,此时脑组织比较柔软,反复吹打即制成细胞悬液。3、把悬液注入离心管室温中直立5—10分钟后,细胞或细胞团快自然下沉,脂肪等杂物易漂浮在上层液相中,可吸除上层液体,反复二至三次,即可排除脂肪成分和其它碎块并获较多细胞。4、在沉降物中加入适量培养液,通过纱网成纱布过滤,计数并调整细胞密度。

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甲醛变性电泳

一、实验原理 提取样品的总RNA后,一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构,因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳,得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。将RNA通过凝胶电泳使之在凝胶中分离出来,通过加入标准核酸分子(markers)对其进行鉴定,并用于转膜、杂交等。 二、实验试剂 1. DEPC 水的处理:用量筒量取去离子水2 L,在通风橱中,加入2 ml DEPC到2L去离子水中,终浓度为0.1%的DEPC。迅速盖上盖子,混匀,然后放在摇床中中速摇荡至少4 h,再高压灭菌。灭菌时将瓶盖松开,15磅灭菌20 min。 2. 10×MOPS缓冲液(即10×FA缓冲液): 500 ml 0.2 mol/L MOPS(3-〔N-吗啉〕丙磺酸) 80 mmol/L NaAc 10 mmol/L EDTANa2 先用400 ml DEPC水溶解20.6g MOPS和4.1 gNaAc后,加入10 ml 0.5 mol/L EDTA,定容500 ml。用0.22 mm滤器过滤除菌,装入棕色瓶中,室温避光保存。 或0.2 mol/L MOPS

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等电聚焦

等电点聚焦就是在电泳槽中放入载体两性电解质,当通以直流电时,两性电解质即形成一个由阳极到阴极逐步增加的pH梯度,当蛋白质放进此体系时,不同的蛋白质即移动到或聚焦于与其等电点相当的pH位置上,电聚焦的优点是:有很高的分辨率,可将等电点相差0.01-0.02pH单位的蛋白质分开;一般电泳由于受扩散作用的影响,随着时间和所走的距离加长,区带越走越宽,而电聚焦能抵消扩散作用,使区带越走越窄;由于这种电聚焦作用,不管样品加在什么部位,都可聚焦到其电点,很稀的样品也可进行分离;可直接测出蛋白质的等电点,其精确度可达0.01pH单位。电聚焦技术的缺点是:一是电聚焦要求用无盐溶液,而在无盐溶液中蛋白质可能发生沉淀,二是样品中的成分必需停留于其等电点,不适用在等电点不溶或发生变性的蛋白质。电聚焦技术要求有稳定的pH梯度,要求极防止对流和防止已分离区带再混合的措施,其办法有三:密度梯度,聚丙烯酰胺凝胶和区带对流聚焦,以第一种方法为常用。一、基本原理(1)人工pH梯度:在分离蛋白质时常用一个直立的性,以蔗糖密度梯度防止对流。当两个不同pH的缓冲液互相扩散时,在其混合区间即形成pH梯度,称为“人工pH梯度”。

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荧光定量PCR技术及其应用

荧光定量PCR(也称TaqMan PCR,以下简称FQ-PCR)是美国PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出来的一种新的核酸定量技术,该技术是在常规PCR基础上加入荧光标记探针来实现其定量功能的,与变通PCR相比,FQ-PCR具有许多优点。本文拟就该技术的特点、原理和方法以及应用作一简要叙述。一、特点FQ-PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性,而且由于荧光探针的应用,可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果,所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高精确性,克服了常规PCR的许多缺点。如一般PCR产物都需通过琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色紫外光观察结果或通过聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染检测,不仅需要多种仪器,而且费时费力,所使用的染色剂溴化乙锭对人体又有害,这些繁杂的实验过程又给污染和假阳性提供了机会。而FQ-PCR只须在加样时打开一次盖子,其后的过程完全是闭管操作,不需要PCR后处理,避免了常规PCR操作中的诸多弊端。实验一般使用PE公司研制的ABI7100型PCR扩增仪。该仪器具有以下特点:①应用广泛:可用于DNA和RNA的PCR产物定量、基

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小鼠肝脏DNA提取与鉴定

实验原理 DNA 以核蛋白形式存在于细胞核中。蛋白酶K 或链霉蛋白酶 E 均为广谱蛋白酶,其重要特性是能在 SDS 和 EDTA 存在下保持很高的活性。在匀浆后提取 DNA 的反应体系中, SDS 可破坏细咆膜、核膜,并使组织蛋白与 DNA 分子分离, EDTA 抑制细胞中 DNase 活性,蛋白酶 K 或链霉蛋白酶 E 将蛋白质降解成小肽或氨基酸,使 DNA 分子完整地分离出来。再用酚、酚/氯仿抽提除去蛋白质,接着用氯仿抽提以除去 DNA 溶液中微量酚的污染。最后用无水乙醇沉淀 DNA 。为获得高纯度 DNA ,操作过程中常加入 RNase 除去 RNA 。获得高分子量 DNA 的关键是防止 DNase 降解 DNA 。故标本必须新鲜,在提取前细胞就保持完整,核、溶酶体等细胞器应没有明显破坏,提取 DNA 用的离心管等器皿及试剂应消毒。操作在4 ℃以下进行。 试剂及器材 1 .试剂 ① 蛋白酶 K :称取 20mg 蛋白酶 K 溶于 1ml 消毒双蒸水中,-20 ℃备用。 ② RNase( 牛胰 ) :称取 10mg RNase 溶于 lml 下列混合液中: 10mmo

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地衣酚显色法测定RNA含量

原理 核糖核酸与浓盐酸共热时,即发生降解,形成的核糖继而转变为糠醛,后者与3,5-二羟基甲苯(地衣酚)反应呈鲜绿色,该反应需用三氯化铁或氯化铜作催化剂,反应产物在670nm处有最大吸收。RNA在20~250μ g范围内,光吸收与RNA的浓度成正比。地衣酚反应特异性较差,凡戊糖均有此反应,DNA和其他杂质也能给出类似的颜色。因此测定RNA时可先测定DNA含量,再计算出RNA含量。 . 操作方法 一、RNA标准曲线的制定 取10支试管,分成2组,依次加入0.5、1.0、1.5、2.0和2.5mLRNA标准溶液。分别加入蒸馏水使最终体积为2.5mL.另取2支试管,各加入2.5mL水作为对照。然后各加入2.5mL地衣酚试剂。混匀后,于沸水浴内加热20分钟。取出冷却(自来水中)。于670nm波长处测定光吸收值。取两管平均值,以RNA浓度为横坐标,光吸收值为纵坐标作图,绘制标准曲线。 二、制品的测定 取2支试管,各加入2.5mL待测液,(样品量应在标准曲线的可测范围之内

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红细胞比容的测定

[实验目的]   学习和掌握测定红细胞比容的方法。 [实验原理]   将定量的抗凝血灌注于特制的毛细玻璃管中,定时、定速离心后,有形成分和血浆分离,上层呈淡黄色的液体是血浆,中间很薄一层为灰白色,即白细胞和血小板(或栓细胞),下层为暗红色的红细胞,彼此压紧而不改变细胞的正常形态。根据红细胞柱及全血高度,可计算出红细胞在全血中的容积比值,即为红细胞比容(压积)。 [实验对象]   动物种类不限 [实验药品]   草酸盐抗凝剂(0.8 g草酸钾·H 2 O + 1.2 g草酸銨·H 2 O + 甲醛1 ml + 蒸馏水至100 ml)或10 g·L-1肝素,橡皮泥或半融化状态石蜡,75%酒精。 [ 仪器与器械]   毛细玻璃管(内径1.8 mm,长75 mm)或温氏分血管,酒精灯,水平式高速毛细管 离心机 (或普通 离心机 ),天平,注射器,长针头,干棉球,刻度尺(精确到mm)。 [实验方法与步骤]  

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