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蛋白质与多肽提取分离

1、分离方法采取何种分离纯化方法要由所提取的组织材料、所要提取物质的性质决定。对蛋白质、多肽提取分离常用的方法包括:盐析法、超滤法、凝胶过滤法、等电点沉淀法、离子交换层析、亲和层析、吸附层析、逆流分溶、酶解法等。这些方法常常组合到一起对特定的物质进行分离纯化,同时上述这些方法也是蛋白、多肽类物质分析中常用的手段,如层析、电泳等。1.1 高效液相色谱(HPLC)HPLC的出现为肽类物质的分离提供了有利的方法手段,因为蛋白质、多肽的HPLC应用与其它化合物相比,在适宜的色谱条件下不仅可以在短时间内完成分离目的,更重要的是HPLC能在制备规模上生产具有生物活性的多肽。因此在寻找多肽类物质分离制备的最佳条件上,不少学者做了大量的工作。如何保持多肽活性、如何选择固定相材料、洗脱液种类、如何分析测定都是目前研究的内容。1.1.1反相高效液相色谱(RP-HPLC)结果与保留值之间的关系:利用RP-HPLC分离多肽首先得确定不同结构的多肽在柱上的保留情况。为了获得一系列的保留系数,Wilce等利用多线性回归方法对2106种肽的保留性质与结构进行分析,得出了不同氨基酸组成对保留系数影响的关系,其中极性氨

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呼吸运动的调节

[实验目的]   掌握描记呼吸运动的方法,观察各种因素和某些药物对呼吸运动的影响,并了解其作用的机理。 [实验原理]   呼吸运动是呼吸中枢节律性活动的反映。呼吸中枢的活动受内、外环境各种刺激的影响,可直接作用于呼吸中枢或通过不同的感受器反射性地影响呼吸运动。其中较重要的有呼吸中枢、牵张反射和各种化学感受器的反射性调节。 [实验对象]   家兔。 [实验药品]   20%氨基甲酸乙酯溶液、3%乳酸溶液、生理盐水。 [实验 仪器 与器械]   生物信号采集处理系统(或二道生理记录仪、刺激器)、呼吸换能器(或张力换能器)、刺激电极、手术台、兔用手术器械一套、气管插管、50 cm橡皮管、注射器(20 ml)、CO 2 球胆、空气球胆、钠石灰瓶、纱布、棉线等。 [实验方法与步骤] 1、麻醉、固定动物、气管插管   取家兔一只,称重,用20%氨基甲酸乙酯溶液按5 ml·(kg体重)-1耳缘静脉注射,麻醉后,仰卧位固定于手

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种子和幼苗(图)

一、实验目的 了解种子的基本构造和幼苗的形态。 二、实验原理 种子在植物学上属于繁殖器官,它和植物繁衍后代有着密切联系。植物界的所有种类并不都是以种子进行繁殖的,只有在植物界系统发育地位最高、形态结构最为复杂的一个类群——种子植物才能产生种子。种子植物名称的由来,也正反映了这一特点。种子又是种子植物的花在完成开花、传粉和受精等一系列有性生殖过程后产生的,是有性生殖的产物,所以和花的结构密切相关。种子植物的生活是依赖于根、茎、叶三种营养器官的生理作用来维持的,从植物的个体发育而言,早在种子离开母体植株的时候,新生一代一般就已孕育在种子里面,新一代的植物体已经完成了形态上的初步分化,成为植物的雏体。以后,随着种子在适宜条件下的萌发,种子里的雏体—胚,经过一系列的生长、发育过程,成长为新的植株。新一代植物体的根、茎、叶就是从种子的胚长大后成长起来的。所以,种子是孕育植物雏体的场所。在不良的环境条件下,种子停留在休眠阶段,由外面的种皮或包围种子的果实所保护。种子是有生命的,胚体充分成熟的种子,在合适的条件下,通过一系列同化和异化作用,就开始萌发,长成幼苗。 三、实

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Real-time PCR实验注意事项

实验中的一些好习惯1、加入试剂之前,把它混匀一下,以免放置时间长了浓度不均2、移液枪用完之后要归到最大计量的位置,防止久而久之弹簧失去弹性3、一定要记着关水浴箱,切记切记4、多和大家讨论,同时多关注别人讨论的经验,这几乎是最快提高的捷径了5、所有的试剂都自己配,出了问题才好找原因一、防止RNA酶污染的措施1.所有的玻璃器皿均应在使用前于 180℃ 的高温下干烤 6h 或更长时间。2.塑料器皿可用 0.1% DEPC 水浸泡或用氯仿冲洗(注意:有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀,故不能使用)。3.有机玻璃的电泳槽等,可先用去污剂洗涤,双蒸水冲洗,乙醇干燥,再浸泡在 3% H2O2 室温 10min,然后用 0.1% DEPC 水冲洗,晾干。4.配制的溶液应尽可能的用 0.1% DEPC,在 37℃ 处理 12h 以上。然后用高压灭菌除去残留的 DEPC。不能高压灭菌的试剂,应当用 DEPC 处理过的无菌双蒸水配制,然后经 0.22μm 滤膜过滤除菌。5.操作人员戴一次性口罩、帽子、手套,实验过程中手套要勤换。6.设置 RNA 操作专用实验室,所有器械等应为专用。二、常用的RNA酶抑制剂1.焦磷

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琼脂糖凝胶电泳检测DNA实验的内容

相关专题本文介绍了琼脂糖凝胶电泳检测DNA的设备、材料以及详细的实验步骤,也讲述了琼脂凝胶的特性供广大读者参考。[实验原理]琼脂糖凝胶电泳是分离鉴定和纯化DNA片段的常用方法。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应,DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷,在电场中向正极移动。由于糖磷酸骨架在结构上的重复性质,相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷,因此它们能以同样的速度向正极方向移动。不同浓度琼脂糖凝胶可以分离从200bp至50kb的DNA片段。在琼脂糖溶液中加入低浓度的溴化乙锭(ethidum bromide ,EB),在紫外光下可以检出 10ng的DNA条带,在电场中,pH8.0条件下,凝胶中带负电荷的DNA向阳极迁移。琼脂糖凝胶有如下特点:(1) DNA的分子大小 在凝胶基质中其迁移速率与碱基对数目的常用对数值成反比,分子越大迁移得越慢。(2) 琼脂糖浓度 一个特定大小的线形DNA分子,其迁移速度在不同浓度的琼脂糖凝胶中各不相同。DNA电泳迁移率(u)的对数与凝胶浓度(t)成线性关系。(3) 电压 低电压时,线状DNA片段迁移速率与所加电压成正比。但是随着电场

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原代微血管内皮细胞的体外分离培养

原代微血管内皮 细 胞( Primary Microvascular Endothelial Cells )的体外分离培养 微血管内皮细胞生长因子的应用和免疫磁珠技术的发展,使微血管内皮细胞的培养和纯化变得相对简化。 1、微血管内皮细胞培养简述人体主要器官和组织的微血管内皮细胞已经培养成功的有:骨骼肌、心、脑、胃、视网膜、肺、皮肤、脉络膜、小肠、脂肪、肝窦、肾、关节滑膜、胎盘、骨髓、胰岛、角膜及食道等器官组织的微血管内皮细胞。 2、微血管内皮细胞的分离目前分离内皮细胞的方法主要有三种,即酶消化法、机械分离法和磁珠分离法。 酶消化法:优点是分离的细胞多、纯度较高;缺点是酶对某些蛋白有破坏作用。消化后的组织悬液需要用血清终止酶活性,并将组织悬液通过200目的金属筛去除未消化组织。机械分离法和磁珠分离法:可以避免酶对内皮细胞的损伤,缺点是其他细胞的污染可能性较大。磁珠分离法:利用特异的介质(表面有内皮细胞特异单克隆抗体的磁珠)从其他细胞群中分离出内皮细胞。这种方法虽然可以分离出可用于炎症研究的微血管内皮细胞,但是分离的细胞量少。机械分离法:用于大血管内皮细胞的分离,这种方法避免了酶对内皮细

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基因枪活体植物基因转染

引言本实验所用基因传递系统(基因枪)原理: 低压基因递送系统(GDS-80 基因枪 U.S. Patent Number: 6,436,709 B1),根据火箭喷嘴原理和空气动力学原理设计,是用于传递生物微粒进入靶细胞的一种新型系统。如图1中所示,当左侧出现输入气体压力时(如:氦气),两个腔室之间将形成巨大的压力差,一旦该气体穿过装载样品的咽喉处,GDS-80 中的气体输出将为生物粒子提供足够的动能量,使它们加速到接近超音速的速度(约 300m/s)。在加速过程中,样品溶液会雾化并均匀地喷洒到靶向目标的表面上。 影响转染效率的因素:在执行 GDS-80 轰击的同时,有四个主要因素影响转染效率。涉及火箭喷嘴设计原理方面,有两个:传递压力的设定和枪管的直径。通过增加输送压力的设定,可以使两个腔室中的压力差变大,从而增加生物微粒的速度,增加动能;而增大枪管直径会降低微粒的输出速度。传递距离也在实验中起到重要的作用,通过增加从枪管到目标样品的传递距离,生物颗粒将受空气阻力影响而减慢速度,不过这样也同时降低了损坏靶细胞的几率。最后一个因素是传送样品的总量,被传送的样品量越大,越够能

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消毒柜工作原理维护种类

消毒柜消毒柜的构造无论哪种消毒柜,它的基本原理都是利用红外线高温消毒的特点,将洗净的碗、筷、杯、盘放入其中加热、烘干,达到预定的时间之后便自动断电,由于它仿冰箱式的柜门较普通的碗柜密封性强,所以可以有效地阻止蚂蚁、蟑螂和其它昆虫的进入,从而避免了消毒之后的第二次污染。对于家庭居住条件比较拥挤的消费者来说,传统的消毒柜门比较占空间,因此有的企业专门推出一种类似于家庭浴室门的圆弧型推拉门,丝毫不占用额外的空间,而且外观非常漂亮。不过,这类消毒柜也有自身的缺点,那就是密封性较拉开式柜门差,家中若有蚂蚁、蟑螂依旧可以爬进去,房间内的灰尘也容易从门缝中飘进。消毒柜内部一般有一至数个金属支架,用来将碗、碟等物分隔存放。消毒柜的工作原理根据中国预防医学科学院消毒研究中心测试的数据表明:消毒柜内部的温度必须达到125℃,而且持续保持10分钟,才能把对人身体有害的牙孢菌及肝炎病菌杀死。出于这个原因,只有单一远红外线消毒功能的消毒柜中不宜存放塑料器皿,因为要想在柜内达到125℃,不论是采用石英管还是电热丝发热,发热元件附近的温度肯定会大大高于125℃,塑料容器在长时间的烘烤之下,很容易变形,同样的原因,消

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植物体内可溶性蛋白质含量的测定(LoWry法与劳里法)

一、原理LoWry法是双缩脲法(BIureT)和福林酚法(FolIn-酚)的结合与发展。其原理是蛋白质溶液用碱性铜溶液处理后,碱性铜试剂与蛋白质中的肽键作用产生双缩脲反应,形成铜—蛋白质的络合盐。再加入酚试剂后,在碱性条件下,这种被作用的蛋白质上的酚类基团极不稳定,很容易还原酚试剂中的磷钨酸和磷钼酸(PHosPHoMolyBdATe & PHosPHoTungsTATe),使之生成磷钨蓝和磷钼蓝的混合物。这种溶液蓝色的深浅与蛋白的含量成正相关,所以可以用于蛋白质含量的测定。LoWry法除使肽链中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等显色外,还使双缩脲法中肽键的显色效果更强烈,其显色效果比单独使用酚试剂强3~15倍,约是双缩脲法的100倍。由于肽键显色效果增强,从而减少了因蛋白质种类不同引起的偏差。LoWry法适于微量蛋白的测定,对多个样品同时测定较为方便。但对不溶性蛋白和膜结合蛋白必须进行预处理(如加入少量的SDS)。1. 双缩脲法的原理双缩脲(NH2-CO-NH-CO-NH2)在碱性溶液中可与铜离子产生紫红色的络合物,这一反应称为双缩脲反应。因为蛋白质中有多个肽键,也能与铜离子发生双缩脲

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转染技术简介

常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,一类是稳定转染(永久转染)。前者外源DNA /RNA 不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒DNA 转染效率较高,在转染后24-72小时内(依赖于各种不同的构建)分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称稳定转染,外源DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体(episome)存在。尽管线性DNA 比超螺旋DNA 转入量低但整合率高。外源DNA 整合到染色体中概率很小,大约1/104转染细胞能整合,通常需要通过一些选择性标记,如来氨丙基转移酶(APH;新霉素抗性基因),潮霉素B磷酸转移酶(HPH),胸苷激酶(TK)等反复筛选,得到稳定转染的同源细胞系。转染技术的选择对转染结果影响也很大,许多转染方法需要优化DNA 与转染试剂比例,细胞数量,培养及检测时间等。一些传统的转染技术,如DEAE右旋糖苷法,磷酸钙法,电穿孔法,脂质体法各有利弊,其主要原理及应用特点见下表: 转染

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植物叶片光合速率的测定(改良半叶法)

光合速率测定是植物生理学的基本研究方法之一,在作物丰产生理、作物生态、新品种选育、以及光合作用基本理论研究方面都有着广泛的用途。根据光合作用的总反应式:C022H2O→ (CH2O)O2H2O光合强度原则上可以用任何一反应物消耗速度或生成物的产生速度来表示。由于植物体内水分含量很高,而且植物随时都在不断地吸水和失水,水参与的生化反应又特多,即体内水分含量经常变动,所以实际上不能用水的含量变化来测定光合速率。在科学实验中可用以下方法方式来测定和表示光合速率(表9—1),其中最常用的方法有:改良半叶法,红外线CO-2分析法,和氧电极法。以下介绍主要介绍“改良半叶法”。改良半叶法:原理同一叶片的中脉两侧,其内部结构,生理功能基本一致。将叶片一侧遮光或一部分取下置于暗处,另一侧留在光下进行光合作用,过一定时间后,在这叶片两侧的对应部位取同等面积,分别烘干称重。根据照光部分干重的增量便可计算光合速率。为了防止光合产物从叶中输出,可对双子叶植物的叶柄采用环割,对单子叶植物叶片基部用开水烫,或用三氯醋酸(蛋白质沉淀剂)处理等方法来损伤韧皮部活细胞,而这些处理几乎不影响水和无机盐分向叶片的输送。器材与

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iLab--实验室管理软件的后起之秀

2014年11月26日,iLab试剂耗材管家更新至V2.2.7版本,这是自iLab正式发布以来,第7次更新版本。 据国外知名市场研究公司Reportlinker发布的《全球生命科学工具和试剂研究报告》显示,用于DNA和RNA研究的试剂和工具市场销量目前已达270亿美元,而在中国,这一市场约为全球的1/10,接近150亿元人民币。 庞大的销售额背后是大量管理成本的投入,实验室每天都在消耗大量的试剂与耗材,一个实验室如果要实现良好的运作,管理员的工作就显得十分重要。 然而,诸多难题一直困扰着实验室的管理者们: ● 试剂耗材经常要么少订购,要么重复订购 ● 共用库里的剩余试剂量难以迅速得知 ● Excel手工记录的方式效率低下 ● 采购单需要审批时老板又不在 在缺乏有效管理而引发大量人力成本浪费的情况下,iLab试剂耗材管家得到越来越多的关注。其专注于试剂耗材管理、免费、易上手的特性,为它赢得超过1500家实验室管家和科研人员的青睐,其

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皮肤成纤维细胞和THP-1细胞的传代经验

我养过皮肤成纤维细胞和THP-1细胞。皮肤成纤维细胞是贴壁生长的。THP-1细胞是悬浮的。由于我们实验室养细胞的时间也不是很长,所以也只能说说自己平时的操作了。 先说皮肤成纤维细胞。当细胞铺满瓶底,也就是细胞与细胞之间没有间隙时,就可以传代了。一般十天左右传一代。先吸弃旧培养液,用D-Hanks液洗两遍,再加入0.25%的胰酶,加入的量以能覆盖瓶底为准。加入后轻轻摇晃培养瓶使液体覆盖瓶底,然后静置两分钟左右,最好是能在显微镜下观察,当细胞之间出现间隙且有一部分细胞呈现圆形后即可。吸去胰酶,加入含血清培养液,摇晃瓶子使培养液覆盖瓶底就行了。因为血清可以终止胰酶的消化。然后吹打瓶底各处使细胞脱落。再分瓶补加培养液。 THP-1细胞的传代就比较简单了。可以有两种传代方法。如果镜下观察细胞状态很好,没有其它杂质即细胞裂解物之类的,就可以采用直接传代法。传代前将细胞培养瓶直立一个半小时使细胞自然下沉。吸弃上层少量培养液约三分之一,将余下的培养液分成两瓶,再分别补加培养液即可。如果镜下观察觉得培养液中有杂质即可采用离心传代法。如果细胞数目较多可以低速离心约600转离

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流式细胞术的样品制备

(一)不同来源样品的处理 1. 培养细胞 (1)培养细胞用0.25%的胰酶消化。 (2)PBS或生理盐水洗涤细胞2次,再用PBS或生理盐水悬浮细胞,加入预冷的无水乙醇,终浓度为60%~70% ,快速混匀,并用封口膜封口,置4℃下可保存15天左右。 2. 新鲜标本 (1)将标本切成1~2mm3的小块。 (2)PBS或生理盐水清洗后去除上清,加入0.2%胶原酶(或0.15%胰蛋白酶)37℃消化10~30min(根据实验及不同组织确定),并不断振动。 (3)300目尼龙筛过滤,除去组织团块,PBS洗涤2次,300g离心5min,获得已消化的细胞。 3. 石蜡包埋标本 (1)标本在切片机上切取3~5片50μm厚的组织片。 (2)将切片彻底脱蜡,梯度乙醇(100%、95%、70%)及蒸馏水水化。 (3)0.5%胃蛋白酶(或胰蛋白酶)37℃消化30min,每隔10min振动1次。 (4)300目尼龙筛过滤,获得的细胞悬液PBS洗涤2次,300g离心5min。 注意:脱蜡一定要完全(若加入100%乙醇无絮状物飘起即可);切片厚薄适宜,太薄碎片多,影响FCM分析结果,太

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P-ACE MDQ型毛细管电泳在相关领域的应用(图)

一、简介 毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(HPCE)。是以毛细管为分离通道,以高压电场为驱动力的新型液相分离分析技术,在八十年代得以迅速发展。目前,在生命科学、药物分析、以及从小分子、离子到单细胞分析的一系列领域得到了广泛的应用。毛细管电泳的发展过程:1.六十年代中期:瑞典科学家Hjerten首先提出了毛细管区带电泳(CZE)的方法,被看作毛细管电泳的起点。2.1979年:Mikkers等用200μmID的聚四氟乙烯管为分离通道,获得了很高的分离效率。3.1981年:Jorgenson和Lukacs用75μmID的熔融毛细管做CZE,在30KV电压下产生了4×105片/m的效率,成为毛细管电泳发展史上的里程碑。4.1984年:Terabe运用含SDS胶束的缓冲液分离了中性分子,从而建立了胶束电动毛细管电泳。5.1987年,Hjerten建立了毛细管等电聚焦;Cohen和Karger提出了毛细管凝胶电泳。6.1988~1989年:商品化的毛细管电泳仪推出,毛细管电泳法迅速发展起来。二、毛细管电泳的分离原理: CE泛指以高压电场为驱

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免疫球蛋白的多样性及其产生机制

免疫球蛋白的多样性及其产生机制 Ig胚系基因通过基因重排和抗原的刺激,由活化B细胞分化发育为浆细胞后产生Ig。自然界中有数量巨大的抗亨物质,可刺激机体产生同样数量巨大的特异性免疫球蛋白。由此构成了免疫球蛋白多样性(1gdiversity)。 Ig有两个基本的特哇:作为抗体可特异性结合抗原,但又可同时作为抗原分子,诱导机体产生抗免疫球蛋白的免疫应答。虽然Ig分子的基本组成为H2L2,但由于有五类不同的重链和两型不同的轻链,而且类和型中又有众多的亚类和亚型,即使是同类同型Ig某些结构域特别是CDR区域的氨基酸残基组成也不同。由于这些结构上的不同,导致不同Ig的抗原结合特异性的千差万别,也决定了其本身免疫原性的不同。因此,实际上Ig是一类结构和功能高度异质性的分子群。 Ig结构的多样性首先表现在类和型上。五种不同的CH基因片段(α、β、δ、μ、ε)和两型不同的CL基因片段(κ、λ),使Ig有5类和2型;其次是重链和轻链恒定区某些氨基酸残基的改变而衍生出的亚类和亚型;而结构上更大的多样性则来自于重链和轻链可变区氨基酸残基的组成。重轻链可变区CDR特别是CDR3在一级结构上的变异导

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气管及颈部血管插管术标准操作规程(SOP)

名称:气管及颈部血管插管术关键词:颈部血管神经 分离 插管目的:规范颈部气管,动脉、神经、静脉分离,实施气管或血管插管术原理:根据解剖结构以较少的损伤完成插管术急性动物实验中常以血压、呼吸等为指标,以静脉注射、放血等为实验方法。需要曝露气管、颈总动脉,颈外静脉,并做相应的插管,以及分离迷走神经,减压神经等。因此手术主要颈部进行,现分述如下:兔、狗颈部手术颈部手术的目的在于暴露气管、颈部血管并作相应的插管以及分离神经等。颈部手术成败的关键在于熟悉动物颈部及手术要领,防止损伤血管和神经,说明如下:1.家兔背位固定于兔台上,颈部剪毛。2.动物麻醉 一般作局部浸润麻醉,在颈部正中线皮下注1%普鲁卡因,亦可选用20%乌拉坦作全身麻醉。3.气管及颈部血管神经分离术⑴气管暴露术:用手术刀沿颈部正中线从甲状软骨处向下靠近胸骨上缘作一切口(兔长约4~6cm,狗的长约10cm);因兔颈部皮肤较松驰亦可用手术剪沿正中线剪开。切开皮肤后,以气管为标志从正中线用止血钳钝性分离正中的肌群和筋膜即可暴露气管,分离食道与气管,在气管下穿过一条粗线备用。⑵颈总动脉分离术:正中切开皮肤及皮下筋膜,暴露肌肉。将肌肉层与皮下

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血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)和IgG

应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理. 一般的处理方式: 1. 常规分离血清,即取血后常温放置,使其凝固,然后 3000 rpm 15 min 离心 , 取上清即可。 2. 测血清蛋白浓度。 3. 用 Laemmli buffer (蛋白裂解液)稀释至所需浓度,我一般为 5ug/ul. 4. 加入适量 loading buffer , 100 ℃ 煮 5 分钟。注意:有时会出现水煮后,蛋白液变得非常粘稠,这时可以在 6 5 ℃ 煮 10-20 minutes 以替代沸水煮。 n 对于目标蛋白在血清中含量很低,或者目标蛋白分子量与白蛋白或球蛋白分子量相近的情况下,必烦要去除血清中的白蛋白和 / 或球蛋白,以下是一些知名厂商提供的试剂盒,使用较为简便,但价格有点贵哦。

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红细胞残留的PBMC精确计数和活性分析

一、PBMC精确计数和活性分析的重要性外周血单个核细胞(PBMC)在免疫学、传染病、肿瘤学、干细胞移植、恶性血液肿瘤以及疫苗开发等领域被广泛的研究,尤其是在免疫学领域,PBMC细胞被用来监测在不同患者之间的免疫功能,其监测浓度、活力、增值、细胞因子的功能,对于临床试验和细胞医学研究都是是至关重要的。PBMC通常从分离于全血或者采集于病人的脐带血,这个过程就需要使用淋巴细胞分离液从血浆,血小板,和红细胞(RBC)中分离PBMC。分离之后,冷冻保存之前或者各种免疫分析都需要进行常规的活性和浓度测验来验证样品的质量。其中一个重要的问题就是PBMC细胞分离中红细胞的污染,PBMC样品中红细胞的污染会导致测量浓度和活性的误差,这就需要通过进一步的实验来分析这些细胞,要解决这个问题,可以用RBC溶解来消除潜在的RBC污染导致的问题。 二、消除红细胞导致的计数误差的方法1、新鲜的人类PBMC样品残留RBC的鉴定用Cellometer Vision细胞计数仪明场图像计数15个分离的新鲜白细胞样品,独特的光学系统使得红细胞的双凹面可视化,因此PBMC和RBC被视觉化然后图像计数。因此PBMC和RBC可

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B细胞在淋巴结中的定居与激活

B细胞的增殖与分化在外周淋巴组织中进行。其中,包括B细胞进入B细胞区、识别抗原、与T细胞发生相互作用、出现增殖性原发灶、形成生发中心,并在生发中心中完成抗体亲和力成熟及类别转换,最终形成浆细胞及记忆B细胞。 B细胞可以经过两种途径进入外周淋巴结,一是经由输入淋巴管,二是穿越位于淋巴结中的HEV。下面将要提到,HEV位于T细胞区,该区中的基质细胞、HEV内皮细胞以及DC可以分泌特定的趋化因子,但末被抗原激发的B细胞不表达相应的受体,因而不会停留于T细胞区,也没有机会与该区内的T细胞发生相互作用,而迅速进入初级淋巴滤泡即B细胞区。如果仍旧没有接触抗原的话,B细胞在该处停留1d后经输出淋巴管又进入淋巴循环并通过胸导管回到血流。这是B细胞在淋巴结以及其他外周淋巴组织中迁移和停留的第一种途径。说其他外周淋巴组织是因为B细胞经血流进入脾脏后,经过边缘窦,然后迁移至白髓的B细胞区,最终经红髓的静脉窦也可离开脾脏回到血流。 B细胞在淋巴结中的迁移和发育的三种途径或时相 A、初始B细胞从HEV进入T细胞区,因不表达CXCR7而不能停留,从B细胞区进入循环

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