前列腺特异性抗原（PSA）是一种由前列腺上皮细胞分泌的，分子量约为 30-33 KDa 的单链糖蛋白分子，是近年来广泛应用于临床筛查前列腺癌（PCa）的特异性肿瘤标志物，同时分析血清 PSA 和游离 PSA（FPSA）水平，并以 FPSA 百分比为指标可以显著区分“诊断灰区”里的良性前列腺疾病（BPH）和PCa。我们建立了一种增强化学发光酶免疫分析的方法， 并应用于血清中前列腺癌肿瘤标记物PSA 和FPSA 的定量分析。我们用鲁米诺（Luminol）作为化学发光体系的底物，对碘苯酚作为发光增强剂。我们采用双抗体夹心的免疫体系来实现对待测抗原的精确定量分析，首先将一株单克隆抗体利用物理吸附包被在聚苯乙烯材质的 96 孔微孔板上，将样品或者标准品和另一株标记有辣根过氧化物酶（HRP）的酶标记抗体溶液依次加入微孔板各孔，在室温条件下，静置温育 45 min，达到免疫反应平衡，形成固相抗体-抗原-酶标记抗体的免疫复合物，然后利用洗涤的方式将没有结合的酶标记抗体去除，实现免疫复合物上的 HRP 和游离 HRP标记抗体的分离，最后向免疫反应体系中加入化学发光底物，通过测定酶促化学发光的相对发光强度

【原理】 ELISA双抗体夹心法（enzyme linked immunosorbent assay——sandwich technique）的原理是将特异性抗体结合到固相载体上形成固相抗体，然后和待检血清中的相应抗原结合形成免疫复合物，洗涤后再加酶标记抗体，与免疫复合物中抗原结合形成酶标抗体-抗原-固相抗体复合物，加底物显色，判断抗原含量。以检测HbsAg为例。 【材料】 酶标抗体（HRP-抗HBs-IgG）、抗HBs-IgG、待检血清 包被液 pH9.5 0.05 mol/L CB 稀释液 pH7.4 0.02 mol/L Tris-HCl缓冲液 底物液 0.1 mol/L Na 2 HPO 4 （Na 2 HPO 4 ·12H 2 O 35.8 g/L）5.14 ml，0.05 mol/L枸橼酸（10.5g/L）4.86 ml混匀，加入邻苯二胺（OPD）4 mg，置棕色小瓶中，临用时加30% H 2 O 2

减少化学污染对于自己用粉末配制培养液的实验室来说，配制培养液要使用重蒸馏水，以减少带入化学污染的机会。如果要添加NaHCO3，要选用纯度高的NaHCO3，最好是经过细胞培养测试的。另外尽量使用一次性的细胞培养器皿。由于标准厂家一次性细胞培养器皿的生产环境比较严格，得到的产品洁净度很高，从而减少了由细胞培养器皿带入污染的机会。减少生物污染由于一般的污染发生在细胞培养的操作过程中，所以良好的细胞培养操作环境和操作习惯是减少生物污染的关键。要用一个专门的房间用于细胞培养，注意保持房间的清洁。要有一个定期检验的合格的超净台（超净台内的洁净度应该为100级，与计算机硬盘的生产环境相当）。在使用超净台前开启通风装置并打开紫外灯灭菌30分钟。操作时要戴一次性橡胶手套，并喷洒70%酒精消毒。任何带入超净台的非无菌物件都要喷洒70%酒精消毒。收集废培养液的瓶子要加入漂白粉或漂白液，以避免微生物的生长。每次实验完后，要向通向废培养液瓶的塑料管内喷洒70%酒精，并且用蒸馏水和70%酒精先后擦拭台面（只用70%酒精擦拭会导致洒落在台面的培养液在台面上形成难以清除的污垢）。不要在超净台里使用酒精灯等灯具，因为这

生物安全柜（Biological safety cabinets，BSCs）是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。当操作液体或半流体，例如摇动、倾注、搅拌，或将液体滴加到固体表面上或另一种液体中时，均有可能产生气溶胶。在对琼脂板划线接种、用吸管接种细胞培养瓶、采用多道加样器将感染性试剂的混悬液转移到微量培养板中、对感染性物质进行匀浆及涡旋振荡、对感染性液体进行离心以及进行动物操作时，这些实验室操作都可能产生感染性气溶胶。由于肉眼无法看到直径小于5μm的气溶胶以及直径为5～100μm的微小液滴，因此实验室工作人员通常意识不到有这样大小的颗粒在生成，并可能吸入或交叉污染工作台面的其他材料。已经表明，正确使用生物安全柜可以有效减少由于气溶胶暴露所造成的实验室感染以及培养物交叉污染。生物安全柜同时也能保护环境。多年以来，生物安全柜的基本设计已经历了多次改进。主要的变化是在排风系统增加了HEPA过滤器。对于直径0.3μm的颗粒，HEPA过滤器可以截留99.9

关键词：尿液采集 操作规程目的：采集各种实验动物的尿液,以用于实验主体内容：常用的采集方法较多，一般在实验前需给动物灌服一定量的水。(一)代谢笼法：此法较常用，适用于大、小鼠。将动物放在特制的笼内。动物排便时，可以通过笼子底部的大小便分离漏斗将尿液与粪便分开，达到采集尿液的目的。由于大、小鼠尿量较少，操作中的损失和蒸发，各鼠膀胱排空不一致等原因，都可造成较大的误差，因此一般需收集5小时以上的尿液，最后取平均值。(二)导尿法：常用于雄性兔、狗。动物轻度麻醉后，固定于手术台上。由尿道插入导尿管(顶端应用液体石蜡涂抹)，可以采到没有受到污染的尿液。(三)压迫膀胱法：在实验研究中，有时为了某种实验目的，要求间隔一定的时间，收集一次尿液，以观察药物的排泄情况。动物轻度麻醉后，实验人员用手在动物下腹部加压，手要轻柔而有力。当加的压力足以使动物膀胱括约肌松驰时，尿液会自动由尿道排出。此法适用于兔、狗等较大动物。(四)输尿管插管法：动物麻醉后，固定于手术台上。剪毛、消毒，于耻骨联合上缘之上在正中线做皮肤切口(长约3～4cm),沿腹中线切开腹壁及腹膜,找到膀胱翻出腹外。辨认清楚输尿管进入膀胱背侧的部位(

电液比例伺服阀控实验台主要用于完成伺服阀、比例阀的静特性实验和电液位置控制系统实验，也可以完成电液比例伺服系统的研究型实验。阀控实验台主要组成元件见图1。实验台需要与液压泵站和测控系统配合使用，具体操作如下：一、实验前准备 1、启动前首先检查线路，确保测控计算机、测控箱、通电正常，正常后启动测控计算机、同时为测控箱上电。　　2、检查电液比例伺服阀控实验台接线和泵源连接的软管接头是否漏油，确保无线路断裂、接头松动，无液压漏油、管路开裂等现象。　　3、检查油源的压力油出口和回油口的闸阀是否打开，液压油箱的液位是否在规定范围内。确认正常后，方可开机进行试验。　　4 、启动油源电机，交替调节比例溢流阀和电磁溢流阀，使系统压力调定到所需值；如试验完毕或短时不用，交替调节比例溢流阀和电磁溢流阀，使压力下降到最低压力，系统处于卸荷状态。二、实验台控制油路操作按油源操作步骤，启动泵源并调定好系统压力，将压力油进油闸阀根据所使用的阀搬至相应位置。压力油进油闸阀有3个，分别控制进入试验比例阀、试验伺服阀和加载伺服阀的压力油，在做不同的试验项目时，打开相应的进油闸阀。根据选定的实验项目，参考油路

一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用氯仿冲洗（注意：有机玻璃器具因可被氯仿腐蚀，故不能使用）。3. 有机玻璃的电泳槽等，可先用去污剂洗涤，双蒸水冲洗，乙醇干燥，再浸泡在3% H2O2 室温10min，然后用0.1% DEPC水冲洗，晾干。4. 配制的溶液应尽可能的用0.1% DEPC，在37℃处理12hr以上。然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22μm滤膜过滤除菌。5. 操作人员戴一次性口罩、帽子、手套，实验过程中手套要勤换。6. 设置RNA操作专用实验室，所有器械等应为专用。二、常用的RNA酶抑制剂1. 焦磷酸二乙酯（DEPC）：是一种强烈但不彻底的RNA酶抑制剂。它通过和RNA酶的活性基团组氨酸的咪唑环结合使蛋白质变性，从而抑制酶的活性。2. 异硫氰酸胍：目前被认为是最有效的RNA酶抑制剂，它在裂解组织的同时也使RNA酶失活。它既可破坏细胞结构使核酸从核蛋白中解离出来，又对RNA酶有强烈的变性作用。3. 氧钒

【试剂及配制】 （1）0.025mol/L pH9.0碳酸盐缓冲液（CB） NaHCO3 2.10g Na2 CO3 0.16g 蒸馏水加至 1000ml （2）0.5mol/L pH9.5 碳酸盐缓冲液（CB） NaHCO3 3.70g Na2 CO3 0.6g 蒸馏水加至 100ml （3）0.01mol/L pH7.2 PBS Na2 HPO4 ?12H2 O 2.58g NaH2 PO4 ?2H2 O 0.44g NaCl 8.50g 蒸馏水加至 1000ml （4）Sephadex G-25（或G-50）柱（1.2×30cm） （5）抗体 （6）荧光素：FITC（或TRITC） 【操作方法】 下面介绍直接法和半透膜法。 1、直接法（Marshall法） （1）取适量纯化的抗体，用0．025mol/L pH9.0 CB将抗体溶液的蛋白浓度稀释至20mg/ml，将溶液放置冰浴内；

酵母菌是单细胞真核生物，具有生长快、易于遗传操作、能对外源蛋白进行翻译后加工和修饰、不产生有毒产物等特点，被认为是表达外源蛋白的合适宿主。几种工业酵母尤其是巴氏毕赤酵母(pichia pastoris, Pp)，因具有旺盛的生长力以及其它一些独特的性质，已发展成为较成熟的蛋白生产的表达系统。已有许多细菌、真菌和高等动植物的基因在Pp中成功表达(如破伤风毒素片段Ｃ，12g/L)，但也有许多蛋白的表达量并不理想(如多瘤病毒大T抗原，0.5mg/L)，甚至不能表达(如HIV表面糖蛋白)。另外，酵母表达系统的局限性还在于分泌产物的不均一性，包括聚合体的存在、信号肽加工不完全以及内部降解等现象。所有这些都提醒我们在Pp中表达外源蛋白时，应周密考虑影响其表达的各个因素。甲醇酵母可以在以甲醇为唯一碳源和能源的培养基中生长。这是因为其细胞中含有甲醇代谢途径的必需酶，如醇氧化酶(AOX)、二羟丙酮合成酶和过氧化氢酶等，其中AOX是甲醇酵母利用途径中的第1个酶，它催化甲醇被氧化为甲醛和过氧化氢。过氧化氢进一步由过氧化 氢酶分解成水和氧。甲醛在胞浆内被甲醛脱氢酶(FMD)和甲酸脱氢酶(FMDH)氧化成二氧化

DXY网友molihua505提问：这两天做的western，细胞用过氧化氢处理后再提的蛋白。过氧化氢引起细胞损伤，有一些死细胞，我又把培养基中的死细胞离心取沉淀了。 发现浓度较大的组，目的蛋白减少和对照组相比变化不怎么明显，而相对应的actin（肌动蛋白）却比对照少了许多，想问过氧化氢能使actin减少吗，导致过氧化氢处理后内参不应该再用actin了？这是怎么回事啊？DXY网友yangea回复：首先楼主的操作把培养基中的死细胞离心取沉淀这步是不可取的，在提取细胞总蛋白做western时，应该首先用冷PBS将死细胞漂洗掉。其次，选择内参的原理是其中多数为管家基因，在所有组织中表达较恒定，受外界干扰较小。所有以它们的量为标准，采用归一化处理的方法就可以比较其他蛋白的变化了。actin是细胞骨架蛋白，就具有上述特点。但这种表达的恒定性和受外界干扰小的特性也是相对的。楼主应该参考文献看过氧化氢是否对actin有明显的影响。最后，楼主在做这种半定量western时，是否考虑先对提取的细胞总蛋白大概定个量，以尽量减少上样的差异。DXY网友Miya回复： 我到是认为并不是细胞作用过氧化氢导致act

（广义）又叫离体培养，指从植物体分离出符合需要的组织.器官或细胞，原生质体等，通过无菌操作，在人工控制条件下进行培养以获得再生的完整植株或生产具有经济价值的其他产品的技术。（狭义）组培指用植物各部分组织，如形成层.薄壁组织.叶肉组织.胚乳等进行培养获得再生植株，也指在培养过程中从各器官上产生愈伤组织的培养，愈伤组织再经过再分化形成再生植物。植物组织培养基础理论1、植物细胞全能性植物细胞全能性（totipotency)是组织培养的理论基础。一个生活的植物细胞，只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的遗传基础，在一个适当的条件下可以通过分裂、分化再生成一个完整植株，这就是所谓的细胞全能性。但是在自然状态下，由于细胞在植物体内所处位置及生理条件的不同，它的分化受到各方面的调控，致使其所具有的遗传信息不能全部表达出来，所以只能形成某种特化细胞，构成植物体的一种组织或一个器官的一部分。由此可以说明条件是十分重要的，或者说是关键的，只要条件合适，细胞潜在的遗传能力就会表现出来。植物组织和细胞培养技术就是以细胞全能性作为理论依据，用人为的方法创造出一个适合于生长的理想条件，使细

显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。—、光学显微镜（一）、普通光学显微镜普通生物显微镜由3部分构成，即：①照明系统，包括光源和聚光器；②光学放大系统，由物镜和目镜组成，是显微镜的主体，为了消除球差和色差，目镜和物镜都由复杂的透镜组构成；③机械装置，用于固定材料和观察方便（图2-1）。图2-1 尼康E-600显微镜显微镜物象是否清楚不仅决定于放大倍数，还与显微镜的分辨力（resolution）有关，分辨力是指显微镜（或人的眼睛距目标25cm处）能分辨物体最小间隔的能力，分辨力的大小决定于光的波长和镜口率以及介质的折射率，用公式表示为：式中：n=介质折射率；α=镜口角（标本对物镜镜口的张角），N.A.=镜口率（numeric aperture）。镜口角总是要小于180˚，所以sina/2的最大值必然小于1。制作光学镜头所用的玻璃折射率为1.65～1.78，所用介质的折射率越接近玻璃的越好。对于干燥物镜来说，介质为空气，镜口率一般为0.05～0.95；油镜头用香柏油为介质，镜口率可接近

心梗三联包括肌钙蛋白T、肌红蛋白及肌酸激酶同工酶，其临床意义如下： 肌钙蛋白T (Troponin T,TnT) 心肌来源的肌钙蛋白T(cTnT,分子量39.7KD)是心肌损伤特异的、灵敏的标志。较cTnI有统一的cutoff值；无交叉反应。 1、诊断急性心肌梗死(AMI)特异性>98％，在AMI发病后3-4小时，血清cTnT含量升高，并可持续14天之久。 2、用于当怀疑心肌细胞损伤的患者。例如：急性冠脉综合征(发现或者排除急性心肌梗塞和亚急性心肌梗塞，用来评估梗塞的严重程度，通过发现微小面积心梗来对不稳定心绞痛进行危险程度分级)。在心肌的感染中(例如心肌炎)以及由机械，电和化学原因诱导的心肌损伤(冠状动脉支架成型术 PTCA)等，心脏手术，心脏移植，心脏换瓣，心肌毒素，等原因均可以造成TNT升高。cTNT在心肌损伤2-8小时释放入血。cTNT有2小时-14天的诊断窗口。 3、检测血清cTnT对心肌缺血性损伤，如：AMI和心肌炎的诊断，以及监测不稳定性心绞痛的病程和危险性评价均有重要意义。在30%肾功能衰竭的病人血清中，cTnT可升高。临床资料表明：该类病人

一、 目的 掌握Folin-酚法测定蛋白质含量的原理和方法，熟悉分光光度计的操作。二、原理 Folin-酚试剂法包括两步反应：第一步是在碱性条件下，蛋白质与铜作用生成蛋白质-铜络合物；第二步是此络合物将磷钼酸-磷钨酸试剂（Folin 试剂）还原，产生深蓝色（磷钼蓝和磷钨蓝混合物），颜色深浅与蛋白质含量成正比。此法操作简便，灵敏度比双缩脲法高100 倍，定量范围为5～100μg 蛋白质。Folin 试剂显色反应由酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸引起，因此样品中若含有酚类、柠檬酸和巯基化合物均有干扰作用。此外，不同蛋白质因酪氨酸、色氨酸含量不同而使显色强度稍有不同。 三、实验材料、主要 仪器 和试剂 1．实验材料 绿豆芽下胚轴（也可用其它材料如面粉） 2． 仪器 （1）722 型（或721 型）分光光度计 （2）4 000r/min 的离心机 （3）分析天平 （4）容量瓶（50mL） （5）量筒 （6）移液管（0.5mL、1mL、5mL）3． 试剂 （纯度均为分

时间分辨荧光免疫分析（Timeresolved Fluoroimmunoassay,TRFIA）是一种非同位素免疫分析技术，它用镧系元素标记抗原或抗体，根据镧系元素螯合物的发光特点，用时间分辨技术测量荧光，同时检测波长和时间两个参数进行信号分辨，可有效地排除非特异荧光的干扰，极大地提高了分析灵敏度。解离增强镧系元素荧光免疫分析解离增强镧系元素荧光免疫分析（Dissociation Enhanced Lanthanide FluoroimmunoassayDELFIA）是时间分辨荧光免疫分析中的一种。它用具有双功能基团结构的螯合剂，使其一端与铕（Eu）连接，另一端与抗体/抗原分子上的自由氨基连接，形成EU标记的抗体/抗原，经过免疫反应之后生成免疫复合物。由于这种复合物在水中的荧光强度非常弱，因此加入一种增强剂，使Eu3+从复合物上解离下来，自由Eu3+同增强剂中的另一种螯合剂螯合形成一种胶态分子团，这种分子团在紫外光的激发下能发出很强的荧光，信号增强了百万倍。因为这种分析方法使用了解离增强步骤，因此称为解离增强镧系元素荧光免疫分析。两对半定量测定乙肝病毒（HBV）标记物的检测方法常用测定

相关专题 生物实验中的封闭剂 经典的转膜方法是电转移，因为电转移需要配套垂直电泳槽 来进行。如何做这个“海绵—几层滤纸—胶—膜—几层滤纸—海绵”的“三文治夹心”，在分子克隆上已经有详细的介绍，相信大家都很容易找到。一些细节： 记得全程手套操作，一则避免手印污染影响结果，二则保护自己(未交联的丙烯酰胺、甲醛等等虽不立即致命但都会慢慢毒害你的身体，可不要这样白白为科学献身哈) 如果WB前没有可参考的资料——比如不知道是否有表达，比如抗体少还要摸条件(稀释度)，可以用剪膜剩下的边角料来先做几组点杂交摸条件，省点时间省点试剂; 去掉积层胶后，预染的Marker可用以识别胶上下方向和膜的正反面(预染Marker如果照着说明书用量，有可能在电泳时看不到条带，但转膜时有浓缩效应而且背景白就可以看到了。如果要电泳能看到就要参考电泳的那个用量，或者多加1—2倍的量);如果目标蛋白小，指示剂也可以指示方向，但是如果蛋白大，指示剂已经跑出去了，就要留意分清胶上下方向，切个小角是常用的方法。膜上要做好标记，识别正反面和上下。剪一个小小角最方便

最近要做chip实验，不过是组织的。周围做chip的人不多，有几个做的也是做细胞的。于是到丁香园来搜索，结果只有提问的没有回答的。经过最近的摸索，终于找到了步骤。但进一步的实验还未摸索。在这儿把组织裂解成细胞的方法和步骤分享一下。本人英语水平有限，不保证完全准确。最后会给出原文的Protocol，供大家参考。因为做细胞chip的Protocol还是比较多的。组织裂解成细胞之后就可以按照细胞chip的Protocol做了。组织裂解步骤：方法一：1. 称新鲜冰冻组织。切成1-3 mm3小块。2. 转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.3. 加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15-20mins。4. 加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。5. 100 g, 4°C 离心样本5mins。6. 弃上清，取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离心弃上清。7. 再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。8. 1000 rpm，4°C ，离心5 min。弃上清。

肝素（heparin）属于糖胺聚糖（glycosaminoglycans，GAGs）类生化药物，是一类在结构上不均一、聚合程度上高度分散的硫酸多糖，一般指肝素钠。低分子量肝素有下面俩种定义：1．分子量在4000～6500道尔顿的肝素具有独特的抗凝特性称为低分子量肝素.与普通肝素一样，低分子量肝素先与抗凝血酶（AT）结合，形成LMWH—AT复合物，该复全物能抑制凝血酶（Fa）和xa因子（Fxa）等凝血因子的活性，从而发挥抗凝血作用2．以往采用的普通肝素是一种分子量不均一的混合物，分子量为3000～57000，分子量在7000以下的肝素称为低分子量肝素.低分子量肝素只能与抗凝血酶Ⅲ结合，而普通肝素除能与抗凝血酶Ⅲ结合外，还能与血小板结合，不仅抑制血小板表面凝血酶的形成，而且能抑制血小板的聚集与释放硫酸乙酰肝素（heparan sulfate，HS）是一种广泛分布于动物细胞表面和细胞外基质的糖胺聚糖，以蛋白聚糖形式存在已知肝素分子中含有的羧基、硫酸基（包括含量与位置）与其抗凝活性有密切关系，失去羧基或硫酸基，抗凝活性降低。为了明确这些基团与肝素抗肿瘤转移活性间的关系，肝素及硫酸乙酰肝素。虽列

蛋白质浓度测定——双缩脲法 [原理] 将尿素加热，两分子尿素放出一分子氨而形成双缩脲（NH2-CO-NH-CO-NH2）。 双缩脲在碱性溶液中与Cu2+结合生成紫色络合物，这一呈色反应称为双缩脲反应。蛋白质分子中的肽键类似双缩脲结构，故亦能呈双缩脲反应。 在一定的浓度范围内，颜色深浅与蛋白质含量呈线性关系。蛋白质浓度越高，体系的颜色越深。反应产物在540nm处有最大光吸收。 将未知浓度的样品溶液与一系列已知浓度的标准蛋白质溶液同时与双缩脲 试剂 反应，并于540nm比色，可通过标准浓度蛋白质绘制的标准曲线，求得未知样品蛋白质的浓度。 凡含有一个肽键和一个-CSNH2、-CRHNH2、-CHNH2-CHNH2-CH2OH、-CHOH-CH2OH、-CHOH-CH2NH及乙二酰二胺等物质也有此反应。 本法操作简便，迅速，蛋白质浓度与光密

PriCells: 正常人表皮黑色素细胞的培养实验材料：1. 临床活检获取的正常人皮肤材料或新生儿阴茎包皮；2. 不含Ca 2+ 和Mg 2+ 的1×PBS，添加200000IU/L青霉素、200mg/L链霉素，pH7.2；3. 黑素细胞培养液和培养基中各种添加剂的配制：包括以下种类：①胰岛素。贮存液为5mg/ml，即将0.5g的胰岛素溶于1ml 0.01mol/L的HCl液中，双蒸水加至100ml，过滤除菌、分装，-70℃下保存6个月后方可使用。使用时，在500ml培养基中加0.5ml胰岛素贮存液，即终浓度为5μg/ml；②表皮生长因子。贮存液浓度为5μg/ml，其配制方法是，取0.1mg的表皮生长因子溶于20ml的无Ca 2+ 和Mg 2+ 的D-Hanks液中，以0.2μm孔径的滤膜过滤除菌，按1ml分装，-70℃下保存备用。使用时，在500ml培养液中加0.5ml表皮生长因子贮存液，即终浓度为5ng/ml；③十四焕酰法佛醋酸酯（TPA）。贮存液浓度为0.25mg/ml，配制时将10mg TPA溶于40ml的100%的酒精中，分装后用Parafilm密封，于-20℃保存备用