日前，媒体报道的白酒塑化剂风波持续发酵，月旭公司也在密切关注事态发展，并在第一时间内迅速组织相关技术人员讨论和开发应用解决方案，现已开发出全套的专业检测方案。可以为您提供分析所需的：固相萃取小柱、液相色谱柱、气相色谱柱、滤膜和过滤器等各种色谱耗材，也可以提供相应的技术支持和解决方案。 为什么白酒中会出现增塑剂？ 媒体报道这次事件中并未发现人为添加塑化剂，但是并没有说明含量问题。据了解，白酒中的塑化剂主要源于塑料接酒桶、塑料输酒管、酒泵进出乳胶管、封酒缸塑料布、成品酒塑料内盖、成品酒塑料袋包装、成品酒塑料瓶包装和成品酒塑料桶包装等。 邻苯二甲酸酯是一种常用的增塑剂，可增大产品的可塑性和柔韧性，广泛用于塑料产品，驱虫剂，农药载体，染料助剂，涂料及润滑油等工业产品中，本不应该出现在食品中。塑化剂DEHP的作用类似于人工荷尔蒙，会危害男性生殖能力并促使女性性早熟，长期大量摄取会导致肝癌。 月旭公司开发的以酒为基质的样品中16种常见塑化剂的检测方法： 一、实验目的 建立白酒中塑化剂的前处理和检测方法。本方法使用Welchrom ® BRP (500 mg/6 mL，玻

简介 细胞培养的成功很大程度上取决于保护细胞免受细菌、真菌和病毒等微生物的污染。非无菌物品、培养基和试剂、带有微生物的空气颗粒、不干净的培养箱和污染的工作台面均是导致微生物污染的来源。 无菌技术的作用是在环境微生物与无菌的细胞培养物之间形成一道屏障，它通过一套操作流程来降低培养物被上述污染源污染的可能。无菌技术的组成要素包括：无菌工作区域、良好的个人卫生、无菌试剂和培养基以及无菌操作。 无菌工作区域 最为简单、经济的减少空气颗粒和气体挥发 (例如：灰尘、芽孢、皮屑、喷嚏) 污染的方 法就是采用细胞培养通风橱。 细胞培养通风橱应正确设置，放置于专门用于细胞培养的区域，同时要避免来自门、 窗及其他设备的气流，不能有直接的来往通道。 工作台面应保持整洁，只放置特定实验所需的物品；不能用作储存区域。 使用前后均应彻底消毒工作台面，周围区域和设备应定期清洁。 常规清洁时，工作前和工作过程中，特别是发生泼溅后，应使用 70% 乙醇擦拭工作台面。 使用完毕后，可用紫外灯对细胞培养通风橱内空气和暴露在外的工作台面进行消毒。 在细胞培养通风橱内不需要也不建议

名称：大鼠肺动脉压检测方法关键词：大鼠,肺动脉压,检测目的：建立直接检测大鼠肺动脉压的方法背景知识： 肺动脉高压是临床常见疾病,近年来,肺动脉高压的研究已成为许多学者瞩目的领域.但与检测系统动脉压不同肺动脉压的检测难度较大(特别是在小动物).本法应用自制末端呈弧形的PV-1肺动脉插管,建立了直接检测大鼠Ppa的方法.主体内容：1.制备大鼠肺动脉导管:取长度约15cmPV-1管,在其末端1cm处用火焰加热,待导管遇热开始软化时,使其末端在重力作用下逐渐弯曲,形成半径为3mm左右的圆滑弧型.插管制备成后,在距离末端3~4cm处做标记,作为插管时判断导管位置之用.2.颈动脉及肺动脉插管:戊巴比妥钠45mg/kg麻醉大鼠,仰位固定于手术板上,正中切开颈部皮肤,钝性分离皮下组织及肌层,剥离颈动脉及右颈外静脉,将与压力换能器连接并充满肝素盐水的PE-50管插入颈动脉,压力换能器通过载波放大器与多导生理记录仪相连,所记录压力代表系统循环血压.将上述制备的肺动脉插管内充满肝素盐水,插入右侧颈外静脉.插入过程中,保持PV-1导管的弧向下方,并根据插管的标记判断到达心脏部位时,将插管左旋并向前进,此时密切

问：卡氏水份测定仪，容量法与库仑法的区别有哪些？答：二者的基本原理都是一样的，在合适的弱碱如吡啶存在时，I2将SO2氧化为硫酸同时定量的消耗2个水，基本反应为：I2+SO2+2H2O=H2SO4+2HI，因此可以用I2来测定水的含量。容量法和库仑法的最大区别在于I2的来源不同，容量法中的I2来自于滴定剂，而库仑法中I2则通过电解含I-离子的电解液产生。通过电解池的电量与I量是有着严格的定量关系的，因此库仑法有着更高的测量精度。因此，就应用而言，容量法更适用于水分含量高的样品的测量，而库仑法则仅适用于微量、痕量水的测定。 适用范围我只能说非常广，如果配合卡式炉以及适当的样品前处理，则应用范围更广。但具体能否适用，必须给出具体的测试体系。你可以打电话给万通的工程师询问相关适宜，他们应该比我要专业得多。至于国内的厂家，不好意思，我没用过国内的水份测试仪，也不是做这行的，完全不了解。

Tyagi和Krammer于1996年设计了一种可以特异性识别核酸序列的新型荧光探针,这种荧光探针通过与核酸靶分子进行杂交后发生构象的变化而发出荧光,他们将其命名为分子信标(Molecular Beacon)。分子信标具有背景信号低,灵敏度高、特异识别性强、操作简单，不必与未反应的探针分离即可实时检测，可用于活体分析等优点。在生物化学分析，生物医学研究和临床诊断中有着广泛的应用价值。分子信标的结构（1）环状区（长度15～30个碱基的序列，可以与靶序列特异性结合）（2）信标茎杆区（长度为5～8个碱基的互补序列，使得形成发夹结构，与靶序列无关）（3）荧光基团和猝灭基团（通过共价键连接在茎杆区的末端，荧光基团联接在信标分子的5’-端，猝灭基团联接在3’-端）分子信标作用原理无靶标存在下，茎环结构使得荧光基团和猝灭基团相互靠近，发生荧光共振能量（FRET）转移，荧光猝灭，荧光背景极低。加入靶序列后，分子信标与完全互补靶序列形成刚性并且更加稳定的双链杂交体，使得荧光基团和猝灭基团距离增大，阻止了FRET的发生，荧光恢复。分子信标的设计序列长度（环状序列比茎杆序列长两倍以上，茎杆序列不能过长或过短

溶液以及器材： 1、用RPMI-1640配I型胶原酶 0.1g/100ml 2、配三抗： 青霉素：100ku/L 链霉素：100ku/L 庆大霉素：100ku/L 3、培养液（M199＋ECGS[3ug/ml]＋15％胎牛血清）有EGF可以适当加点10ng/ml 4、大瓶生理盐水 5、广口瓶（脐带数＋1） 6、止血钳（脐带数×2＋2） 7、大针头数个（用于吸取生理盐水，胶原酶） 8、手术剪刀数把 使用前器械高温蒸气灭菌。 实验步骤： 1、去妇产科取当天新鲜脐带（广口瓶；生理盐水），试验前放入4度冰箱。 2、辨别脐带静脉（粗大的那根），顺着静脉瓣插入大针头，注入生理盐水，充分冲洗脐静脉，至流出液体中无可见血液。 3、夹住脐带下端，从上端灌注0.1%的胶原酶，钳住脐静脉上端，37度孵育15分钟（已经足够）；如果消化液中出现絮状物，说明消化时间过长。 4、收集消化液，并用含小牛血清的RPMI-1640 冲洗脐静脉，冲洗液并入消化液中。1000－

在过去的几年中，许多生物的基因组完成了测序工作，如何对如此庞大的原始序列信息进行分析和应用，正是现在最为棘手的问题。大量的基因预测软件和在线工具应运而生。如何广泛而深入地了解并能有的放矢地利用这些工具，已经成为21世纪分子生物学家的必修课。随着大规模EST和cDNA序列信息的获取，那些基于表达序列同源范围的程序，在基因组注释中的作用日益显著。即使在稀少基因或组织特异性表达的基因中，基因组序列的相关性信息也颇具参考价值。所以利用基因组序列的比对来扩充基因的信息是不可获缺的。特别是在对人类基因组做注释时，与那些相对完整的脊椎动物基因组，如小鼠和鱼类的基因组比较是必不可少的步骤。许多基因组测序计划正在进行之中，尽管仍存在急需解决的问题，比较基因组学方法（comparative genome approach）被认为是最有应用前景的方法。该方法不仅在基因预测中举足轻重，而且在鉴定调控基因、探索垃圾基因（junk gene）等方面的作用也不容忽视。基因预测软件的用户应该认识到，软件预测结果的可靠性和置信水平都有较大程度的提升。但这些毕竟是预测的结果，分子生物学家，总是试图证明真实存在的蛋白质，及

小动物活体成像 主要采用生物发光（bioluminescence）与荧光（fluorescence）两种技术。生物发光是用荧光素酶（Luciferase）基因标记细胞或DNA，而荧光技术则采用荧光报告基团（GFP、RFP, Cyt及dyes等）进行标记。利用一套非常灵敏的光学检测仪器，让研究人员能够直接监控活体生物体内的细胞活动和基因行为。通过这个系统，可以观测活体动物体内肿瘤的生长及转移、感染性疾病发展过程、特定基因的表达等生物学过程。传统的动物实验方法需要在不同的时间点宰杀实验动物以获得数据, 得到多个时间点的实验结果。相比之下，可见光体内成像通过对同一组实验对象在不同时间点进行记录，跟踪同一观察目标（标记细胞及基因）的移动及变化，所得的数据更加真实可信。另外, 这一技术对肿瘤微小转移灶的检测灵敏度极高，不涉及放射性物质和方法, 非常安全。因其操作极其简单、所得结果直观、灵敏度高等特点, 在刚刚发展起来的几年时间内，已广泛应用于生命科学、医学研究及药物开发等方面。 一、技术原理 1. 标记原理 哺乳动物生物发光，是将Fluc基因整合到细胞染色体DNA上以表达荧光素酶，

相关专题1 甲基化敏感性限制性内切酶 (methylation-sensitive restriction Endonuclease，MS-RE)-PCR/Southern法这种方法利用甲基化敏感性限制性内切酶 对甲基化区的不切割的特性，将DNA消化为不同大小的片段后再进行分析。常使用的甲基化敏感的限制性内切酶有HpaⅡ-MspⅠ(识别序列CCGG)和SmaⅠ-Xmal(CCCGGG)等。由于后者识别的碱基数相对较多，其碱基序列在体内出现的概率相对较低，所以以前者即HpaⅡ-MspⅠ更常用。其中HpaⅡ和MspⅠ均能识别CCGG序列，然而当序列中的胞嘧啶发生甲基化时，HpaⅡ不切割，利用HpaⅡ-MspⅠ的这种属性处理DNA，随后进行Southern或PCR扩增分离产物，明确甲基化状态]。这是一种经典的甲基化研究方法，其优点是：相对简单,成本低廉，甲基化位点明确,实验结果易解释;缺点是：1.由于CG不仅仅限于CCGG序列中，因此非该序列中的CG将被忽略;2.只有检测与转录相关的关键性位点的甲基化状态时,该检测方法的结果才有意义;3.相对而言，Southern方法较复杂，且需要样本的量大

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA 送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA 的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术：被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何，将直接决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞，一般要求在转染前一日，必需应用胰酶处理成单细胞悬液，重新接种于培养皿或瓶，细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜，转染当日，在转染前4小时换一将近新鲜培养液。对于悬浮细胞，也需在转染前4小时换一次新鲜培养液。用于转染的质粒DNA 必须无蛋白质，无RNA 和其了化学物质的污染，OD260/280比值应在1.8以上。应用酚-氯仿抽提法制备的质粒DNA 一般难以达到此标准，目前大多采用进口的术提取纯化试剂盒。具体的基因转染技术有鳞酸钙介导的转染法、DEAE葡聚糖介导转染法、脂质体介导转染法及电击基因转导尘等。靶基因被导入细胞后，一般在转染后48小时，靶基因即在

高效液相色谱（High Rerformance Liquid Chromatography, HPLC）又叫高压、高速、近代液相色谱，通常叫做高效液相色谱。它是60年代中期才建立的一种高效快速分离化合物的方法，到了70年代后期才广泛用于蛋白质的分离纯化方面，现已成为分离纯化蛋白质非常有效的方法之一。 和经典常压色谱相比它有以下特点： 1、HPLC分离、纯化蛋白质的速度快。通常半小时左右可进行一次，大大缩短了纯化蛋白质的时间； 2、分辩率高。一根长10cm的色谱柱可分离十几种以上的物质； 3、适应面广，灵活性强，几乎所有的蛋白质根据它们的性质差别（等电点、疏水性、分子量、电荷分布等）都可以用不同HPLC方法进行分离提纯； 4、灵敏度高。HPLC现已广泛采用多种高灵敏度的检测器，如紫外、荧光、电导等。荧光的灵敏度可达10-9g； 5、重复性好，在作分析蛋白质分析试验时，误差一般不超过5%。 因此，HPLC在蛋白质分离纯化方面具有极其重要的位置。 当然HPLC也有它的缺点，例如，仪器设备价格昂贵，虽然已有制备柱使用，但制备量还是受到限制，在某些方法中，由于使用有机溶剂，对

一、原理硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。一般以Nμg·g-1·h-1为单位。NR的测定可分为活体法和离体法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。二、仪器与用具分光光度计；真空抽气泵（或20ml注射器筒）；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（15ml）；移液管（5ml×2，2ml×8，1ml×2）。三、试剂1. 亚硝酸钠标准液 称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5μg（亚硝态氮近似1μg/ml）的标准液。2. 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。3. 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取1

激光扫描共聚焦显微镜可测定的样品种类很多，包括生物 材料、组织(切片)、细胞(亚细胞)结构等。样品中荧光的来源主要有如下几种：自发荧光(autofluorescence)、荧光染色、免疫荧光、荧光蛋白、诱发荧光(induced fluorescence)及酶致荧光(enzymatically produced fluorescence)等等。其中大部分荧光素的激发和发射波长均可在仪器自带软件的染料信息库中找到。 1．观察步骤及仪器操作 根据实验要求制备样品完毕后。即可进行观察。基本步骤如下： ① 开启仪器电源及光源：一般先开启显微镜和激光器，再启动计算机，然后启动操作软件，设置荧光样品的激发光波长，选择相应的滤光镜组块。以便光电倍增管(photo multiplier tube，PMT)检测器能得到足够的信号结果。使用汞灯的注意事项同普通荧光显微镜。 ② 设置相应的扫描方式：在目视模式下．调整所用物镜放大倍数，在荧光显微镜下找到需要检测的细胞。切换到扫描模式，调整双孔针和激光强度参数，即可得到清晰的共聚焦图像。 ③ 获取图像：选择合适的图像分辨率，将样品完整扫描后，保存图

一、结构特点贝克曼（Beckmann）温度计是一种用来精密测量体系始态和终态温度变化差值的水银温度计。其主要特点如下：1.刻度精细刻线间隔为0.01℃，用放大镜可以估读至0.002℃，因此测量精密度较高。2.温差测量 由于水银球中的水银量是可变的，因测水银柱的刻度值就不是温度的绝对读数，只能在5～6℃量程范围内读出温度差△T。3.使用范围较大 可在－20℃至＋120℃范围内使用。这是因为在它的毛细管上端装有一个辅助水银贮槽，可用来调节水银球中的水银量，因此可以在不同的温度范围内使用。例如，在量热技术中，可用于冰点降低、沸点升高及燃烧热等测量工作中。二、使用方法这里介绍两种温度量程的调解方法：1.恒温浴调解法①首先确定所使用的温度范围。例如测量水溶液凝固点的降低需要能读出1℃至－5℃之间的温度读数；测量水溶液沸点的升高则希望能读出99℃至105℃之间的温度读数；至于燃烧热的测定，则室温时水银柱示值在2至3℃之间最为适宜。③根据使用范围，估计当水银柱升至毛细管末端弯头处的温度值。一般的贝克曼温度计，水银柱由刻度最高处上升至毛细管末端，还需要升高2℃左右。根据这个估计值来调节水银球中的水银量

本文已发表于中国肿瘤生物治疗杂志．2003，10（3）：221-222．【摘要】表皮生长因子受体（Epidermal Growth Factor Receptor EGFR）是原癌基因ｃ-erb-B1的表达产物。其过表达和突变体均与肿瘤发生发展有密切关系，基于此优点成为目前肿瘤治疗的新靶点。本文就EGFR与肿瘤的关系及其单抗治疗肿瘤的进展作一综述。【关键词】表皮生长因子受体（EGFR），单克隆抗体，肿瘤治疗【中图分类号】R730.5 ［文献标识码］ AEGFR monocolonal antibody and progression in tumor therapy【abstract】EGFR is encoded by the c-erb-B1 proto-oncngene. it is reported that the over-expressed and mutant EGFR have good relationship with tumor.Now it has become a new field in tumor therapy.This text will eluci

原理：在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳，继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。 用途：检测样品中是否含有基因的转录产物（mRNA）及其含量。 实验方法： [仪器、试剂、材料] （一）仪器 恒温水浴箱，电泳仪，凝胶成像系统，真空转移仪，真空泵，UV 交联仪，杂交炉，恒温摇床，脱色摇床，漩涡振荡器，分光光度计，微量移液器，电炉（或微波炉），离心管，烧杯，量筒，三角瓶，等。 （二）材料 总RNA样品或mRNA样品，探针模板DNA(25 ng)，尼龙膜 （三）试剂 NorthernMax Kit（Cat. # 1940，Ambion, Inc.），琼脂糖，DEPC, X光底片，底片暗盒，Random Primer， dNTP Mixture，111 TBq/mmol[a-32P]dCTP，Exo-free Klenow Fragment和10 X Buffer, Sephadex G-50,SDS，双氧水, 灭菌水等。 [方法与步骤] 1. 用具的准备： 180度烤器皿：三角锥瓶、量筒、镊子、刀片等4小时。 电

【 目的和原理 】 关于心电的产生、怎样传到体表和体表电位大小的确定等，已如前述。体表电位怎样导入心电图机描记和心电图的分析，现已有统一的规定和方法。正常心电图(electrocardiogram,ECG)因测量电极位置和导联方式不同，波形有所不同，但一般包括P、QRS和T三个波形和两个间期。P波反映心房去极化过程，QRS波群反映心室去极化过程；T波反映心室复极化过程；P-R（或PQ）间期为心房开始兴奋至心室开始兴奋的传导时间；S-T段为心室去极完毕到心室复极开始的时间，Q-T间期为心室兴奋开始去极化到完全复极到静息状态的时间。本实验的目的是学习人体心电图的描记方法和心电图波形的测量方法；了解人体正常心电图各波的波形及其生理意义。 【 实验材料 】 人；心电图机（electrocardiograph）（信号处理系统或二道生理记录仪）、检查床、导电膏、分规、放大镜、75％酒精棉球。【 实验步骤 】 1.准备 （1）让受试者安静、舒适平卧在检查床上，肌肉放松。 （2）将心电图机接

如何保证2天获得正确的克隆？ 基本操作步骤: Day 1： · A: PCR-->电泳回收-->酶切（1-2小时）--> PCR快纯试剂盒回收； · B: 载体DNA的酶切（1-2小时）--?如有需要，进行电泳回收。 · 注：A和B可同步进行节省时间，然后进行连接（设置载体自连对照），室温0.5-1小时，转化。 Day 2: · 观察过夜培养的平板上的克隆数：当目的连接板上的克隆数较较对照连接平板上的克隆数多3倍以上时， · 可以直接随机挑选2-3个克隆进行测序分析。 · 注：基本不用进行菌落PCR验证，一般阳性率在80%以上 常见问题： 在第二天，很多人都发现目的连接和对照连接的克隆数差不多一样， 即使用菌落PCR， 也很难挑选到阳性克隆，只好重做。 运气不好时，可能需要2周，甚至一个月才能得到正确的克隆。 如何避免上述问题？ 把握好保证克隆顺利的2点关键: 克隆的关键在于载体DNA和PCR产物的酶切，尤其是载体的完全酶切是克隆的关键。 但在实际的克隆工作中，对以下两点的把握是成败的关键： · 载

离心是蛋白质、酶、核酸及细胞亚组分分离的最常用的方法之一，也是生化实验室中常用的分离、纯化或澄清的方法。尤其是超速冷冻离心已经成为研究生物大分子实验室中的常用技术方法。 离心机(centrifuge)是实施离心技术的装置。离心机的种类很多，按照使用目的，可分为两类，即制备型离心机和分析型离心机。前者主要用于分离生物材料，每次分离样品的容量比较大，后者则主要用于研究纯品大分子物质，包括某些颗粒体如核蛋白体等物质的性质，每次分析的样品容量很小，根据待测物质在离心场中的行为(可用离心机中的光学系统连续地监测)，能推断其纯度、形状和相对分子质量等性质。这两类离心机由于用途不同，故其主要结构也有差异。 离心原理 将样品放入离心机转头的离心管内，离心机驱动时，样品液就随离心管做匀速圆周运动，于是就产生了一个向外的离心力。由于不同颗粒的质量、密度、大小及形状等彼此各不相同，在同一固定大小的离心场中沉降速度也就不相同，由此便可以得到相互间的分离。 离心力和相对离心力 溶液中的固相颗粒做圆周运动时产生一个向外离心力，其定义为： F =

常用细胞的中英文名对照表一、遗传变异细胞和正常细胞1. 小鼠类3T3 胚胎成纤维细胞 L929 成纤维细胞 3T3/e 成纤维细胞 Mo-MuLV/3T3 Mo-MuLV感染的3T33T3TK 成纤维细胞 NIH3T3 NIH Swiss小鼠胚细胞 3T6 胚胎成纤维细胞 PA317_胚胎成纤维细胞 Ana-1 巨噬细胞 SRSV/3T3 SRSV转化的3T3CTLL-2 T细胞2. 大鼠类BRL 肝细胞 LW-3 肝细胞 BRL 3A 肝细胞 NRK 肾细胞 L-6TG 肌母细胞3. 仓鼠类BHK 幼仓鼠肾 V79 中国仓鼠肺细胞 CHL 中国仓鼠肺细胞 CHO 中国仓鼠卵巢细胞 R1610 中国仓鼠体细胞 CHO~HdhFr~F_二氢叶酸还原酶缺陷型CHO4. 人类2BS 胚肺 XJH B淋巴细胞 HLF 胚肺 L-02 肝细胞 WI-38 胚肺 Chang Liver 张氏肝 SL-7 胚肺 QSG-7701 肝细胞 H.A. 羊膜 293 Ad5DNA转化的胚肾 WISH 羊膜 牙髓细胞5. 其它类CV-1(M) 非洲绿猴肾 EBTr 牛胚气管 VERO 非洲绿猴肾 MDBK