一 目的基因的克隆（以pshuttle-CMV质粒为例） 1. 选择适当酶切位点，进行酶切连接，将目的片段插入pshuttl-CMV质粒多克隆位点。 2. 重组质粒鉴定： 酶切鉴定或测序。 3. 重组质粒扩增，纯化并准备适量含目的基因的穿梭质粒。 4. 用PmeI单酶切线性化重组穿梭质粒，电泳鉴定质粒完全被切开。 5. 胶回收线性化质粒，以备共转化使用。 二 共转化 1 大肠杆菌BJ5183电转感受态制备 ① 从新鲜琼脂板上挑取单个BJ5183细菌，接种于LB培养基中，37℃振摇过夜。 ② 接种25ml过夜培养物于500ml LB培养基，37℃振摇，至OD600 达到0.4。 ③ 迅速将培养物置于冰浴中30min，至充分冷却。 ④ 将菌液转移至预冷的离心管中，4℃下以2500r/min离心15 min，弃培养液，回收细胞。 ⑤ 以10ml预冷的10%甘油洗涤沉淀，低温离心，共两次。 ⑥ 加约1ml（适量）预冷的10%甘油重悬沉淀，稀释悬液100倍，测量OD600，至稀释浓度为2-3×1010个细胞/

生物碱的鉴别 1．检品溶液的制备： 取粉碎的植物样品约2g，加蒸馏水20~30ml，并滴加数滴盐酸，使呈酸性。在60℃水浴上加热15分钟，过滤，滤液供作以下试验。 2．生物碱类成分的鉴别： 生物碱类成分（除有少数例外）均与多种生物碱沉淀试剂在酸性溶液（水液或稀醇液）中产生沉淀反应。操作如下： （1）取上备酸水浸液四份（每份1 ml左右即可）,分别滴加碘-碘化钾﹑碘化汞钾试剂﹑碘化铋钾试剂﹑硅钨酸试剂。若四者均有或大多有沉淀反应，表明该样品可能含有生物碱，再进行下项试验，进一步识别。 （2）取上备其余酸水浸液，加Na2CO3溶液呈碱性，置分液漏斗中，加入乙醚约10ml振摇，静置后分出醚层，再用乙醚3ml，如前萃取，合并醚液。将乙醚液置分液漏斗中，加酸水液10ml振摇，静置分层，分出酸水液，再以酸水液5ml如前提取，合并酸水液，如此酸提液四份，分别作以下沉淀反应。 a．碘化汞钾试剂（Mayer试剂）：酸水提液滴加碘化汞钾试剂，产生白色沉淀。 b．碘化铋钾试剂（Dragendorff试剂）：酸水提液滴加碘化铋钾试剂，产生桔红色或红棕色沉淀。 c．碘-碘化钾试剂（Wagn

原理：这一方法基于考马斯亮蓝G-250 有红蓝两种不同的形式。在一定浓度的乙醇及酸性条件下，可配成淡红色的溶液，当与蛋白质结合后，产生蓝色化合物，反应迅速而稳定。反应化合物在465-595nm处有最大的光吸收值，化合物颜色的深浅与蛋白浓度的高低成正比关系，因此可检测595nm的光吸收值的大小计算蛋白的含量。溶液：1）Bradford储存液100ml95%乙醇200ml88%磷酸350mgServaG蓝室温下长期保持稳定。2）Bradford工作液425ml双蒸水15ml95%乙醇30ml88%磷酸30ml Bradford储存液用滤纸过滤，保存于室温棕色瓶中，可保存数周，但在使用前需要过滤。3）配制1mg/ml牛血清蛋白（BSA）做标准曲线：取样品即可测量。注意事项：1、样品制备，样品制备是做好2-d 的关键，样品中离子浓度不能过大，最好用新鲜的样品提取蛋白质，如果不确定蛋白提取情况，建议先跑sds-page检验。2、上样量的问题， ipg 胶条是13 厘米的上样量在50ng-80ng之间，上样量不合适，丰度低的将会被丰度高的所遮盖。3、ipg 胶条ph 的选择，根据不同样品选择不同p

一、概况和工作原理1、概况 是快速全自动细菌鉴定/药敏系统，能对于临床大多数的革兰氏需氧和苛养厌氧菌；大多数革兰氏阴性的需氧和苛养厌氧菌能进行快速鉴定和药敏实验。它一次能同时做100份鉴定和药敏。2、细菌鉴定原理 BDPHOENIX100的鉴定部分由51个孔组成，采用传统生化 、酶一底物生化呈色反应和BD专利的荧光增强法相结合的原理。由一系列改良的发酵，氧化，降解，水解等反应的产物与各类指示剂（酸碱指示剂、酶联指示剂、荧光指示剂）反应，最后被实时仪器检测。3、药敏试验原理 BDPHOENIX100的药敏试验部分由85孔组成，其中84孔包被有抗生素，1孔为生长对照。试验采用微量肉汤二倍稀释法，采用传统比浊法及BD专利呈色反应（指示剂随细菌生长过程中的氧化还原反应而变色的反应）结合的双重检测。4、BDPHOENIX100的专家系统 能对以下的耐药机制进行监测：产ESBL 的肠杆菌科、万古霉素耐药（VRE）的肠球菌、高度的氨基糖肽类抗生素耐药（HLAR）的肠球菌、甲氧西林耐药（MRS）的葡萄球菌、产ß-内酰氨酶（BL）的葡萄球菌。二、基本结构1、菌液配置 CrystalSpec比浊仪、鉴定管

一、原理 ATP酶（adenosinetriphosphatase）可催化ATP水解生成ADP及无机磷的反应，这一反应放出大量能量，以供生物体进行各需能生命过程。它存在于生物细胞的多个部位，比如细胞质膜上，叶绿体类囊体膜上，对整个生命的维持有着重要的作用。在生物学研究中，常通过测定酶促反应释放的无机磷量或ATP的减少量以及pH变化等来测定ATP酶的活力。本实验通过测酶促反应过程中无机磷的释放量来测定叶绿体偶联因子ATPase的活力。偶联因子是分布在叶绿体类囊体膜表面的一种复合蛋白，它在光合作用能量转换反应中起重要作用。在正常情况下，膜上的偶联因子催化光合磷酸化反应（ATP合成）的速率很高，而水解ATP的活力是十分低的，但用二硫苏糖醇（DTT）、胰蛋白酶或较高温度等激活后，它水解ATP的活力可大大增加。因此，偶联因子的测定常用激活后的ATPase水解ATP的活力来表示。二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：新鲜菠菜10g，洗净，去叶柄和中脉备用。（二）仪器设备：1．分光光度计；2．水浴锅；3．照光设备（光源50，000Lx）；4．台式离心机。（三）试剂：1. Tris-HCl缓冲液1mo

1、将已经电泳确定的可回收的酶切产物在合适浓度的回收用琼脂糖凝胶进行电泳。最好换用新的电泳缓冲液10 × TAE（10 ×Tris-乙酸）。2、当溴酚蓝迁移至足够距离时（至少2 cm以上），在长波紫外灯下观察，用清洗过的刀片在目的片段前切下与目的片段同长，宽度适当（一般2 cm左右）的胶块。注意：①不要忘记在胶下垫一个新的塑料手套防止污染。②小心不要将回收胶切裂，同时注意与目的带相邻的切面要尽量平整。3、将切好的回收胶块放在回收胶槽内，在切去胶块处加入低熔点琼脂糖胶，待其凝固后将其小心放回电泳槽继续进行电泳。小心低熔点琼脂糖凝胶块与原回收胶块的交界面易断裂。4、待目的带完全进入低熔点琼脂糖胶后，在长波紫外灯下用清洗过的刀片切下含有所需DNA 带的凝胶条，置于新的灭菌的1.5 mL Eppendorf管中，加300 μl TE。5、65℃水浴10 min或更长使胶块完全融化。6、立即加入等体积（300~350 μl）Tris-Cl饱和酚（pH 8.0），摇晃混匀。7、12000 rpm离心5 min。8、小心将水相移到另一1.5 mL Eppendorf管中，加入2.5~3倍体积（780

相关专题 简并引物 最近想用“简并引物”设计点实验做做，上网找了点东东，还是发现了不少东西。特总结如下：主要包括简并引物设计 常用的几个方面及简并因为设计时的注意事项。 简并引物是指代表编码单个氨基酸所有不同碱基可能性的不同序列的混合物。密码子具有简并性，单以氨基酸顺序推测编码的DNA序列是不精确的，但可以设计成对简并引物，扩增所有编码已知顺序的核酸序列。用简并引物时寡核苷酸 中核苷酸序列可以改变，但核苷酸的数量应相同。 简并度越低，产物特异性越强，设计引物时应尽量选择简并性小的氨基酸，并避免引物3’末端简并，针对简并的混合引物已成功地用于未知靶DNA的扩增、克隆 和序列分析。 为了增加特异性，可以参考密码子使用表，根据不同生物的碱基使用偏好，减少简并性。次黄嘌呤可以同所有的碱基配对，降低引物的退火温度 。不要在引物的3'端使用简并碱基，因为3'端最后3个碱基的退火足以在错误位点起始PCR。使用较高的引物浓度(1μM到3μM)，因为许多简并混合物中的引物不是特异性针对目的模板。 同时，简并引物应选用简并程度低的密码子, 例

1、构建了载体，表达目的基因+GFP的融合蛋白（用的是PEGFP-N1），转染48小时后，处理细胞，百分之七十乙醇固定过夜，PI单染上流式测周期！由于，转染效率太低，通过了流式设门分别圈出了阴性和阳性细胞，再分别测其CELL周期变化！有几个问题，想和大家一起讨论一下：（1）在一些SCI文献中报道，通过MTT法，此目的基因表达，促进一些细胞（非我用的细胞系，我用的转染CELL，之前没有报道！）增殖，但是，从周期图来看，转进去的阳性CELL，反而停在G0/G1期了，与阴性CELL相比，增殖的S+G2/M期CELL明显减少！这种矛盾怎么解释呢?（2）难道是融合的GFP蛋白影响了目的蛋白的空间构象，从而影响了生物特性！同一学校有人构建了同一目的基因的载体,表达非融合蛋白(带了HIS标签,非GFP蛋白)，稳定转染了和我同样的细胞系，流式测周期,结果是与对照相比，转染的℃ELL S+G2/M的细胞明显增多！和我的结果不一样！GFP细胞上流式最好不要用乙醇固定，gfp很容易透出胞外的，导致阳性率细胞很少。建议多聚甲醛固定，然后透化处理。2、My protocol for GFP-PI Flow cy

目的要求 1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 基本原理 细胞的吞噬作用在单细胞动物是摄取营养物质的方式，在高等动物内的巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，是机体非特异性免疫功能的重要组成部分。巨噬细胞是由骨髓干细胞分化生成，当病原微生物或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，便向异物处聚集，巨噬细胞可将之内吞入胞质，形成吞噬泡，然后在胞内与溶酶体融合，将异物消化分解。吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形成；免疫抑制剂环磷酰胺（CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也有影响。 实验用品 1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、载玻片、盖玻片、吸管等 2． 试剂 ： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液；可溶性淀粉6.0g加水100ml煮沸备用。 3．材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液 方法与步骤

相关专题 一、材料与仪器 30%丙烯酰胺溶液;1.5mol/L Tris-HCl分离胶缓冲液，pH8.8;1.0mol/L Tris-HCl浓缩胶缓冲液，pH6.8;电泳缓冲液，pH8.3;10%SDS溶液;10%过硫酸铵溶液;样品处理液;染色液;脱色液;电泳玻璃板，电泳电源架，电泳槽，电泳仪 等;蛋白Mark。 二、方法与步骤 1)分离胶和浓缩胶配制 按下表比例分别配制分离胶和浓缩胶： 聚丙烯酰胺 组成 试剂： 体积( ml ) 分离胶 浓缩胶 H2 O 2.8 3.4 Acrgl-bis 4.5 0.83 Tris-Hcl 2.5 ( pH8.8 ) 0.63 ( pH6.8 ) SDS ( 10 %) 0.100 0.050 Ap ( 10 %) 0.100 0.050 TEMED 5 μ l 5 μ l 2)凝胶板的准备 a)

1.目的与原理实验目的：学习DNA的Feulgen染色方法，观察染色结果，了解反应原理。实验原理：DNA经弱酸(1mol／L HCl)水解，其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的键打开，使脱氧核糖的一端形成游离的醛基，这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应，形成紫红色的化合物，使细胞内含有DNA的部位呈紫红色阳性反应。紫红色的产生，是由于反应产物的分子内含有醌基，醌基是一个发色团，所以具有颜色。对照组预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA而得到阴性反应，从而证明了Feulgen反应的专一性。2.实验用品材料：（1）．Carnoy液固定的鼠肝石蜡切片（2）．Carnoy液固定的洋葱根尖或蚕豆根尖切片。试剂：（1）．Carnoy固定液：3份95％酒精加入1份冰醋酸。（2）．1 mol／L HCl：取比重1．18的浓HCl 82．5ml，加水至100ml。（3）．Schiff试剂先将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1g，充分搅拌，有助于溶解。待先将200ml蒸馏水煮沸，由火上取下，加入碱性品红1g，充分搅拌，有助于溶解。待亚硫酸钾或偏亚硫酸钠充分振荡后盖

问：谁有a一醋酸萘酯酶（ANAE)染色法的具体步骤，我们这里查不到，还望各位大侠不吝赐教！答：中性非特异性脂酶(α—NAE)染色[方法学] 酯酶染色的方法很多，根据与pH底物等不同作用，将常用的酯酶染色法分为两大类，即特异性酯酶染色和非特异性酯酶染色。后者又可分为3类：①中性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酚酯酶、乙酸菜酚酯酶和乙酸菜酚AS-D酯酶。②酸性非特异性酯酶染色法：α—乙酸菜酯酶和α—丁酸菜酯酶。②碱性非特异性酯酶染色法：α—丁酸菜酯酶。中性非特异性酯酶染色是单核细胞与粒细胞白血病区别的重要方法，一般实验室可选用此法。[原理] α—乙酸萘酚经酯酶水解产生萘酚，萘酚与重氮盐偶联，生成灰黑或棕黑色沉淀物，定位于胞浆中。[试剂] 1、α—醋酸萘酯丙酮液：α—醋酸萘酯1g，加丙酮和蒸馏水混合液100m1，溶解后贮于磨口带塞三角瓶内，4℃保存，可使用半年。2、pH7．4磷酸盐缓冲液：0．07MNa2HPO4(即Na2HPO4)3、基质液：磷酸盐缓冲液82ml，缓慢滴加α-醋酸萘酯丙酮液1．6ml(滴速约每分钟40滴)，边加边用力振摇。根据5分钟后，加坚牢蓝B80mg，剧烈振摇10分钟，立

一、培养基的历史体外培养（in vitro culture）包括：组织培养（tissue culture）、细胞培养（cell culture）、器官培养（organ culture）。顾名思义，就是将活体结构成分（如活体组织、活体细胞或者活体器官等）从体内或其寄生体内取出，放在类似于体内生存环境的体外环境中，让其生长发育的方法。广义组织培养与体外培养同义。体外培养已经历了约一百年的发展历史，但发展初期进程比较缓慢，没有引起很多学者的重视。直到上世纪50年代后期，体外培养技术才广泛应用于生物学研究的各个领域，使这项技术得到飞速发展。现在体外培养已成为细胞工程、基因工程、抗体工程的重要组成部分。细胞培养指从生物机体取出部分组织分散成单个细胞或直接从机体取出单个细胞，也可把体外培养细胞分散成单个细胞在体外条件下培养，细胞能继续存活与增殖。培养过程中细胞不再形成组织。发展与完善细胞培养技术围绕防止污染、改进培养方法、设计新型培养容器、设计不同的培养液等几个方面进行。1885年Roux温生理盐水培育鸡胚组织；1903年Jolly，1906年Beebe等发明了盖片悬滴培养；1907年Harris

[摘要] 目的 观察D-半乳糖连续皮下注射对小鼠皮肤衰老指标的影响。 方法 3月龄KM雌性小鼠60只,随机分为空白对照组(注射生理盐水)、D-半乳糖低剂量组(80mg/kg)和D-半乳糖高剂量组(1000mg/kg),连续每日背部皮下注射42天后,观察小鼠皮肤中与衰老相关的生化指标及组织病理学变化,并用计算机图像分析系统定量分析。 结果 　高剂量组小鼠真皮厚度〔(624.5±48.5)μm〕较对照组〔(839.3±58.4)μm〕显著变薄(P<0.05),胶原纤维减少,排列疏松,弹力纤维总面积亦显著减少(P<0.05);高剂量组皮肤中超氧化物歧化酶(SOD)活性〔(131.2±11.5) U/ml〕、羟脯氨酸含量〔(0.57±0.13)μg/mg〕显著低于对照组的〔(178.1±20.7) U/ml、(0.74±0.17)μg /mg,P<0.05〕,丙二醛(MDA)含量增加〔(9.4±1.5)nmol/g和(6.8±1.5)nmol/g,P<0.05〕;而低剂量组上述改变则不显著。

【摘要】 肽核酸(PNA, peptide nucleic acid)是一种全新的DNA类似物，于1991年由Dr.Nielsen, Dr.Egholm,Dr.Berg,和Dr.Buchardt发明。该分子的特点是以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，其余的与DNA相同。PNA可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构。 肽核酸(PNA, peptide nucleic acid)是一种全新的DNA类似物，于1991年由Dr.Nielsen, Dr.Egholm,Dr.Berg,和Dr.Buchardt发明。该分子的特点是以中性的肽链酰胺2-氨基乙基甘氨酸键取代了DNA中的戊糖磷酸二酯键骨架，其余的与DNA相同。PNA可以通过Watson-Crick碱基配对的形式识别并结合DNA或RNA序列，形成稳定的双螺旋结构。由于PNA不带负电荷，与DNA和RNA之间不存在静电斥力，因而结合的稳定性和特异性都大为提高；不同于DNA或DNA、RNA间的杂交，PN

一、原理过氧化氢酶属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。R（Fe2+）+H2O2⇒R（Fe3++OH-）R（Fe3++OH-）2+H2O2⇒R（Fe2+）2+2H2O+O2据此，可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量的H2O2溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的H2O2。5H2O2+2KMnO4+4H2SO4⇒5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4即可求出消耗的H2O2的量。二、仪器和用具研钵；三角瓶50ml 4个；10ml酸式滴定管；恒温水浴锅；容量瓶25ml 1个。三、试剂10%H2SO4；0.2mol/L磷酸缓冲液PH7.8；0.1mol/L高锰酸钾标准液：称取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml，用0.1mol/L草酸溶液标定；0.1Mol/L H2O2：市售30%H2O2大约等于17.6Mol/L，取30%H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml，用标准0.1Mol KMnO4溶液（在酸性

目的：制备小鼠角叉菜胶性足肿模型，筛选抗炎药的抗炎作用关键词:小鼠 角叉菜胶 足肿 炎症 抗炎原理:角叉菜胶为常规致炎剂,小鼠足跖皮下注射能引起炎症渗出,使致炎侧重量增加,称取2侧足重的差别,即可考察炎症的程度和抗炎药的作用.主体内容:一、模型制备　体重18～22 g的昆明种小鼠，♀♂不拘，随机分组，左后肢分别im 受试药、地塞米松 2 mg/kg或生理盐水（或溶媒），于给药后30 min时在每鼠右后足跖sc 1%角叉菜胶30 μl致炎。5 h后处死小鼠，从踝关节处对称剪下鼠足，称重，以左、右足重量差作为鼠足肿胀度。二、注意事项：1.注射角叉菜胶后5 h肿胀度约70 mg, 24 h时肿胀度可达100 mg以上。2.角叉菜胶注射后12 h时给抗炎药，24 h时取足称重，地塞米松 1 mg/kg im未显示出疗效。致炎前给药，地塞米松2 mg/kg 抑制率达40%。3.剪炎足以髁关节处骨性标志为准，务必左右对称，左右正常足剪下称重左右差应<5%。4.Sc 角叉菜胶用一次性1 ml注射器，针头为5#。注射时从远心端进针，沿正中线皮下水平进针2 mm。5.角叉菜胶研成粉细，用盐水混悬，

本人从事免疫组化实验做了好多年了，刚开始做这方面实验，出现了不少问题，最让人头疼的就是非特异性背景染色问题。经过多年的摸索和亲身实验，摸索出问题的症结所在，针对免疫组化中存在最常见的非特异性背景染色问题，给予一些本人的见解和经验总结，希望对做科研的工作者们一些帮助和指导，也希望各位专业人士能给予批评指正。当然这些经验总结和问题的，离不开丁香园、小木虫、中华病理网以及舜百公司专业病理人员的指导和帮助，是这些网站以及专业公司的帮助下，让我受益颇多。 免疫组织化学技术是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应，对组织或细胞内抗原或抗体物质定性和定位的组织化学技术。 组织的非特异性染色的机理很复杂,所以控制非特异性背景染色也不容易, 现简单介绍一下： 一、非特异性染色的识别： 常出现在组织边缘、胶原纤维及血浆渗出处，坏死组织及固定不良的组织中心处。表现为弥漫性，均匀性的背景染色。也可以是随机分布的阳性反应产物点、团或块状。 二、非特异性染色的原因及避免方法： 1. 静电吸附 抗体是一种带负电荷的球蛋白，容易和带正电荷的组织相结合。 在用第一抗体前加制备第二

一．概要 对蛋白质（抗原）的纯化率为1000~10000倍。 快速纯化抗原，层析柱一般可重复使用。 可获得纯化的抗原。 不能用于定量测定。 纯化效果取决于待纯化抗原的浓度和抗体的亲和力。 需要适当纯化的抗体。 二．操作步骤 基本步骤为：交联 → 结合 → 洗脱 1. 交联 ①将抗体结合到蛋白A或蛋白G微珠上。一般情况下，每毫升湿的微珠大约可以结合2mg单克隆抗体或经亲和层析纯化的多克隆抗体。将抗体和蛋白A或G微珠混合成为稀薄的匀浆，在总量为10m1的溶液中加入大约1ml微珠，室温孵育1 h，轻轻摇动混匀。 ②用10倍体积的 0.2mol/L硼酸钠(pH9.0)洗涤微珠2次，每次以3000′g离心2min，或10000′g离心30s。 ③用10倍体积的0.2mol/L硼酸钠(pH9.0)重悬微珠，留取相当于10ml湿微珠的样品。加入足量的二甲基庚二酸酯(固体)至微珠匀浆中，使终浓度为20mmol/L。 ④室温孵育30min，使结合在蛋白A或G微珠上的抗体与微珠基质发生交联。并轻轻混匀。留取相当于10ml交联微珠的样品。 ⑤用0.2mol/L乙醇胺（pH8.

一、编号实验动物常需要标记以示区别。编号的方法很多，根据动物的种类数量和观察时间长短等因素来选择合适的标记方法。（一）挂牌法：将号码烙压在圆形或方形金属牌上（最好用铝或不锈钢的，它可长期使用不生锈），或将号码按实验分组编号烙在栓动物颈部的皮带上，将此颈圈固定在动物颈部。该法适用于狗等大型动物。（二）打号法：用刺数钳（又称耳号钳）将号码打在动物耳朵上。打号前用蘸有酒精的棉球擦净耳朵，用耳号钳刺上号码，然后在烙印部位用棉球蘸上溶在食醋里的黑墨水擦抹。该法适用于耳朵比较大的兔、狗等动物。（三）针刺法：用七号或八号针头蘸取少量碳素墨水，在耳部、前后肢以及尾部等处刺入皮下，在受刺部位留有一黑色标记。该法适用于大小鼠、豚鼠等。在实验动物数量少的情况下，也可用于兔、狗等动物。（四）化学药品涂染动物被毛法：经常应用的涂染化学药品有涂染红色：0.5%中性红或品红溶液。涂染黄色：3-5%苦味酸溶液。涂染黑色：煤焦油的酒精溶液。根据实验分组编号的需要，可用一种化学药品涂染实验动物动物背部被毛就可以。如果实验动物数量较多，则可以选择两种染料。该方法对于实验周期短的实验动物较合适，时间长了染料易退掉；对于哺乳期