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白细胞计数

【参考值】自动计数仪法为:男性4.1~10.4×109/L,女性4.1~10.8×109/L。【分析变异】自动计数仪法的变异系数CV=4%。【生理学变异】1、升高 婴儿约高150%,吸烟者约高37%,妊娠约升高20%,昼夜节律(晚上)约高16%,饮酒约升高14%,4~10岁的儿童约高12%,肌肉活动约升高12%,女性黄体期约高9%,周年节律约升高7%。2、降低 绝经约降低10%,月经期约低15%,纯种黑人约降低35%。【药物影响】1、升高 能引起嗜酸性白细胞增加或能引起过敏反应导致嗜酸性白细胞增加从而导致WBC总数升高的药物有苯妥英钠、甲基多巴、氨苯喋啶、链激酶、碘化物、碘化钾、二甲氧苯青霉素钠、新生霉素、万古霉素、卡那霉素、紫霉素、异烟肼;别嘌呤醇、氯磺丙脲、氨苄青霉素、先锋霉素I、卷须霉素、氨基水杨酸、去郁敏和金。乙醚和氯仿引起的WBC升高为麻醉的正常反应。氟烷引起过敏反应,严重的副醛中毒均可致WBC增加。丙咪嗪、苯印二酮和强的松龙可引起一时性白细胞增多。阿托品可引起儿童的WBC增多。洋地黄(少数病例)、红霉素、汞化合物,铜(毒性所致显著升高),竹桃霉素(应用2周后偶然发生),二性

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新鲜组织冻存SOP

(1)冰冻当天进入医院局域网,查询当日手术间冰冻安排表,大致了解当日的冰冻情况,并提前通知当日负责冰冻送片的初检医生,避免遗漏。(2)取材前确定标本冰冻报告已发出,核对标本病理号、住院号,准确记录其病理号、住院号、姓名(至少有其中2项)于冻存组织登记本上。(3)在新鲜标本专用取材台上取材,并使用专用取材器具,同一天使用频繁时,每取完一例标本器具应清洗后浸泡于消毒液中,以防止其他标本污染。(4)在不影响外检取材的前提下,充分取材。良性病变取足够量病灶,恶性病变取足够量病灶及癌旁正常组织(癌旁正常组织远离恶性病灶应尽量>2cm)。(5)将所取标本切割成直径1~2mm的组织块,不同标本及同一标本不同部位装入相应冻存管中,做好标记(注意顺序,切取标本、夹放冻存管都应遵循“先正常-后肿瘤”的顺序,避免组织污染)。(6)将标本编号,并用Marker笔仔细标注于冻存管管盖及管壁上,同时将每管编号、内容物、取材日期记录于登记本上。(7)将冻存管装入冻存袋,戴上棉线手套和防护面罩,迅速放入液氮罐中30~60秒速冻,至冻存组织完全冻住,取出待液氮完全挥发(注意动作轻柔,避免液氮溅洒)。(8)将经液氮

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噬菌体的检查及效价测定

一、目的: 1. 了解噬菌体效价的含义及其测定原理。 2. 学会检查噬菌体的方法。 3. 掌握用双层琼脂平板法测定噬菌体效价的操作技能。 二、原理: 噬菌体是一类专性寄生于细菌和放线菌等微生物的病毒,其个体形态极其微小,用常规微生物计数法无法测得其数量。当烈性噬菌体侵染细菌后会迅速引起敏感细菌裂解,释放出大量子代噬菌体,然后它们再扩散和侵染周围细胞,最终使含有敏感菌的悬液由混浊逐渐变清,或在含有敏感细菌的平板上出现肉眼可见的空斑──噬菌斑。了解噬菌体的特性,快速检查、分离,并进行效价测定,对在生产和科研工作中防止噬菌体的污染具有重要作用。 检样可以是发酵液、空气、污水、土壤等(至于无法采样而需检查的对象,可以用无菌水浸湿的棉花涂拭表面作为检查样品)。为了易于分离可先经增殖培养,使样品中的噬菌体数量增加。 采用生物测定法进行噬菌体检查,约需12h左右,因而不能及时判断是否有噬菌体污染。通过快速检查可大致确定是否有噬菌体污染,以采取必要的防治措施。根 据正常发酵(培养)液离心后菌体沉淀,上清液蛋白含量很少,加热后仍然清亮;而侵染有噬菌体的发酵(培养)液经离心后其上清液中因

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聚丙烯酰胺凝胶电泳分离过氧化物同工酶

一、目的同工酶是指能催化同一种化学反应,但其酶蛋白本身的分子结构组成却有所不同的一组酶。研究表明,植物在发育过程中,所含同工酶的种类和比例都不相同,它们与植物的遗传、生长发育、代谢调节及抗性等都有一定关系,因此作为基因表达的产物,测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具,在植物的种群、发育及杂交遗传的研究中有重要的意义。过氧化物酶是植物体内普遍存在的、活性较高的一种酶。它与呼吸作用、光合作用及生长素的氧化等都有关系。在植物生长发育过程中它的活性不断发生变化,测定这种酶的活性或其同工酶,可以反映某一时期植物体内代谢的变化。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定同工酶,方法简便,灵敏度高,重现性强,测定结果便于观察、记录和保存。本实验采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术,分离小麦幼苗过氧化物酶同工酶,根据酶的生物化学反应,通过染色方法显示出酶的不同区带,以鉴定小麦幼苗过氧化物酶同工酶。通过本实验要掌握电泳技术的原理、方法、装置、凝胶配制等知识,熟悉主要的操作过程,同时对同工酶有一个感性的认识。二、原理1.电泳带电粒子在电场中向与其自身带相反电荷的电极移动,这种现象称为电泳。近几十年来,电泳作为一项有效的

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胶体金的制备

胶体金是氯金酸在还原剂作用下,聚合成一定大小的金颗粒,形成带负电荷的疏水胶溶液。根据实验需要,可以利用不同的还原剂制备成直径大小不同的胶体金颗粒。 一、白磷还原法试剂及材料 1. HAuCl4 水溶液 2. 0.2mol/L K2CO3 3. 白磷乙醚饱和液:在水中将白磷切成小片,用镊子快速取出,在滤纸上吸干后,放入小瓶,迅速加入10ml纯乙醚,塞紧瓶口,轻轻摇动至少2h,使乙醚充分饱和,倒入玻璃离心管中离心,弃去沉淀物及未溶解的白磷。取上清贮存于密闭的棕色瓶内。 操作方法一 1. 取0.01%HAuCl4 水溶液100ml,用0.2mol/L K2CO3 调节至pH7.2,加热煮沸; 2. 在刚开始煮沸时,迅速加入0.5ml白磷乙醚饱和液,摇匀,至溶液呈橙红色为止。 3. 此法制备的胶体金颗粒直径为3nm,大小较均一。 操作方法二 1. 取1.5ml 0.6%HAuCl4水溶液和1.4ml 0.2mol/L K2 CO3加至120ml双蒸水中; 2. 再加1ml 白磷乙醚混合液,室稳搅拌15min; 3. 煮沸,回流至溶液由棕红色变为红色,约5min;

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一种快速鉴定细菌的方法

1980年代之前,细菌的分类和鉴定主要依靠形态学特征、培养特征、生理生化特征和免疫学反应进行。这些方法在细菌分类鉴定中发挥过重要作用,也存在着鉴定准确性差、繁琐耗时等缺点。随着分子生物学的飞速发展,特别是聚合酶链式反应技术(PCR)的发明,细菌的分类鉴定发生了重大革新,开始进入分子水平,一批分子鉴定方法也随之产生。其中16S rDNA基因的同源性分析已经成为细菌种属鉴定的标准方法,在细菌的分类研究中起着重要的作用。16S rDNA基因存在于原核生物中。它由保守区和可变区组成,保守区为所有细菌所共有,细菌间没有差别;可变区在不同细菌之间存在不同程度的差异,具有属或种的特异性。细菌的16S rDNA序列长约1.6kb左右,其序列变化速度与进化速率相适应,因此被广泛用于种属鉴定。结合完善的数据库,16S rDNA序列分析可以快速准确的对微生物进行种属鉴定,确定微生物在进化中的位置。根据16SrDNA序列同源性分析建立细菌系统发育分类的准确性和重要性已经被越来越多的细菌分类学者所认识和接受。扩增细菌的16S rDNA基因需要其染色体DNA作为模板。目前较常用的细菌染色体DNA 的小量制备方法是

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引物设计软件Oligo使用方法介绍

作为目前最好、最专业的引物设计软件,Oligo的功能很强,在这里我们介绍它的一些主要功能,如:普通引物对的搜索、测序引物的设计、杂交探针的设计以及评估引物对质量等等。在正式进行引物设计前,我们首先面临的一个任务就是向Oligo程序导入模板序列,根据不同的实验情况,导入模板有三种方法:1、直接用键盘输入:a、点击file菜单中的New Sequence 浮动命令,或直接点击工具栏中的New Sequence命令,进入序列展示窗口;b、此时即可键入DNA序列;c、如果需要的话,Oligo提供碱基回放功能,在边键入时边读出碱基,防止输入错误。点击Edit菜单中的“Readback on”即可。2、利用复制和粘贴:当我们序列已经作为TXT文件存在或其它oligo不能直接open的文件格式,如word文件。html格式,这个功能就显得很有用了。在相应文件中复制序列后在序列展示窗口粘贴,oligo会自动去除非碱基字符。当序列输入或粘贴完成后,点击Accept/Discard菜单中的Accept浮动命令,即可进入引物设计模式。3、如果序列已经保存为Seq格式或者FASTA,GenBank格式时,ol

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VSVG假型逆转录病毒的生产

带有水疱性口炎病毒(vesicularstomatitisvirusG,VSV-G)蛋白的假型逆转录病毒载体已被证明可将基因高效递送到各种细胞中。其效率受相对细胞的生长速度以及细胞膜上的磷脂酰丝氨酸的水平影响。 一、材料与试剂 1. DMEM(GIBCO,11995-065)2. 胎牛血清FBS(GEMBIO900-108)3. 青霉素/链霉素溶液(GIBCO15140-122)4. NaCl(SIGMAS7653)5. HEPES(SIGMAH7523)6. Na2HPO4(SIGMAS7907)7. CaCl2(SIGMAC5080)8. 氯喹,Chloroquine(SIGMAC6628)9. Nabutyrate(SIGMAB5887)10. Gag/pol(CellbiolabsRV-111)11. VSVG和逆转录病毒载体(Clontech631512) 二、设备 1. 24孔板 2. 离心机 3. 水浴 三、实验步骤 1. 第1天:将健康的293细胞置于10 cm 组织培养板中。(10 ml 培养基中每孔7×106细胞)2

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低温高速离心机使用说明及注意事项

一、使用说明1.此仪器无论何时使用,需经管理员同意。2.每次仪器使用都需登记。3.离心样品密度要相同,样品体积要求离试管口3mm处4.将配平、密度相同、管壁干燥的离心管对称放入吊桶内,旋。紧对应的吊桶帽,悬挂到对应的吊桶架上,空吊桶也要悬挂。5.打开仪器电源开关。6.用脚踩住踏板,同时用手按住指定位置,门盖将自动打开。7.将悬挂吊桶的转头向下笔直轻放于驱动轴套上,要确保牢固性。8.旋紧转头盖。9.手按住指定位置将门盖压下去。10.设置离心参数:转头型号、转速、温度、时间,升降速度频率。11.参数设置确认无误,按ENTER,START 。12.离心机达到设定转速5分钟后,使用者方可离开。离心中途需观察仪器运转是否正常。13.离心结束(或按STOP结束运行),转头停止运转后,打开门盖,旋松转头盖,将转头取 出放到专用架上。14.取出吊桶,旋松吊桶帽,将样品取出。15.吊桶及吊桶帽敞开放在指定位置,如有漏夜,取出密封圈,洗净后再倒置放在桌布上。16.关闭仪器电源。17.腔体内冷凝水擦净。18.腔体温度与室温相同时关闭门盖。注意事项:冷冻离心需要预冷时,离心机在所需温度下每分钟2000转离心3

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FISH和PRINS技术

一、荧光原位杂交(FISH) 是一种简单、敏感、而容易操作的方法,结果迅速,并能在同一标本上检测多个不同的基因,可应用于细胞培养、染色体分裂像、冰冻切片和石蜡切片。 FISH技术是利用特异的DNA探针,标记了生物素,地高辛、或荧光素,对检测细胞进行DNA-DNA原位杂交,并用荧光法显示。 FISH实验步骤 试剂配制: (1)变性液(70%甲酰胺 + 2×SSC,pH7.0):4 ml 20×SSC;8 ml 蒸馏水;28 ml 甲酰胺。每次新鲜配制。 (2)杂交后洗涤液: 20×SSC 4 ml;蒸馏水16 ml;甲酰胺20 ml。每次新鲜配制。调节pH前升至室温。 1. 用硅化玻片,石蜡切片,60℃烤片过夜。二甲苯脱蜡至酒精,斜置切片,空气中干燥。2. 蛋白酶处理: (1)每个染色缸40 ml 蛋白酶K消化溶液,配制方法如下:2×SSC 40 ml 倒入Facal管,在水浴槽中预热。将消化酶液加入管内,摇动直到酶溶解。 (2) 37℃水浴槽中预热染色缸和蛋白酶K溶液。37℃孵育20 min。 (3) 2×SSC在室温下漂洗切片3次,每次1 min。

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如何使PC12细胞贴壁更牢

丁香园ivy_mayan的问题:在做PC12的H2O2损伤模型时,由于细胞经过H2O2的冲击,大多活性不好了,所以贴壁性变差,结果在测MTT时由于要去掉上清液,细胞会被一同吸走,这样所测吸光值就不准了,请问大家,怎么可以使PC12贴壁更牢(即使经过损伤冲击)?丁香园george的观点:1.细胞培养板的选择:一定要用进口的培养板,国产的大多贴不好。2.尽量使细胞处于良好的状态,包括培养液要新鲜配制备,注意PH值,提高牛血清的浓度。丁香园midas的观点:1.用PLL或鼠尾胶包被扳子!2.H2O2浓度越大,作用的时间应该越短。3.MTT时,不必要完全吸去上清液(当然每个孔吸出的量应该一样多),尽量不要洗掉细胞。丁香园drcici的观点:细胞的贴附状态涉及很多方面,细胞的类型,细胞本身的状态,培养条件以及培养板等因素都可以影响细胞的贴附。除了以上高手的经验外,我想还要注意PC12的密度,一般良好状态的PC12生长迅速,可以在2~3天就可以长满一个中皿,如果你用96孔板的话,长满的时间应该更短。但是长得过满的细胞状态并不好,容易脱落,不知你的PC12是以何种密度接种的,什么时间加双氧水?最好是

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RNA提取心得(丁香园原创)

一、组织RNA提取1. 最好新鲜组织,这样RNA提取的效果比较好,这是肯定的。2. 如果不是新鲜的(最好在半年之内,-80°或者液氮中冻存的)组织,注意不要反复冻融,从冰冻状态拿到0-4°,注意不要拿到常温,待组织解冻后,用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织,称重后,放到预冷的匀浆器中,然后加入一定量的TRIZOL试剂,然后匀浆。注意:速度不要太快,要匀一会停一会,否则由于摩擦产热,RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标本的RNA提取,也要这样做,更不能急。后面的步骤和细胞RNA提取一样。二、培养细胞的RNA提取1. 贴壁细胞,需要先用胰酶消化后,然后收集到离心管中,离心,去上清,然后用PBS多洗2-3次,以去除多余的胰酶。悬浮细胞,直接用吸管或者加样枪吹打评壁,以使细胞基本可以被吹下来。然后离心去上清,不需要用PBS洗。2. 然后将少量细胞悬液转移到预冷的DEPC泡过的1.5毫升EP管中,然后加入一定量的TRIZOL(细胞多的话加1毫升,细胞少的话加0.5毫升就可以),然后用枪头吹打混匀5-10分钟。(如果有时间就继续往下做,如果没有时间,可以把加了TRIZOL后的细胞裂解液冻存到-80

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金磁免疫层析快速检测技术

一、免疫层析技术原理 免疫层析法 (Immunochromatography)是九十年代兴起的一种基于免疫胶体金技术的快速诊断技术,实质上是蛋白质等高分子被吸附到纳米金颗粒表面的包被过程。 吸附机理可能是纳米金颗粒表面负电荷,与蛋白质的正电荷基团因静电吸附而 形成牢固结合,而且吸附后不会使生物分子变性,由于金颗粒具有高电子密度的特性,在金标蛋白结合处,在显微镜下可见黑褐色颗粒,当这些标记物在相应的配体处大量聚集时,肉眼可见红色或粉红色斑点,因而用于定性或半定量的快速免疫检测方法中。 由于球形的纳米金粒子对蛋白质有很强的吸附功能,可以与葡萄球菌A 蛋白、免疫球蛋白、毒素、糖蛋白、酶、抗生素、激素、牛血清白蛋白等非共价结合,因而在基础研究和实验中成为非常有用的工具。 免疫层析是以NC膜为载体,利用微孔膜的毛细管作用,使滴加在膜条一端的液体慢慢向另一端渗移,如同层析一般。金磁微粒复合物干片粘连在近NC膜条下端(C),膜条测试区(T)包有特异抗体,当试纸条下端进入液体标本样中,下端吸水材料吸取液体向上端移动,流经C处时,使干片上的金磁微粒复合物复溶,并带动其向膜条渗移,

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RNA 的提取

RNA 提取物的完整性是进行电泳的主要目的之一。在有EB 存在时,完整未降解的RNA制品电泳图谱应可清晰看到18S rRNA、28S rRNA 两条带,也应当能看到一条由tRNA、5.8SrRNA 和5S rRNA 组成的、较模糊迁移较快的条带,且28S rRNA 条带亮度应为18S rRNA的1.5-2 倍。 1、试剂耗材的准备: (1) 试剂: A. RNase-Free 水:配0.01 % (v/v)的Diethylpyr℃arbonate(DEPC)溶液,室温保持过夜,次日高压灭菌后,- 20 ℃ 保存。 B. 氯仿 (Chloroform),异丙醇(Isopropyl alcohol),分子生物学级别C. 75% 乙醇 (用 DEPC-treated 水配制) (2) RNase 去除的耗材:用0.01% (v/v) DEPC 溶液完全浸泡过夜,高压灭菌后烘干。 2、实验步骤: (1) 准备分离RNA 的细胞: I. 悬浮细胞: 收集细胞,离心200 g,5 min。吸出培养液。每10

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大鼠灌注取脑标准操作规程

1、多聚甲醛的配置:一般方法为:4% 多聚甲醛PBS缓冲液配法:称取 40g PFA 溶于装有 500ml DEPC 水的玻璃容器(烧杯或烧瓶)中,持续加热磁力搅拌至60~65℃,使成乳白色悬液。用 1.0mol/L 的 NaOH 值至 7.0,使呈清亮状(滴加),再加入约 500ml PBS,充分混匀(在冰浴或冷水浴中),可再检测一下 pH,过滤后定容至 1000ml,室温或 4℃ 保存备用。2、我们用的方法:加热至 60~65℃ 固然融解的快,不过容易挥发,气味难闻,不是好的选者。我们是这样做的,感觉不错,在此强烈推荐:先配好pbs,称好相应的多聚甲醛,37c 水浴或温箱密封放置 2 天,就能全溶。3、麻醉后开胸:暴露充分些容易心脏穿刺及剪开右心耳。箭头所指为右心耳。4、心尖插入灌注针头,剪开右心耳,开放静脉血。5、夹闭腹主动脉:只灌注上肢及头脑,固定的好又快,又省多聚甲醛。多聚甲醛用 100ml 以下即可。6、先灌注生理盐水约 100 ml,见到老鼠两前肢及两肺变白可改灌注多聚甲醛。7、灌注成功的标志:刚开始灌注时老鼠前肢剧烈抽动(下肢不抽动证明腹主动脉夹闭完全);前肢及颈部僵硬

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农杆菌感受态细胞的制备和转化子的验证

一.农杆菌感受态细胞的制备 (同大肠杆菌质粒DNA的提取),然后将其转化大肠杆菌,再提取大肠杆菌的质粒DNA进行酶切鉴定。取-70℃保存的EHA105于含有50μg/ml链霉素平板划线,28℃培养2天。挑单菌落接种于5ml YM(0.5g/L KH2 PO4 ,10 g/L Mannitol,2 g/L L-Glutamine,0.2 g/L NaCL,0.2 g/L MgSO4 ,0.3 g/L Yeast extract,PH7.0)液体培养基中,220rpm,28℃振荡培养18 hr 左右。将5ml菌液转接于100ml YM液体培养基中,28℃,220rpm,振荡培养至OD600 =0.5。转入无菌1.5ml的EP管,5000g离心5min,去上清液。加入1ml预冷的0.1M的CaCl2 溶液,轻轻悬浮细胞,冰上放置20min,4℃下,5000g离心5min,去上清。加入200µl预冷的含15%甘油的0.1M的CaCl2 溶液,轻轻悬浮。混匀后立即冻存于-80℃。二. 双元载体转化农杆菌EHA105取1µg左右的质粒DNA加入到200µl EHA105感受态细胞中,混匀后,冰浴3

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组织标本收集取材固定

一、标本收集和查验程序对于所有送检的标本,必须认真执行查验程序,方能进入下一程序,其主要程序是:1.收集标本时:要仔细查对申请单上的姓名与标本上的姓名,序号是否一致;标本的件数与申请单是否相符;标本是否用固定液固定过。2.标本经上述验收后,进行编号登记,以防错乱。编号按年份和流水号两种方法,如果为了今后的查找较为方便,按年份编号为较好。二.、活检组织取材在外科送检的诸多材料中,对于每一例病例的材料,大小都不一样,但对于较大的标本,不可能都对其进行制作切片,因此,选择适合于病理技术制作,适合于病理诊断且有利于回顾性研究等各方面的材料,是病理活检的关键,通常把这过程称为取材。(一)取材时必须注意以下问题:①取出所有送检的标本,量其大小,称其重量,描写其色泽,质地,形状和肉眼所见表面情况。当标本切开后,应详细描写其切面的颜色,硬度,病变部位等,必要时绘图说明。②对于细小标本如肺支气管穿刺物标本胃肠镜活检标本[1]等,应将其染上伊红颜色后,用擦镜纸或特别脱水袋将其包上或装上,以防漏出脱水盒的小孔。③对于有传染性的标本,让标本彻底固定后再取材。如结核瘤标本等。④对于罕见特殊的标本,应小心保存好,

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目标蛋白粗提方法

狭义来讲,提取指制备物与细胞固体成分或其它结合成分的分离,由固相转入液相或从细胞内生理状态转入外界特定溶液环境的过程,即分离前期被提取物从破碎的细胞中释放出来的过程。如果被提取物程固相或与固体结合,提取时由固相转入液相,常称为固液萃取;如果被提取物已经呈液相存在,提取时由一液相转入转入另一互不相溶的液相,这种方法称为液液萃取。广义来讲,提取又可称为抽提或萃取,贯穿在整个分离纯化过程中,如核酸制备中用氯仿或苯酚反复抽提除去蛋白质,分离DNA和RNA。提取的好坏受到多种因素的影响,包括:1)溶液 涉及到溶液中的保护成分、离子强度、PH值、温度、表面活性剂、变性剂(如尿素和盐酸胍)和粘稠度、溶液的更换;2)材料 包括材料本身固有的特性、材料的选择和处理;3)目的分子 目的分子的理化性质、存在方式和部位、含量;4)其它因素 搅拌、提取时间的长短。第一节 溶剂和溶解度一.溶剂一些常用溶剂按其极性的大小,可依顺序大体排列如下:饱和烃类还可按形成氢键能力的大小,分为五类:1)能形成两个以上氢键的溶剂分子 如水,其两个氢原子和一个氧原子都可以形成氢键;2)能形成两个氢键的溶剂分子 既是氢键的供体又是氢

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有关硅烷化试剂使用中的注意事项

硅烷化试剂在GC分析中用途很大。许多被认为是不挥发性的或在200~300℃热不稳定的羟基或氨基化合物经硅烷化后成功地进行了色谱分析。硅烷化作用是指将硅烷基引入到分子中,一般是取代活性氢。活性氢被硅烷基取代后降低了化合物的极性,减少了氢键束缚。因此所形成的硅烷化衍生物更容易挥发。同时,由于含活性氢的反应位点数目减少,化合物的稳定性也得以加强。硅烷化化合物极性减弱,被测能力增强,热稳定性提高。正是因为硅烷化试剂,对活泼氢敏感,可与其发生反应,所以硅烷化试剂同样对潮气非常敏感,在有水的环境中会自行分解失效。我们SUPELCO提供的硅烷化试剂,都是密封在氮气中的。一、怎样尽可能避免硅烷化试剂在使用过程中受潮呢?1.干燥氮气密封法氮气须预先除水干燥。在取用硅烷化试剂后,再次密封前一定要充进氮气。这样就可以赶走空气,避免密封进一段空气从而使得空气中的水分与硅烷化试剂的接触。充氮气的方法可按如下操作:用一根特氟龙管一端连接氮气钢瓶,一端连巴氏吸管。把吸管头部伸进待充氮气的硅烷化试剂瓶中,距离硅烷化试剂液面约2~3cm。打开氮气开关,让氮气缓缓流入试剂瓶中,直到氮气已充满硅烷化试剂瓶中的空白空间。拿开

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沙门氏菌检验

1 主题内容与适用范围本文规定了食品中沙门氏菌的检验方法。本文适用于航空食品的检验。2 设备和材料吸管(1ml、10ml)、恒温培养箱(36±1℃、42℃)、冰箱、均质器、振荡器、平皿、稀释瓶、天平、显微镜、接种棒等3 培养基和试剂缓冲蛋白胨水(BP)、氯化镁孔雀绿增菌液、四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液、亚硒酸盐胱氨酸(SC)增菌液、亚硫酸铋琼脂(BS)、DHL琼脂、HE琼脂、WS琼脂、SS琼脂、三糖铁琼脂、蛋白胨水、靛基质试剂、尿素琼脂(pH7.2)、氰化钾(KCN)培养基、氨基酸脱羧酶试验培养基、糖发酵管、ONPG培养基、半固体琼脂、丙二酸钠培养基、沙门氏菌因子血清:按26种用于初步分型;57种用于进一步分型;163种用于详细分型。4 检验程序沙门氏菌检验程序如下:5 操作步骤5.1 前增菌取检样25g,加入225mL缓冲蛋白胨水于均质杯内。用均质器以8000~10000r/min打碎1min,于36±1℃培养4h(干蛋品培养18~24h),移取10mL,转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液(MM)或四硫酸钠煌绿(TTB)增菌液内,于42℃培养18~24h。同时,另取10mL,转种于1

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