JNK 信号转导通路研究发现，用紫外线照射细胞后，一种蛋白激酶能够磷酸化f―jun，其磷酸化位点位于c―jun氨基末端活性区Set63和Ser73，该蛋白激酶被称为c―jun氨基末端激酶(c―jun N―terminal kinase，JNK)。JNK原来被称为应激激活的蛋白激酶(SAPK)。与其他MAPK一样，当酪氨酸和苏氨酸残基发生磷酸化后，JNK／SAPK也可被激活。JNK可以受各种各样的细胞外刺激而激活，这些刺激包括生长因子、细胞因子和细胞应激。细胞应激又包括热休克、脂多糖、肿瘤坏死因子、白细胞介素―1、高渗透压、紫外线照射和缺血／再灌注损伤等。JNK的上游激酶包括两个MAPKK：MKK4(SECl)和MKK7。MKK4、MKK7通过双磷酸化JNK的苏氨酸和酪氨酸位点而激活JNK，是JNK的特异性激酶。MKK7蛋白激酶主要由细胞因子激活，MKK4主要由环境应激所激活。MKK4和MKK7是双特异性蛋白激酶，均能同时磷酸化JNK的苏氨酸和酪氨酸位点，但MKK4优先磷酸化酪氨酸，而MKK7则是优先磷酸化苏氨酸。在翻译后水平，JNK通过使c―jun激活区域的丝氨酸―63和丝氨酸―73位

12 月 18 日上午 10 时左右，清华大学化学系一实验室发生爆炸，并起火，现场气味刺鼻，校方证实不幸死亡者是一名博士后。 18 日中午，清华大学官方微博发布消息称，2015 年 12 月 18 日上午 10:10 左右，化学系（何添楼）二楼一实验室发生火灾事故，师生第一时间报警，消防车及救护车紧急赶到现场进行处置。现明火已扑灭。现场发现一博士后实验人员死亡。火灾发生后，楼内师生已及时组织撤离，周围人员也已疏散。火灾事故原因正在调查中。 此前，据北京新闻广播官方微博消息，有市民向新闻热线 65159063 反映，清华大学一实验楼发生爆炸起火，编辑联系 119。消防表示，已派一个中队处置，火已扑灭，现场证实有一人死亡，但不知是否为学生。爆炸发生在化学实验室，应该是做实验时发生爆炸，有三间屋起火，过火面积 80 平米。 爆炸现场，火苗从窗户蹿出。 远处也能看到浓烟 另据央视新闻消息，据北京市消防部门，今天上午，清华大学一实验室发生火灾爆炸事故，事故造成一名实验人员死亡，目前火已经被扑灭。爆炸的具体原因还在调查中。 澎湃新闻（www.thepaper.cn）联络化学系系

一、血清灭活问题。1、问：加到培养基中的血清必须灭活吗？答：不是必须的，看做什么实验了。2、问：四季青胎牛血清灭活是56℃30分钟吗？答：如果用于培养大多数的肿瘤细胞，血清一般是不需要灭活的，这样可以有效保存血清中的生长因子。但是如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，血清是需要灭活，一般是56℃，30min。3、问：我要做滋养细胞培养，胎牛血清要灭活吗？答：进口的一般都已灭活，国产的不一定，最好还是灭活一下再用较安全。4、问：我用病毒上清转染细胞，培养用的血清需要灭活吗？因为血清中可能有些补体和抗体，是不是会影响转染？我想未灭活的血清中含些抗体补体可能会和病毒相结合，影响转染，正确吗？细胞是单核细胞白血病细胞，病毒是病毒包装细胞PT67收集的病毒上清。为什么要用无血清培养基加病毒孵育几小时，目的是什么？答：血清一定要灭活，可以先用无血清培养基加病毒孵育几小时以后再加血清。避免杂蛋白对病毒和宿主结合过程的干扰，一般是2-6小时，根据细胞的状态决定。血清不一定需要灭活，灭活的目的是将血清中的补体灭活！这要根据实际情况而定，如果没有把握那就灭活吧，也不麻烦56度半个小时。5、问

1．石蜡切片脱蜡至水：（石蜡切片染色前应置 60℃ 1 小时） 。① 二甲苯 、II，各 10 分钟。 ② 梯度酒精：100%，2 分钟 95%，2 分钟 80%，2 分钟 70% 2 分钟。 ③ 蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床）。2．过氧化氢封闭内源性过氧化物酶：3%H2 O2 ，室温 10 分钟（避光） 。3．蒸馏水洗：5 分钟，2 次（置于摇床） 。4．抗原修复：根据待检测的抗原，选择适当的方法。 附：抗原修复液（10mMpH 6.0 枸橼酸钠缓冲液）的配制：① 储备液的配制：A 液：枸橼酸三钠- 2H2O 29.41g + 蒸馏水 1000ml；B 液：枸橼酸 21g + 蒸馏水 1000ml；② 工作液的配制：A 液 82ml+ B 液 18ml+ 蒸馏水 900ml抗原修复的方法： ① 高压锅处理技术：枸橼酸钠缓冲液（10mM，PH6.0），淹没切片，盖上锅盖，高压锅内煮沸，上汽 3 分钟后缓慢冷却（可用自来水在高 压锅外冲，以助冷却） 。② 微波处理技术：用塑料切片架，置于塑料或耐温玻璃容器内，枸橼酸 钠缓冲液淹没切片，选择

胶体金是一种常用的标记技术，是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术，有其独特的优点。近年已在各种生物学研究中广泛使用。在临床使用的免疫印迹技术几乎都使用其标记。同时在流式、电镜、免疫、分子生物学以至生物芯片中都可能例用到。1971年Faulk 和Taytor将胶体金引入免疫化学，此后免疫胶体金技术作为一种新的免疫学方法，在生物医学各领域得到了日益广泛的应用。目前在医学检验中的应用主要是免疫层析法( immunochromatogra-phy)和快速免疫金渗滤法(Dot-immuogold filtration assay DIGFA)，用于检测 HBsAg、HCG 和抗双链ＤＮＡ抗体等，具有简单、快速、准确和无污染等优点。一、免疫胶体金技术的基本原理胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，可聚合成一定大小的金颗粒，并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态，形成带负电的疏水胶溶液，由于静电作用而成为稳定的胶体状态，故称胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影

免疫印迹（immunoblotting）又称蛋白质印迹（western blot），它是根据抗原抗体的特异性结合检测复杂样品中的某种蛋白的方法。western blot是在凝胶电泳和固相免疫测定技术基础上发展起来的一种新的免疫生化技术。由于免疫印迹（western blot）具有SDS-PAGE的高分辨力和固相免疫测定的高特异性和敏感性，现已成为蛋白分析的一种常规技术。免疫印迹（western blot）常用于鉴定某种蛋白，并能对蛋白进行定性和半定量分析。主要实验步骤如下：1. 蛋白质抽提实验对象为组织样品，取适量（250~500mg）新鲜组织样品或正确保存的组织样品，加1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂），匀浆后抽提总蛋白（或核蛋白）。实验对象为细胞样品，每份样品取1×106~1×107细胞，PBS清洗细胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制剂的总蛋白抽提试剂（或核蛋白抽提试剂）抽提总蛋白（或核蛋白）。2. 蛋白质定量：按BCA蛋白质定量试剂盒操作说明操作，测定样品浓度。3. 变性聚丙烯酰胺不连续凝胶电泳（SDS-PAGE）：将准备好的样品液和预染蛋白mar

下面的操作方法可以使约3~5分子的生物素与1分子的蛋白结合，对某些蛋白来说，生物素与蛋白的分子比可根据不同的生物素化要求进行调整。 1. 溶解2~10 mg 蛋白于1 ml 的BuphTm磷酸盐缓冲液中，并计算溶解的毫摩尔数。如果蛋白含有不恰当的缓冲液（如Tris或者甘氨酸），可以通过在PBS中透析或浓缩的方法除去。计算：蛋白质量（mg）/蛋白分子量（MW）＝蛋白质的毫摩尔数。 2. 在打开之前，平衡生物素至室温。加2 mg Sulfo-NHS-Biotin于100 ul 超纯水中，加入足够量浓度的生物素，一般对于10 mg/ml 蛋白来说超过12倍分子数，对于2 mg/ml 蛋白溶液应超过20倍，或者该试剂也可以直接以粉末的形式加入蛋白溶液中 3. 室温30分钟，或冰上放置2小时。 4. 用30 ml PBS预洗纯化柱，上样，加入与欲收集量相同的缓冲液，收集0.5 ml 或1 ml 于单独的管中。 5. 以280 nm 的吸收值测定蛋白含量。 6. 生物素化的蛋白4℃存放至使用，可加入叠氮钠、甘油等保存。 HABA法检测生物素标记效果 试剂配制：

xiaoniao175问：请问怎样提高细胞的转染效率？我前天做了转染，连接目的基因的载体带荧光，转染后４８小时在荧光显微镜下观察，却发现只有约百分之１５左右的荧光，我该怎么提高转染效率？有没有必要接着往下做筛选？还是重新转染一次？丁香园网友dafang0212认为：如果要是做稳定筛选的话，15%的转染率应该够了。提高转染效率的话，可以适当降低转染时细胞的密度（我试过60～70%的密度比90%更好一些），另外还有可能就是细胞的生长状态，还有在接种后24h内进行转染。丁香园网友biologyinsect认为：转染应该在对数生长期内进行才能保证转染效率，因为该时期细胞生长状态良好，容易吸收外源质粒，而不同细胞株的对数生长期是有差异的，因此建议你先绘制培养细胞的生长曲线、确定其对数生长期，然后再着手做转染。祝你成功！丁香园网友fangfang2007认为：我用293细胞包装病毒，转染有荧光（约百分之二十），但是感染老是没有荧光，感染细胞状态很好，第四天后开始变园脱落。转然后的细胞没有抗性，不能筛。迷茫中－－－请各位高手指点迷津，先谢了！！！丁香园网友housing456认为：20%的转染率太低

Caspase家族在介导细胞凋亡的过程中起着非常重要的作用，其中caspase-3为关键的执行分子，它在凋亡信号传导的许多途径中发挥功能。Caspase-3正常以酶原（32KD）的形式存在于胞浆中，在凋亡的早期阶段，它被激活，活化的Caspase-3由两个大亚基（17KD）和两个小亚基（12KD）组成，裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。但在细胞凋亡的晚期和死亡细胞，caspase-3的活性明显下降。1 Western blot 分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspase-3及对底物多聚（ADP-核糖）聚合酶[poly（ADP-ribose）polymerase，PARP]等的裂解。方法： 收集细胞→PBS洗涤→抽提细胞裂解液→蛋白定量→SDS-PAGE电泳→硝酸纤维素膜或PVDF膜转移→5%脱脂奶粉封闭，室温1.5~2h或4°C过夜→Caspase-3多抗或单抗室温反应1~2h或4°C过夜→TBS-T（含0.05% Tween 20的TBS）洗3次，5~10min/次→HRP-标记的羊抗鼠IgG或AP标记的羊抗鼠IgG室温反应1~2h→ TBS-T洗3次

inverse-PCR是克隆插入片段侧翼序列非常有效的方法。通常采用的Tail-PCR假阳性太多，而Inverse-PCR一般只要有特异条带，基本上就是目的片段。基本步骤如下：1、反向PCR（Inverse PCR）原理：反向PCR是克隆T-DNA插入位点侧翼DNA序列非常有效的方法。a. 选择合适的限制性内切酶位点。并在T-DNA的边界（左边界、右边界均可）和酶切位点附近设计引物P1、P2；b. 回收DNA，T4连接酶连接，使酶切后的DNA片段环化；c. 回收连接后的DNA，用引物P1、P2做PCR，就可扩增到两端为T-DNA插入序列，中间为侧翼序列的片段。2、限制性内切酶消化：选择合适的限制性内切酶，基因组一定要切成弥散性的条带。在酶切之前，应对基因组DNA定量。根据T-DNA的左边界序列选择合适的酶切位点EcoRI，BamHI和HindIII/PstI，并在酶切位点上游附近设计引物Z1，Z2，Z3和Z4，然后用这些内切酶分别消化基因组DNA，酶切体系如下：Buffer for EcoR I 2μlGenomic DNA 3μlEcoR I 0.5μl （10u/μl）ddH2O

在逆境条件下（旱、盐碱、热、冷、冻），植物体内脯氨酸（proline，Pro）的含量显著增加。植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低冰点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。一、原理 用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。二、材料、仪器设备及试剂 （一）材料：待测植物（水稻、小麦、玉米、高粱、大豆等）叶片。（二）仪器设备：1. 722型分光光度计；2. 研钵；3. 100ml小烧杯；4. 容量瓶；5. 大试管；6. 普通试管；7. 移液管；8. 注射器；9. 水浴锅；10. 漏斗；11. 漏斗架；12. 滤纸；13 剪刀。（三）试剂1.

常用蛋白酶抑制剂 抑制剂靶蛋白酶有效浓度储藏溶液注解Antipain木瓜酶和胰酶50μg/ml1mg/ml水溶液对胰凝蛋白酶，胃液素，纤溶酶无影响APMSF胰蛋白酶样丝氨酸蛋白酶10-40μg/ml或10-20μM100mmol/L水溶液毒性比PMSF低，不能抑制胰凝蛋白酶或乙酰胆碱酯酶抑肽酶丝氨酸蛋白酶0.06-2μg/ml10mg/mlPBS溶液避免反复动冻融抑氨肽酶B氨基肽酶40μg/ml溶于甲醇不能抑制羧肽酶Calpain抑制剂Ⅰ、ⅡCalpain (钙依赖性半胱氨酸蛋白酶)Ⅰ:17μg/mlⅡ:7μg/ml溶于乙醇可渗透薄膜抑糜朊酶素胰凝乳蛋白酶6-60μg/ml溶于DMSO B.M.综合酶片丝氨酸，半胱氨酸和金属蛋白酶每10-50ml细胞提取液内加一片 不含EDTAEDTA金属蛋白酶0.2-0.5mg/ml或0.5-1.3μmol/L500mmol/L水溶液pH=8.0 抑蛋白酶醛肽丝氨酸蛋白酶，巯基蛋白酶0.5-2μg/ml10mg/ml水溶液 a2 -巨球蛋白广谱1∪/ml100∪/ml PBS 溶液避免接触还原剂Pefabloc SC(boe- hringer Man

1. 溶液准备 2×样品缓冲液：130mM Tris-HCl （ pH8.0 ） , 20% （ v/v ） 甘油 , 4.6% （ w/v ） SDS , 0.02% 溴酚蓝 ,2%DTTPBS （ pH7.4 ） :10mM Na2HPO4，1.8mM KH2PO4 ，50mM NaCl，2.7mM KClRIPA缓冲液：50mM Tris-HCl（pH7.4），150mM NaCl，1mM EDTA，1%Triton×100 ，1%去氧胆酸钠，0.1%SDS，1mM PMSF，1μg/ml 牛胰蛋白酶抑制剂 （ aprotinin ），1μg/ml亮抑蛋白酶肽 （ leupeptin ）裂解液缓冲液：10mM Tris-HCl（pH7.4），0.15M NaCl，5mM EDTA（pH8.0），1%Triton×100；使用前加5mM DTT，0.1mM PMSF异丙醇和5mM ε-氨基己酸。2. 裂解液的制备A. 制备细胞裂解液：①收集胰蛋白酶消化的细胞并离心，用PBS清洗。②用100μl RIPA缓冲液冰浴溶解沉淀10min（每500000个细胞20μl RIPA缓冲液）

1. 使用正确的细胞或组织储存条件在样品用液氮瞬间冻结之后，应该储存在-80°C，千万不能解冻。即使是置于含有胍盐的裂解液中作匀浆前的短暂解冻，也会导致RNA的降解和损失。瞬间冻结的组织应该首先在超低温条件下先研磨成粉，然后置于裂解液中进行匀浆。RNAfixer使样品储存更为便利。储存在RNAfixer中的细胞或组织可在室温下稳定保存长达1个星期，在4°C可稳定保存长达1个月，或永久保存在-20°C。2. 消除环境RNase的污染为了得到完整的、高品质RNA，在整个RNA制备过程中，当RNA离开强蛋白变性剂（如离液裂解液或酚）的保护时，避免引入新的RNase污染就非常关键。由于RNase几乎是无所不在，所以必须确保与纯化的RNA接触的每一样东西都是无RNase污染的。所有的表面，包括移液器、工作台、玻璃器皿和制胶设备，都必须用表面去污净化溶液如RNase喷雾清除剂 来处理过，去除各种溶液或者反应缓冲液中可能存在的RNase污染，可以用RNAsafe。必须保证一直使用无RNase的枪头、试管和溶液，手套也应经常更换。3.迅速灭活内源的RNA酶，以防止RNA降解。以下3个方法均可有效使内源

提取植物DNA时遇到多糖成分的干扰， DNA质量一直不高，如何消除多糖的影响？参考见解：一般来说，SDS法提取的DNA会还有较多的多糖，使DNA成胶冻状。而CTAB法提取可基本上除去多糖。如果是植物材料本身含糖量比较高，可用以下方法试一试：1、 在 DNA 未溶出之前，先用一些缓冲液洗去多糖。如可用缓冲液：100 mmol/LTris -HCl(pH=8.0)、5 mmol/L EDTA和0.35 mol/L Sorbitol洗几次。2、 使 DNA 提取液中的多糖先沉淀。在提取液中加入 0.35 倍体积的无水乙醇，迅速混匀，多糖会先沉淀。3、 沉淀 DNA 时，使多糖保留在溶液中。如用乙醇沉淀时，在待沉淀溶液中加入 1/2 体积的 5 mol/L NaCl，或加 NH4Ac 使终浓度为 10 mmol/L。或 0.5 mL DNA 液中加 0.12 5 mL 4 mol/L NaCl 和 0.625 mL 13% PEG 8000（冰浴 1 h）。4、 多糖和 DNA 的共沉淀物进行再分离。如用 TE缓冲液反复清洗共沉淀 物，将清洗液合并再用醇沉淀 DNA，或将沉淀物溶解后，经琼脂糖

细胞转染方法包括DEAE－葡聚糖法， 磷酸钙法，阳离子脂质体法，阳离子聚合物，病毒介导法，Biolistic 颗粒传递法 （基因枪粒子轰击法）， 显微注射法，电穿孔法等，对各种方法的原理，应用，特点，厂家产品等信息的比较结果如下表：转染方法原理主要应用特点厂家及产品DEAE－葡聚糖法带正电的DEAE-葡聚糖与核酸带负电的磷酸骨架相互作用形成的复合物被细胞内吞瞬时转染相对简便、重复比磷酸钙好，但对细胞有一定的毒副作用，转染时需除血清且一般只用于BSC-1，CV-1，COS细胞系Sigma-Aldrich(DEAE-Dextran Transfection Kit)磷酸钙法磷酸钙DNA复合物吸附细胞膜被细胞内吞稳定转染，染瞬转染不适用于原代细胞（所需的DNA浓度较高），操作简便但重复性差，有些细胞不适用细胞建议用CSCL梯度离心，转染是拷贝数较多GIBCO BRL ，Promega阳离子脂质体法带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物，然后脂质体上剩余的电核与细胞膜上的唾液酸残基的负电核结合；另一种解释是通过细胞是内吞作用而被进入细胞。(若DNA浓度过高，中和脂质体表面电核，而降低了

线粒体跨膜电位DYmt的下降，被认为是细胞凋亡级联反应过程中最早发生的事件，它发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体DYmt崩溃，则细胞凋亡不可逆转。　　线粒体跨膜电位的存在，使一些亲脂性阳离子荧光染料如Rhodamine 123、3，3-Dihexyloxacarbocyanine iodide[DiOC6（3）]、Tetrechloro-tetraethylbenzimidazol carbocyanine iodide[JC-1]、Tetramethyl rhodamine methyl ester（TMRM）等可结合到线粒体基质，其荧光的增强或减弱说明线粒体内膜电负性的增高或降低。　　一、方法将正常培养的细胞和诱导凋亡的细胞加入使用终浓度为Rhodamine 123（1mM）或终浓度为DiOC6（25nM），JC-1（1mM），TMRM（100nM），37°C平衡30min，流式细胞计检测细胞的荧光强度。　　二、注意事项1、始终保持平衡染液中pH值的一致性，因为pH值的变化将影响膜电位。　　2、与染料达到平衡的细胞悬液中如果含有蛋白，他们将与部分染料

【 目的和原理 】 血型（blood group）就是红细胞上特异抗原的类型。在ABO血型系统，根据红细胞膜上是否含有A、B抗原而分为A、B、AB、O型。血型鉴定是将受试者的红细胞加入标准A型血清（standard serum A）（含足量的抗B抗体）与标准B型血清（standard serum B）（含足量的抗A抗体）中，观察有无凝集现象，从而测知受试者红细胞上有无A或／和 B抗原。 交叉配血（cross-match test）是将受血者的红细胞与血清分别同供血者的血清与红细胞混合，观察有无凝集现象。为确保输血的安全，在血型鉴定后必须再进行交叉配血，如无凝集现象，方可进行输血。若稍有差错，就会影响受血者的生命安全，千万不可粗心大意。 【 实验材料 】 人;显微镜、 离心机 、采血针、玻片、滴管、1ml吸管、小 试管 、 试管 架、牙签、消毒注射器及针头、碘酒、棉球、消毒棉签;标准A、B型 血清 、生理盐水、75％酒精。 【 实验

我做的是胃癌三种细胞株MGC-803,BGC-823以及SGC-7901的培养，具体方法步骤如下1）细胞传代：A将复苏长满细胞的培养瓶中培养基吸出,加3ml 0.86%生理盐水洗涤两次,弃去洗涤液,加0.25%胰蛋白酶1-1.5 ml,消化液均匀覆盖细胞表面,消化时间约1-3分钟。B消化后在倒置显微镜下可见细胞皱缩变圆,边缘折光性增强,在细胞尚未脱落时倒掉消化液,立即加入血清或含血清的培养基,终止消化。C 用吸管将培养瓶壁上的细胞吹打下来, 1000 rpm/分钟，离心5分钟,弃去培养基,加入含10%FBS的RPMI-1640培养液6ml,吹打混匀, 视细胞密度以1:2或1:3分瓶培养,当细胞长满培养瓶且形成致密单层时即可再传代。2） 细胞冻存：A取在培养瓶内已经生长2－3天形成单层的细胞，最好在冻存前一天换液，以保证细胞处于良好的营养状态。B 用胰蛋白酶消化细胞，计数，1000 rpm/分钟，离心10分钟。C 弃去上清，用配好的冻存培养基重新悬浮细胞并配成浓度为106 细胞/ ml的细胞悬液。D 用吸管轻轻吹打使细胞均匀，按1 ml的量分装入无菌冻存管内。E 然后将标记好的冻存管放入

1、乙醚乙醚吸入法是最常用的麻醉方法，各种动物都可应用。其麻醉量和致死量相差大，所以其安全度大。但由于乙醚局部刺激作用大，可刺激上呼吸道粘液分泌增加；通过神经反射还可扰乱呼吸、血压和心脏的活动，并且容易引起窒息，在麻醉过程中要注意。但总起来说乙醚麻醉的优点多，如麻醉深度易于掌握，比较安全，而且麻醉后恢复比较快。其缺点是需要专人负责管理麻醉，在麻醉初期出现强烈的兴奋现象，对呼吸道又有较强的刺激作用，因此，需在麻醉前给予一定量的吗啡和阿托品（基础麻醉），通常在麻醉前20～30分钟，皮下注射盐酸或硫酸吗啡（每公斤体重5～10mg）及阿托品（每公斤体重0.1mg）。盐酸吗啡可降低中枢神经系统兴奋性，提高痛阈，还可节省乙醚用量及避免乙醚麻醉过程中的兴奋期。阿托品可对抗乙醚刺激呼吸道分泌粘液的作用，可避免麻醉过程中发生呼吸道堵塞，或手术后发生吸入性肺炎。进行手术或使用过程中，需要继续给予吸入乙醚，以维持麻醉状态。慢性实验预备手术的过程中，仍用麻醉口罩给药，而在一般急性使用,麻醉后可以先进行气管切开术，通过气管套管连接麻醉瓶继续给药。在继续给药过程中，要时常检查角膜反射和观察瞳孔大小，如发现角膜反射