[专业技术人员创业与职业规划（1） 评论(1)发表时间：2006年11月24日 9时31分 一、 定义生命科学专业技术人员的属性 是不是一见这个标题感觉就像是上课？ 生命科学专业技术人员，就是在读或完成了生命科学基本学历教育的人，他们将来或正在从事与生命科学相关的实验、开发、生产、项目管理、技术管理等工作，而不是那些具有生命科学背景而从事市场、销售、人力资源、财务、行政管理等工作的人员。如此界定，下面还有用。 专业技术人员的共性：接受过较系统的生命科学教育，对实验研究有一定了解，相比对人和事的关注更热衷对技术的钻研，思维逻辑性强，务实，唯物。但也有很多不足：过分强调技术在任务中的重要性，不了解资源在任务中的作用，因此易于偏离方向，缺乏团队意识，在团队中角色不明确，沟通能力普遍不强，甚至于害怕与人沟通，缺乏领导力，往往以技压人，对自己持有的技术设置神秘感，对技术以外的知识非常缺乏。 综合来讲，专业技术人员，在业务上的能力和成绩是值得肯定的，但在处事、协调、领导等方面还有很大不足，当然这方面也是因人而异的，只是希望大家能对照自己，找到自身的不足，这才是立业的根本。 因为我们，包括我自己，在

我现在准备做大鼠心肌组织的冰冻切片（研究心肌细胞膜上的钾离子通道蛋白），按照丁香园学友的帮忙，取标本后先放在液氮中，随后4％多聚甲醛磷酸缓冲液后固定标本后，再放入20％蔗糖PB液，直至组织块沉底。本打算今天高高兴兴去做冰冻切片免疫组化（SP法），但是帮我做切片的病理科技术员说：蔗糖泡过的标本非常软，均无法切片，以前他也遇到过类似的问题。具体原因他也解答不清。不知哪位学友帮忙解答？ 1 是否我们医院病理科冰冻切片机比较不好，无法切出理想的片来？ 2 是否与没用OCT包埋有关？（因为我是用普通胶水代替） 3 先冰冻切片随后再多聚甲醛磷酸缓冲液固定标本及20％蔗糖PB处理是否可行？ 实在没有办法，郁闷之下再去查找文献，发现国外学者有的是把-80度冰冻后的标本在冰冻切片机上先做切片，然后在4％多聚甲醛中固定20分钟，随后就加入一抗，在文献中未提到用蔗糖。 （Immunohistochemistry： Atrial and ventricular tissues were dissected from five explanted canine hearts and placed in iso

酗酒引起人类肥大细胞的凋亡 1.背景：目前认为酗酒可导致免疫功能抑制，而增加感染的机率，但是确切的机制不明。肥大细胞（mast cell，MC）属于固有免疫系统，可抵御细菌和寄生虫的感染。本文章主要研究了乙醇及其代谢产物乙醛对肥大细胞生存能力、增殖能力和凋亡的影响。 2.方法：采用3种细胞系，分别是人类肥大细胞系（HMC-1）、小鼠骨髓干细胞诱导的肥大细胞系（mBMMC）和人类外周血诱导的肥大细胞（HuMC）。用H3掺入法、台酚蓝检测细胞增殖能力；用ELISA、TUNEL方法检测核小体、caspase-3, caspase-8 和caspase-9等凋亡相关因子；分别采用RT-PCR、western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、BAX的表达。 3.结果：乙醇对HMC-1 和mBMMC细胞系有剂量依赖性抑制作用，但未发现乙醛有此作用。当乙醇的浓度为43mM时，可对HMC-1细胞达到最大促凋亡作用。研究还发现此凋亡过程与caspase-3活性明显增强，以及caspase-8 、caspase-9活性中度增强相联系。此外，酒精还可以改变Bcl-2/BAX平衡，而有益于细胞

溶血空斑形成试验是一种体外检测单个抗体形成细胞(浆细胞)的方法，故又称体外抗体形成细胞(Plaque Forming Cell, PFC)测定技术。此项技术不仅可以作为免疫基本理论研究的有力工具，广泛地用于检测产生IgM类型(包括其它各类免疫球蛋白及其亚类)的抗体形成细胞，它还可作为临床筛选抗肿瘤新药以及研究中药对抗体免疫功能影响的免疫学指标。 一、原理： 　　溶血空斑形成试验的基本原理是将经绵羊红细胞免疫小鼠的脾细胞与一定量的绵羊红细胞混合，在补体参与下，使抗体形成细胞周围那些受到抗体分子致敏的绵羊红细胞溶解，形成肉眼可见的溶血空斑。根据所操作的方法不同可分为直接溶血空斑试验，间接溶血空斑试验，琼脂固相法，小室液相法，单细胞层法等等。下面介绍直接溶血空斑形成试验。 　　二、操作步骤： 　　1. 底层琼脂平皿的制备：将1.4％琼脂加热融化后倾注于平皿内，每个平皿6ml，凝固后置湿盒37℃备用。 2. 0.7％琼脂加热融化后加入华氏管内，每管2ml，47～49℃水浴保温备用。 　　3. 免疫小鼠脾细胞悬液制备：用4×10３ 个绵羊红细胞(SRBC)盐水悬液腹腔免疫小鼠，对照为等量生理盐水

我现在做elisa，目的是利用此法来检测我样品中蛋白的浓度，我用的是改良的双抗体夹心法，就是包被鼠单抗，加标准品和待测样品，再加兔多抗，再加山羊抗兔的酶标二抗，TMB显色。我现在的问题是摸索单抗和多抗的稀释度，所以就将多抗稀释了三个浓度1:5000,1:10000,1:15000,1:20000，单抗 包被稀释度是1:15000，标准品都是五倍稀释即：25μg/mL , 5μg/mL , 1μg/mL , 0.2μg/mL , 0.04μg/mL 酶标二抗是1:5000 双波长A450/A650检测得到的结果如下 麻烦大家帮我分析一下： 1:5000 1:10000 1:15000 1:20000 25μg/mL 3.460 3.268 2.922 3.135 5μg/mL 3.122 3.076 2.900 2.36 1μg/mL 3.031 1.747 1.280 0.876 0.2μg/mL 0.299 0.181 0.138 0.103 0.04μg/mL 0.114 0.081 0.074 0.077 阴性 0.095 0.078 0.074 0.069 空白 0.052 0

液相芯片技术及在中国的应用前景讨论！ Lumniex™100 Liquid Array液相芯片分析平台 Luminex™100是一个多功能的液相芯片分析平台，通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。Luminex™100有机地整和了有色微球（color-coded microsphere or bead）、激光技术、应用流体学、最新的高速数字信号处理器和计算机运算法则，造就了Luminex™100无与伦比的检测特异性和灵敏度。微球的颜色是通过两种荧光染料染色得到的，调节两种荧光染料的比例可以获得100种不同颜色的微球，每种颜色的微球可以携带一种生物探针。探针通过羧基结合到微球表面，因此一个反应孔内可以完成100种不同的生物学反应。Luminex™100通过鉴定微球的颜色来确定反应类型，而对反应的定量分析是通过靶物质上的报告分子完成的。 Luminex™100液相芯片分析平台 实验流程 ☆ 将探针包被的beads、报告分子以及样本混合，静置一段时间 ☆ 将混合物上样到Luminex 100，采用微流技术将beads分为单个细胞流 ☆ 激光检测bead，获得光信

用DNA分子佐剂增强DNA疫苗免疫效应的研究进展 李再新 张富春 （新疆大学生命科学与技术学院分子生物学重点实验室 乌鲁木齐 830046） 自Wolff等1990年发现DNA能够刺激机体产生免疫效应以来,在全世界范围内迅速掀起了一股DNA疫苗研究热。在近十年的时间里,科学工作者在鼠、鸡、猪、牛、猫、猴和黑猩猩等动物中进行了广泛深入的抗病毒、抗细菌、抗寄生虫、抗肿瘤及免疫不育的DNA疫苗研究。由于DNA疫苗能诱导机体产生体液免疫和细胞免疫,并兼有减毒活疫苗的有效性和亚单位疫苗的安全性, 而且制作简单、经济、易于储存运输等优点已在免疫学领域引起一场重大的革命。近年的研究还表明, 虽然DNA疫苗具有广泛的优越性,但在免疫效力上却还不及活疫苗有效,尚未达到人们的期望值。如何提高DNA疫苗的免疫效应成为研究者关注的热点,本文就利用DNA分子佐剂增强DNA疫苗效果的研究讨论如下: 1 改善免疫途径和免疫方式 不同免疫途径和免疫方式可对抗原DNA的吸收、表达和提呈产生影响,因而诱导出不同的免疫反应强度。目前，普遍采用直接注射器注射法和基因枪注射法,将DNA疫苗导入到机体内。免疫部位常选在

1998年mauri等在研究HSV对T淋巴细胞的感染过程中发现了一个TNF家族的新成员LIGHT[ homologous to lymphotoxin, shows inducidle expression, and competes with herpes simplex virus glycoprotein D for herpvirus entry mediator (HVEM)， a receptor expressed by T lymphocytes]，又称为HVEM-L（herpevirus entry mediator ligand），是肿瘤坏死因子超家族的第14个成员（TNFSF14）。根据cDNA序列分析，LIGHT由240个氨基酸组成，包括37个氨基酸组成的胞内区，22个疏水氨基酸组成的穿膜区，181个氨基酸组成的胞外区，具有典型的II型膜蛋白特征。其高表达於T淋巴细胞，巨噬细胞，基因定位於16P11.2。与其它的TNF超家族成员不同，LIGHT并不结合已知的TNF受体超家族成员如Fas、DR3、DR4、DR5，而是通过3个不同的受体LT-βR、TR2

一、西医研究进展 （一）类风湿关节炎与细胞因子（cytokine） 80年代以来，细胞因子研究取得了重大进展，成为发展最快的免疫学领域之一。近年来对细胞因子在类风湿关节炎发病中的作用研究较多，现报道如下： 1．细胞因子概念 细胞因子是一种介导细胞与细胞间相互联系的小分子量蛋白。广义的细胞因子包括集落刺激因子（CSFs），生长因子，白介素（ILs）和干扰素（IFNs）。 2．作用特点 呈网络形式，自我调控，相互制约；一种细胞因子可作用于多种细胞，一种细胞可接受多种细胞因子；细胞发育不同阶段可表达不同细胞因子。 3．作用方式 自分泌和旁分泌；与靶细胞膜特异性受体结合，进一步激活第二信号旁路和其他细胞内机制，最终引起基因转录和蛋白表达。 ①集落刺激因子：包括粒细胞－巨噬细胞集落刺激 4．分类因子（GM-CSF）、粒细胞集落刺激因子（G-CSF）、巨噬细胞集落刺激因子（M-CSF）、白介素3（IL-3）、促红细胞生成素（Eryth-ropoietin）。②生长和分化因子：包括血小板来源的生长因子（PDGF）、表皮生长因子（EGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、转化生长因子β

制备好免疫胶体金后，还需要将其稀释到一定浓度，并吸附于特殊的惰性介质中才能够最终制成产品。一般来说，特殊的介质常用的是玻璃纤维或无纺布。玻璃纤维和无纺布本身一般是疏水的，胶体金产业一般采用表面活性剂预处理过的玻璃纤维或无纺布，通常配方为1%Tween20+适量PVA。 介质处理完成后，免疫胶体金稀释液的配伍才是最关键的。现总结原则如下，不足之处欢迎批评或补充。 1 合适的离子种类和强度 免疫胶体金毕竟是含有生物活性分子，应用时还要面对千差万别的样品，原则上需要稀释在合适pH的缓冲液中。经验值是6-9。在这个范围内可选的缓冲主要有tris和PB，也不排除其他种类缓冲适用的可能。当使用的缓冲离子强度过大如超过0.2M时，有可能造成释放、层析不好或检测结果异常。离子的种类也因为免疫胶体金的生物分子不同而有诸多限制，例如钙调蛋白可能与Ca离子有关系。而卤素离子强度对胶体金稳定性似乎有特殊的破坏作用，教科书式的NaCl调试最适标记条件就是例子。 2 大分子物质作为胶体金干燥后均匀散布的骨架 这个其实是冻干工艺的理论基础，适用于胶体金干燥工艺，对冻干有研究的应该对这个工艺感觉很小儿科。抽真空是一个

载脂蛋白抗体的制备 　　抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。抗体的理化性质及结构与γ-球蛋白相近似。γ-球蛋白是一组结构相似，但又有差异的蛋白质，通称为免疫球蛋白（immunoglobulin,Ig），按其结构和免疫化学性质的差异，又可分为五类，分别称为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。载脂蛋白抗体以IgG最为稳定。因载脂蛋白的体液中含量不同以及分离纯化的难易的差别，可分别采用多克隆抗体制备法和单克隆抗体制备法。 　　1．多克隆抗体的制备 　　（1）抗原 　　目前所知的载脂蛋白进入异种机体后，能致敏淋巴细胞，与抗体产生特异性结合复合物，即具备有抗原性。抗原性包括免疫原性和抗原特异性两方面的含义。载脂蛋白因具备抗原特异性和免疫原性，因此可称为完全抗原，大多数动物的免疫系统是非常敏感的，用于免疫的抗原仅需要极微量。抗原应该是纯化品，该纯品在12.5%的PAG电泳后，仅出现一条区带，即认为可用于免疫抗原纯品。 　　（2）免疫 　　动物的选择：通常选择壮年、成熟且健壮的豚鼠、鸡、兔、山羊、绵羊、马等动物。一般多先用大白兔。作为批量生产，以采用山羊或绵羊，若需量再多

1 起源与发展： 1983年, Czerki8Dnsky；Sedgwick and Holt: 计数 B cells 1988年，Czerkinsky: T cell IFN-r 1988年，Czerkinsky：双色标记（Dual-Color） 1993年，第一台ELISPOT自动分析仪：德国Leica 96-97年，出现了新的ELISPOT分析仪 2 ELISPOT 和 ELISA的区别： ELISA 回答 “how much”,而ELISPOT回答“What freqency” ELISA是ImmunoAssay，而ELISPOT是“Bio-Assay” ELISA非特异，ELISPOT特异性T细胞群 3 其优点： 检测可分泌性细胞因子（蛋白），少至100－1,000个分子/Cell即能够被检测。比ELISA的灵敏度高200倍。Tanguay, S. and Killion, J. J. (1994) Direct comparison of ELISPOTand ELISA. Based assays for detection of individual cytokine

最近要免疫动物，所以搜集整理了一点方法。想请做过的ggjjddmm指导一下。看看有没有需要改进的地方？　　　　　　　 制备多克隆抗体实验方案 动物：新西兰兔（年龄＞３个月） 免疫佐剂：福氏完全佐剂、福氏不完全佐剂 方法一：１００ug Hexon protein 溶于0.5ml Tris-HCL缓冲液中, ，与等体积的福氏完全佐剂混合后，于家兔后肢及后脚掌多点皮下注射。以后每隔两周加强免疫1次，抗原改用福氏不完全佐剂配制，用量同前，在每次加强免疫7d后，用免疫双扩散实验检测抗体效价，当效价>1:16时，于放血前4d加强免疫1次，然后采血并分离血清. 方法二：：纯化的Hexon protein (0.5mg/ml ) 1ml加入等体积的弗氏佐剂 进行乳化，采用颈部皮下多点注射的方法. 以后每隔两周加强免疫1次，抗原改用福氏不完全佐剂配制，用量同前，在每次加强免疫7d后，用免疫双扩散实验检测抗体效价，当效价>1:16时，于放血前4d加强免疫1次，然后采血并分离血清. 兔的取血： １． 颈静脉取血 　　将兔固定于兔箱中，倒置使头朝下，在颈部上１／３的静脉部位剪去被毛，用

The sequencing of the Atlantic cod (Gadus morhua) genome has revealed an immune system never seen before in jawed vertebrates. The finding could be used to develop better vaccines and to improve disease management in farmed cod. 大西洋鳕鱼（Gadus Morhua）基因组的序列揭示先前在鄂脊椎动物从未存在的一个免疫系统。这一发现可被用于开发更好的疫苗并且在鳕鱼养殖场控制鳕鱼少得病。 Kjetill Jakobsen, of the University of Oslo, and his colleagues found that Atlantic cod have lost the genes for three important components of the adaptive immune system, which fights pathogens

近日来自美国M.D.安德森癌症中心的科学家们在新研究中确定了IL-17细胞因子家族成员IL-17C的受体及信号传导分子机制。相关研究论文发表在国际生物学期刊《细胞》（Cell）旗下子刊《免疫》（Immunity）杂志上。 文章通讯作者是华人科学家董晨教授，早年毕业于武汉大学，赴美留学时师从美国科学院院士Max Cooper教授（首个发现B细胞的科学家），董晨教授现任M.D.安德森癌症中心免疫系正教授。 Th17作为一种近年来被发现的在炎症性疾病和自身免疫疾病中起主导作用的效应T细胞，其产生的特征性细胞因子白介素17 (IL-17)越来越广泛地受到关注。研究发现，IL-17在多种自身免疫疾病如多发性硬化，类风湿性关节炎，牛皮癣的患者的特定病理组织中显著上调。此外，对于自身免疫疾病动物模型研究表明，IL-17或其受体IL-17R基因剔除小鼠能够显著抑制自身免疫疾病的诱导，而将IL-17抗体注射到小鼠体内亦可以很大程度地减少自身免疫疾病的发生，表明阻断IL-17的功能很可能会有效的治疗自身免疫疾病。因此，研究IL-17发挥功能的信号转导机制是至关重要的。 迄今为止，已发现了六个IL-17家族

间接凝集反应 l 间接血凝反应 致敏红细胞的制备： 直接法： 1．取10%双醛固定的红细胞悬液1ml，离心沉淀后，将压积细胞悬于0.1mol/L、pH4.0醋酸缓冲液5ml中。 2．预温后加含适量致敏抗体的醋酸缓冲液5ml，混匀，放37℃20~30min或24℃ 60~75min，其间摇动数次，但不宜剧烈和频繁摇动，以免引起自凝。 3．最后用0.11mol、pH7.2 PB洗3次。 4．洗涤后的致敏红细胞用保存液配成10%悬液4℃保存或冻干。临用前，用实验中所用血清稀释液配成0.5%浓度。 间接法1：鞣酸法 1．取压积红细胞0.5ml，加0.15mol/L pH7.2 PB至100ml，加入0.05g/L鞣酸液100ml，混匀，放置37℃ 10min。 2．离心沉淀后，用同一缓冲液洗3次，重悬于生理盐水100ml中。加等量含适量抗原（或抗体）的同一缓冲液，置室温致敏10min。 3．离心沉淀用1：250稀释的正常家兔血清洗涤后，制成0.5%的致敏红细胞悬液。 间接法2：戊二醛一步法 1．将绵羊或人“O”型红细胞用0.11mol/L pH7.2 PB洗3次，取沉

JI:淋巴细胞的“杀癌”和“护癌”机制研究有新突破 近日，复旦大学上海医学院免疫学系储以微教授课题组经３年潜心研究发现，有一种从细菌中提取的名叫“BLP”的细菌脂蛋白，一旦与存在于T淋巴细胞表面的TLR-2受体“一对一配接”后，可以调动一群具有杀伤性T淋巴细胞明显增强其杀伤癌细胞的能力，同时，这种“一对一配接”还可以削弱和抑制另外一群调节性T淋巴细胞“保护癌细胞”的能力。这一新发现为恶性肿瘤治疗提供的传统放化疗法以外的副作用更小、专一性更强、更有效的免疫“生物治疗”奠定了坚实的基础。” T淋巴细胞是一种免疫细胞，在罹患恶性肿瘤时，它们中有的会发挥作用，奋力杀伤肿瘤细胞，但是，也有的T淋巴细胞非但不去杀伤肿瘤细胞，并且还会阻止其他淋巴细胞杀伤癌细胞。因此，如何调动“良性”杀伤性T淋巴细胞勇猛杀“癌”的积极性，并有效抑制“恶性”调节性T淋巴细胞的破坏作用，一直是国内外医学界科学家希望探索的“奥秘”。 储以微教授课题组经研究发现，“BLP” 细菌脂蛋白与存在于T淋巴细胞表面的TLR-2受体“一对一配接”后，会在两群T淋巴细胞中诱导两条不同的信号。对“良性”的杀伤性T淋巴细胞来说，激

一、免疫失败的可能原因及应采取的措施 有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。 1、免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。 2、抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。 一、免疫失败的可能原因及应采取的措施 有时不能获得满意的抗血清，可从下列几方面找原因，并改进之。 1、免疫动物的种属及品系是否合适，可考虑改变动物的种属或品系，或扩大免疫动物的数量。 2、抗原质量是否良好，可改用其它厂家的产品或改用同一厂家的其它批号，也可考虑改变抗原分子的部分结构，或改进提取方法。 3、制备的免疫原是否符合要求，可从偶联剂，载体、抗原或载体的比例、反应时间等多方面去考虑，并加以改进。 4、所用的佐剂是否合适，乳化是否完全，可改用其它佐剂，或加强乳化。 5、免疫的方法、剂量，加强免疫的间隔时间和次数，免疫的途径是否合适。 6、动物的饲养是否得当，如营养(饲料、饮水)、环境卫生(通风、采光、温度)是否符合要求，动物的健康情况是否良好等。 二、制备单克隆抗体影

粘膜免疫系统（Mucosal Immune system）是指广泛分布于呼吸道、胃肠道、泌尿生殖道粘膜下及一些外分泌腺体处的淋巴组织，是执行局部特异性免疫功能的主要场所。 粘膜免疫系统在结构和功能上均有别于传统的系统免疫系统，主要表现在以下几个方面： （1）MIS是大量免疫细胞和免疫分子弥散在粘膜上皮内或粘膜下固有层（弥散淋巴组织），或由单个或多个淋巴滤泡聚集成的粘膜相关淋巴组织（mucosal assacoated lymphoid tissues），包括肠相关淋巴组织（GALT）、支气管相关淋巴组织（BALT）和鼻相关淋巴组织（BALT）等。机体50%以上的淋巴组织和80%以上的免疫细胞集中于粘膜免疫系统。 （2）MIS分泌的是一类粘膜相关的免疫球蛋白，即分泌型IgA和sIgM （3）MIS内有一类能下调全身免疫应答的效应性细胞。 （4）按功能不同可分为两个部位：诱导部位和效应部位。前者主要指MALT，后者主要包括固有层、上皮内淋巴细胞和一些相关的外分泌腺（如泪腺、唾液腺和乳腺等）。 （5）在诱导部位和效应部位间，主要通过淋巴细胞归巢发生联系。即在一个诱导部位致敏的免疫

请认真阅读本版的《重要通知》，将帖子规入最相近的子版中。 请合作，否则扣分警告！ Luminex™100 Liquid Array液相芯片分析平台 Luminex™100是一个多功能的液相芯片分析平台，通常用于免疫分析、核酸研究、酶学分析、受体和配体识别分析等研究。Luminex™100有机地整和了有色微球（color-coded microsphere or bead）、激光技术、应用流体学、最新的高速数字信号处理器和计算机运算法则，造就了Luminex™100无与伦比的检测特异性和灵敏度。微球的颜色是通过两种荧光染料染色得到的，调节两种荧光染料的比例可以获得100种不同颜色的微球，每种颜色的微球可以携带一种生物探针。探针通过羧基结合到微球表面，因此一个反应孔内可以完成100种不同的生物学反应。Luminex™100通过鉴定微球的颜色来确定反应类型，而对反应的定量分析是通过靶物质上的报告分子完成的。 Luminex™100液相芯片分析平台 实验流程 ☆ 将探针包被的beads、报告分子以及样本混合，静置一段时间 ☆ 将混合物上样到Luminex 100，采用微流技术将beads分为