丁香实验_LOGO
登录
提问
我要登录
|免费注册
点赞
收藏
wx-share
分享

oligo DNA 分子量和摩尔数的计算

互联网

15295

一般oligo DNA 分子量计算公式如下:

MW=(A碱基数×312)+(C碱基数×288)+(G碱基数×328)+(T碱基数×303)-61
OligoDNA的分子量也可以用以下近似方法计算: OligoDNA中的每个脱氧核苷酸碱基的平均分子量近似为324.5,则一条 OligoDNA的分子量=碱基数×324.5。

例:您得到一管标为 5OD260nm 的20mer OligoDNA

分子量=20×324.5=6490


质量数=5×33=165ug


摩尔数=165/6490=0.025umol=25nmmol

若加双蒸消毒水或TE buffer400ul溶解,则浓度为25nmol/400ul=62.5uM

这里的 OD 值是指 DNA 制品溶解在1ml无菌水中的260nm 的吸光度值。

Oligo DNA的Tm值

引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度也有关。


长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:


Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)


对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:


Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) – 600/size


公式中,Size = 引物长度。


最适退火温度(Ta Opt )= 0.3×(Tm of primer)0.7×(Tm of product)–25

引物Tm值与PCR产物Tm值相差一般不超过30℃,一般采用较引物Tm值低5℃作为PCR退火温度。兼并碱基TM值可以折算。

(责任编辑:大汉昆仑王)

提问
扫一扫
丁香实验小程序二维码
实验小助手
丁香实验公众号二维码
扫码领资料
反馈
TOP
打开小程序