醋酸纤维膜电泳

<font><font>醋酸纤维膜电泳是一项简便而又迅速的方法。它的优点是：①电泳区带分离清楚，比琼脂平板电泳分辨率高；②可以定量；③样品用量少，只需要几微升即可。<br /> <br /> （一）材料与试剂<br /> 1．pH8.6离子强度0.05巴比妥缓冲液<br /> 2．0.5％氨基黑染色液<br /> 3．透明液：<br /> 冰醋酸 3 份<br /> 95％乙醇 2 份<br /> 混合即可<br /> 4．醋酸纤维膜<br /> <br /> （二）操作方法<br /> 1．将醋酸纤维膜条浸于巴比妥缓冲液中，浸透后用竹镊子夹到滤纸上，吸去过多的水分。将膜的光滑面向下搭在电泳槽两侧的滤纸桥上，注意搭平。<br /> 2．加样 用微量加样器于负极端1.5cm处加样1µl～3µl，注意样品要成一条直线且垂直方向。也可用血球计数板盖玻片蘸取样品轻轻点上。<br /> 3．电泳 电压10V/cm～15V/cm或0.4mA/cm～0.6mA/cm电泳45min～60min，至电泳区带展开约2.5cm～3.5cm时，关闭电源。<br /> 4．染色 将膜浸于氨基黑染色液中，染色数分钟。<br /> 5．透明 将染色的醋酸纤维膜浸于透明液中，漂洗5min ~10min，至背景呈乳白色为止。为了防止膜上出现许多气泡，可以逐渐升高透明液浓度10％、20％以至30％。<br /> 6．结果观察及保存 透明后，将膜贴于玻璃上，干后取下，即可观察结果并保存。<br /> 7．定量 将各区带剪下，分别浸于4Mol/L NaOH 4ml中，振摇数次，约2h，色泽被浸出，于580nm～620nm比色，测出各区带的OD值。同时剪一块大小相似无蛋白的透明膜同样处理，做为对照。<br /> 计算各区带蛋白含量百分比（以血清为例）<br /> 总OD值T＝A+α₁ +α₂ +β+γ<br /> 白蛋白％=A/T×100％<br /> 以此类推。<br /> <br /> （三）注意事项<br /> 1．醋酸纤维膜孔隙小，含水量少，且较薄，因此它对热很敏感，故应注意控制电压、电流。<br /> 2．样品不可过多，只需几微升即可。<br /> 3．加样一定要呈直线、垂直、分布均匀，这样泳动的区带整齐、不歪。<br /> 4．注意醋酸纤维膜的质量，浸泡很久仍有大块白色硬点者可弃之不用。</font> </font>

<center> <p> <font>共6页: 上一页 1 [2] [3] [4] [5] [6] 下一页 </font></p> </center>
<font>上一篇：亲和免疫组织化学技术的基本原理 下一篇：琼脂平板电泳<br /> </font>