实验29 蛙类后肢血管灌流

实验29 蛙类后肢血管灌流

　　【目的要求】

　　1．学习后肢血管灌流的方法。

　　2．观察某些药物对血管紧张度的影响。

　　【基本原理】

　　器官灌流法是重要的分析性实验方法之一，可用于研究某些体液因素或药物对器官组织的直接作用。蟾蜍后肢灌流是将任氏液灌入离体后肢的动脉，在一定压力的作用下，使灌流液流经组织毛细血管，再从静脉流出。如果在灌流液中加入某种药物，则可根据静脉流出量的变化，了解药物对血管的作用。

　　【动物与器材】

　　蟾蜍或蛙、常用手术器械、5000ml贮液瓶、螺丝止水夹、莫非氏管、输液导管、五角板（图4-29）、动脉插管（一段尖端拉细的塑料管）、记纹鼓或记录仪、记滴器或多用仪、电极支架、受滴器、电磁标、秒表、固定针、10ml量筒、1ml注射器、5号针头、玻璃管、任氏液、去甲肾上腺素（1∶10000）、乙酰胆碱（1∶1000000）。

　　【方法与步骤】

　　1．准备恒压灌流装置按图4-29安装，将一5000ml有下口的贮液瓶装满任氏液。将瓶的上口插入一根中心玻璃管，用胶塞封闭瓶口，使贮液瓶内溶液只通过中心管与大气相通，并且固定中心管的下口位置。灌流压力等于由中心管下口水平至血管所在水平面的液柱高度的压力。打开螺丝上水夹，使灌流液充满导管，并调节莫非氏管内的滴管出口，使之高于管内液面（便于观察滴数）。关闭止水夹。

　　2．标本制备蟾蜍或蛙双毁髓后，背位置于五角板上，自下腹部中线剪开腹壁，轻轻将内脏推向一侧，再剪开背部腹膜，分离背主动脉，用线结扎尿殖动脉，以防漏液。在背主动脉下方穿两条线，一条线用以结扎近心端，另一条线在远心端打一活结备用。左手提起近心端的结扎线，右手用眼科剪沿离心方向在背主动脉上剪一小口，将准备好的动脉插管从切口处插入，用备用线扎紧插管。打开止水夹，用灌流液冲洗血管内血液。调节止水夹，使灌流速度保持20滴/min左右。用金冠剪剪去动脉插管前方的肢体。内脏器官自基部结扎后再剪去。将两后肢趾端固定于灌流蛙板上，固定动脉插管（图4-29），防止灌流过程中发生扭曲。

　　3．将五角板固定在支架上，使其肢端位于上方，躯干部位于斜下方。静脉流出液集中于五角板的一角流下。固定灌流压力为15—25cmH₂ O。

　　4．固定受滴器使流出的液滴正好可以接通受滴器的两电极（勿使液滴停留在两极之间，以免发生短路）。受滴器的插头接多用仪或记滴器的受滴器插孔。用记纹鼓记录时，自上而下依次安装记滴、刺激标记及记时标记电磁标，各自的插头插入多用仪的同名插孔，3只笔尖对齐。开启电动记纹鼓，连续记录3—4次稳定的流量（计数0.5min滴数或用量筒收集流出液），求出均值作为对照。

　　5．于灌流导管近动脉插管处用注射针头刺入管内，缓慢注入0.2ml去甲肾上腺素溶液，同时作好加药记号，记录流量变化。

　　6．待流量稳定后，用同样方法观察并记录乙酰胆碱对流量的影响。

　　将记录的实验数据填入表4-7

　　表4-7后肢灌流实验记录表（0.5min流量）

　　7．收集各组实验数据，按附录三统计方法处理。说明不同药物对血管灌流量的影响。