细菌cellulase活性的检测方法

cellulase活性的检测方法很多，包括：
1.棉线切断法；
采用Monod 恒温振荡器,将缝纫机线(15 支纱) 的一端浸入含有5 ml 酶液的试管中,
pH 5. 0 ,40 ℃,72 r·min - 1振荡测定纱线切断所需时间,以此来得到酶活力。
2.滤纸崩溃法
采用Monod 恒温振荡器,将两片滤纸(1 ×1 cm) 加入装有5 ml 酶液试管中,40 ℃,72
r·min - 1 ,pH 4. 0 。计算滤纸完全崩溃所需要的时间,求得酶活力。
3.浊度法
用0. 03 % Avicel 在pH 5. 5 ,40 ℃下经T. koningii 酶液作用后,用其浊度的减少代表C1酶活。
4.羧甲基纤维素钠(CMC2Na) 为底物的粘度减少和还原力生成的测定法。
1）CMC 粘度降低的方法(旋转粘度计法)
底物溶液100 g ,加酶液5 ml ,30 ℃,反应18 min ,采用旋转粘度计测定底物第3 分钟和第18 分钟的粘度。用公式算出纤维素酶活单位。
2）CMC 粘度降低的方法(工研法)
底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,测定底物粘度减至一半时所需时间,以奥氏粘度计
测定。以10 min 能使底物粘度降低一半的酶活做为一个单位。
3）还原糖增加法
底物溶液9 ml ,加酶液1 ml ,40 ℃,反应15 min ,在此条件下,生成相当于1 mg 葡萄糖
的还原力为一个酶活力单位。
5.巴鲁阿- 斯温(Barnch and swain) 测定法
以水杨酸为底物,根据被水解出的水杨醇和β2D2葡萄糖的多少以比色法测定β2葡萄糖苷酶活力。
6.染色纤维素法
用Remazol 亮兰使滤纸、纤维素粉或微晶纤维素等染色,酶解后在595 nm 下测释放的着色化合物的光吸收值,以其代表酶活。
7.快速测定纤维素酶CMC 液化活力法〔4〕
以铬矾作交联剂,使羧甲基纤维素交联产生粘度较大的凝胶,如琼脂培养基一样,通过凝胶液化的程度和快慢来观测酶活的高低。此法简便易行,目测即可,用于菌种初筛十分方便。
1 ml 酶液,加入10 ml 铬矾液,加入CMC 20 ml ,50 ℃保温,观察液化情况。
8.平板法
在菌种选育工作中都希望在平板上对产生菌直接进行筛选,这是提高工作效率的关键。磷酸膨胀纤维素易于制成均匀的双层平板,纤维素酶也易形成清晰的透明圈,已在产纤维素酶真菌选育中广为应用。

在以上的各种检测方法中，用的比较多的可能就是还原糖增加法。此外还有很多的方法用来检测单一纤维素酶组分活力。