酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别

实验十四 酵母菌的形态观察及死、活细胞的鉴别

　　一、目的要求

　　1．观察酵母菌的细胞形态及出芽生殖方式。

　　2．学习掌握区分酵母菌死、活细胞的染色方法。

　　二、基本原理

　　酵母菌是多形的、不运动的单细胞微生物，细胞核与细胞质已有明显的分化，菌体比细菌大。繁殖方式也较复杂，无性繁殖主要是出芽生殖，仅裂殖酵母属是以分裂方式繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验通过用美蓝染色制成水浸片，和水-碘水浸片来观察生活的酵母形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒性染料，它的氧化型是蓝色的，而还原型是无色的，用它来对酵母的活细胞进行染色，由于细胞中新陈代谢的作用，使细胞内具有较强的还原能力，能使美蓝从蓝色的氧化型变为无色的还原型，所以酵母的活细胞无色，而对于死细胞或代谢缓慢的老细胞，则因它们无此还原能力或还原能力极弱，而被美蓝染成蓝色或淡蓝色。因此，用美蓝水浸片不仅可观察酵母的形态，还可以区分死、活细胞。但美蓝的浓度、作用时间等均有影响，应加注意。

　　三、器材

　　酿酒酵母或卡尔酵母（Saccharomyces calsbergensis）；

　　0．05％、0．1％吕氏碱性美蓝染液，革兰氏染色用的碘液；

　　显微镜，载玻片，盖玻片等。

　　四、操作步骤

　　1．美蓝浸片观察

　　(1)在载玻片中央加一滴0．1％吕氏碱性美蓝染液，液滴不可过多或过少，以免盖上盖玻片时，溢出或留有气泡。然后按无菌操作法取在豆芽汁琼脂斜面上培养48小时的酿酒酵母少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。

　　(2)用镊子夹盖玻片一块，小心地盖在液滴上。盖片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将整个盖玻片慢慢放下，这样可以避免产生气泡。

　　(3)将制好的水浸片放置3分钟后镜检。先用低倍镜观察，然后换用高倍镜观察酿酒酵母的形态和出芽情况，同时可以根据是否染上颜色来区别死、活细胞。

　　(4)染色半小时后，再观察一下死细胞数是否增加。

　　(5)用0．05％吕氏碱性美蓝染液重复上述的操作。

　　2．水-碘浸片观察

　　在载玻片中央滴一滴革兰氏染色用的碘浓，然后再在其上加三滴水，取酿酒酵母少许，放在水-碘液滴中，使菌体与溶液混匀，盖上盖玻片后镜检。

　　五、实验报告

　　结果

　　(1)绘图说明你所观察到的酵母菌的形态特征。

　　(2)说明观察到的吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间对死活细胞数的影响。