马丁氏培养基的制备

 

实验二十一 马丁氏培养基的制备

 

　　一、目的要求

　　通过对分离真菌用的马丁氏（Martin）培养基配制，掌握对选择培养基的配制方法，并明确选择的原理。

　　二、基本原理

　　马丁氏培养基是一种用来分离真菌的选择性培养基。此培养基是由葡萄糖、蛋白胨、KH₂ PO₄ 、MgSO₄ ·7H₂ O、孟加拉红（玫瑰红，Rose Bengal）和链霉素等组成。其中葡萄糖主要作为碳源，蛋白胨主要作为氮源，KH₂ PO₄ 和MgSO₄ ·7H₂ O作为无机盐，为微生物提供钾、磷和镁离子。而孟加拉红和链霉素主要是细菌和放线菌的抑制剂，对真菌无抑制作用，因而真菌在这种培养基上可以得到优势生长，从而达到分离真菌的目的。

　　马丁氏培养基配方如下：

　　KH₂ PO₄ 1g

　　MgSO₄ ·7H₂ O 0．5g

　　蛋白胨 5g

　　葡萄糖 10g

　　琼脂 15—20g

　　水 1000ml

　　pH 自然

　　此培养液1000ml加1%孟加拉红水溶液3．3ml。临用时每100ml培养基中加1%链霉素液0．3ml。

　　三、器材

　　KH₂ PO₄ ，MgSO₄ ·7H₂ O，蛋白胨，葡萄糖，琼脂，孟加拉红，链霉素；

　　试管，三角烧瓶，量筒，玻棒，培养基分装器，扭力天平，牛角匙，高压蒸汽灭菌锅等。

　　四、操作步骤

　　1．称量和溶化

　　按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。再将孟加拉红配成1%的溶液，在1000ml培养液中加入1%的孟加拉红溶液3．3ml，混匀后，加入琼脂加热溶化（方法同实验十九）。

　　2．分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检查与实验十九相同。

　　3．链霉素的加入

　　由于链霉素受热容易分解，所以临用时，将培养基溶化后待温度降至45℃左右时才能加入。可先将链霉素配成1%的溶液，在100ml培养基中加1%链霉素液0．3ml，使每毫升培养基中含链霉素30μg。

　　五、实验报告

　　思考题

　　（1）什么是选择培养基？它在微生物学工作中有何重要性？

　　（2）培养细菌、放线菌、酵母菌、霉菌的最适pH值各为多少？