血友病A是常见的遗传性凝血障碍，它是由凝血因子Ⅷ的基因缺陷而致其功能异 常的致其发病率改为1/1000男性，女性患者极为少见.在临床上，血友病大都有家族 史，亦有约20～30%的患者为散发病例，为新生基因突变所致.
一、血友病的遗传学
本病为X连锁隐性遗传病，其基因定痊于Xq28.因子Ⅷ(FVⅢ)基因全长约为186Kb， 包括26个外显子和25个内含子，其mRNA全长约为9Kb，CDNA占为9009bp.其翻译产物为 2351个aa残基的多肽链.在FVⅢ基因内含有多个酶切位点，在其翻译区尚有VNTR序列 及(CA/n重复序列.
二、FVⅢ基因突变的特点
(一)大范围的缺失，重排，重复及括入仅点血友病A的5%
(二)FVⅢ基因突变的主要类型为单碱置换所引起的点突变，目前还发现的单碱是 置及在八十种以上，几乎涉及FVⅢ的所有外显子和部分内含子.
三、PCR技术在血友病A基因产前诊断中的应用
FVⅢ基因突变以点突变为主，而且有高度异质性，因此对患者的诊断10前还是主 要依据临床表现进行，在一个家系内若要进行血友病A的产前诊断，则必须用连锁分 析的方法，该方法的应用则必须满折方法有以下两种:
(一).PCR-RFLP
在因子组基因内及其复侧有多组RFLP位点可用为标记进行连锁分析进行产前诊 断，常用的PCR-RFLP位点有两种，其引物序列，酶切片段多者情况见下表.
<center>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>
<div>
位点</div>
</td>
<td>
<div>
引物序列</div>
</td>
<td>
<div>
内切酶</div>
</td>
<td>
<div>
长度</div>
</td>
<td>
<div>
酶解片段</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
<font>Ext18</font></td>
<td>
<font>5'-TAAAAGCTTAAATGG TCTAGGC-3'</font></td>
<td>
<div>
<font>Bcl</font> Ⅰ</div>
</td>
<td>
<div>
<font>142</font></div>
</td>
<td>
<div>
<font>99</font> ＋<font>43</font></div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
</td>
<td>
<font>5'-TTCGAATTCTGAAATT ATCTTGTTC-3'</font></td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
<font>Int22</font></td>
<td>
<font>5'-CACGAGCTCTCCATCT GAACATG-3'</font></td>
<td>
<div>
<font>Xba</font> Ⅰ</div>
</td>
<td>
<div>
<font>96.0</font></div>
</td>
<td>
<div>
<font>68</font> ＋<font>28</font></div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
</td>
<td>
<font>5'-GGGCTGCAGGGGGGG GGGACAACAG-3'</font></td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
<font>Int19</font></td>
<td>
<font>5'-GGCGAGCATCTACAT GCTGGGATGAGC-3'</font></td>
<td>
<div>
<font>Hind</font> Ⅲ</div>
</td>
<td>
<div>
<font>717</font></div>
</td>
<td>
<div>
<font>469</font> ＋<font>167</font> <font>＋</font> <font>81</font></div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
</td>
<td>
<font>5'-GTCCAGAAGCCATTC CCAGGGGAGTCT-3'</font></td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
</tr>
</tbody>
</table>
</center>
(二)，Amp-FLP
在FVⅢ区内尚有两个VNTP区，一个位于DXS52，另一个为(CA)n位于DX102内，它 仍均具有复杂的多者性，亦可用于连锁分析，是引物及扩增产物的多者性见下表
<center>
<table>
<tbody>
<tr>
<td>
<div>
位置</div>
</td>
<td>
<div>
引物</div>
</td>
<td>
<div>
片段</div>
</td>
<td>
<div>
范围</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
<font>DXS52</font></td>
<td>
<font>5'GGCATGTCATCACTTCT CTCATGTT-3'</font></td>
<td>
<div>
<font>14</font></div>
</td>
<td>
<div>
<font>0.7-3.0</font></div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
</td>
<td>
<font>5'CACCACTGCCCTCACG TCACTT-3'</font></td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
<font>DX102</font></td>
<td>
<font>5'GTAGTCTCAGTCGACA TGCTTTGAC3'</font></td>
<td>
<div>
<font>8</font></div>
</td>
<td>
<div>
<font>152</font> ±</div>
</td>
</tr>
<tr>
<td>
</td>
<td>
<font>5'GCTGAGAAAGTAGATC CTAAGTGTTC3'</font></td>
<td>
<div>
</div>
</td>
<td>
<div>
</div>
</td>
</tr>
</tbody>
</table>
</center>
(三)血友病APCR基因诊断程序
1.母亲、先证者的RFLP及Amp-FLP，确定风险染色体
2.检测胎儿性别(SRT)
3.检测胎儿的RFLP及AmP-FLP
四、散发病例FVⅢ基因突变的PCR检测
由于因子FVⅢ的基因突变以点突变为主，而且具有高度特异性，因此，单独网点 突变的检测方法仍以诊断，对于形发病例来说，可用PCR-SSCP，PCR-DGGE及其它的点 突变是筛查方法确定点突变血友病A之间的关系具有重要意义，尤其是PCR-DGGE已用 于血友病A基因点突变的筛查.
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