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转移至硝酸纤维素滤膜前后进行的RNA染色

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当RNA自琼糖凝胶转移至硝酸纤维素滤膜之前,溴化乙锭的染色时间一般不宜过长,这是因为被染料饱和的核酸分子,其转移效率有所降低。然而,用溴化乙锭作短暂染色,既不至于对核酸转移过程产生可以察觉的掏作用,又独具同时检测凝胶和凝膜上的RNA的优点。
 1.方法I
     1)电泳结束后,含乙二醛-DMSO的凝胶应浸入含溴化乙锭(0.5 μg/ml)的10mmol/L磷酸钠(pH7.0)溶液。甲醛凝胶需用无RNA酶的水淋洗,用20xSSC溶液浸泡,随后用含溴化乙锭(0.5μg/ml)的20xSSC溶液染色。
     2)于室温染色5-10分钟,在紫外灯下观察,照像。
     3)按前所述方法, 将凝胶中的RNA转移至硝酸纤维素滤膜,转移后能常在学光下也可看出已染色的RNA条带。
这种方法仅适用于每一泳道均含有相当大量(如5μg 以上)的RNA的情况。
2.方法Ⅱ
  硝酸纤维素滤膜上的RNA也可以用下述方法染色:从干烤后的硝酸纤维素滤膜上剪下所需的条带进行染色,也可以用经过杂交并经X光片曝光后的整张滤膜进行染色(A.Efstratiadis,未了表材料)。
    1)将干燥的滤膜浸入5%冰乙酸中,于室温浸泡15分钟。
    2)再将滤膜转移至0.5mol/L乙酸钠(pH5.2)、0.04%亚甲蓝溶液中, 于室温浸泡5-10分钟。
    3)用水淋洗滤膜5-10分钟后,可见RNA分子量标准参照物带型锐利而poly(A)+mRNA为一模糊带型,由许多长度范围从500碱基以下至5kb以上的各种mRNA共同组成,mRNA的平均长度约为2kb。

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