血清三酰甘油的含量测定

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【 实验目的】

 

1.掌握测定三酰甘油的原理和方法。

 

2.了解血清三酰甘油的正常值及临床意义。

 

【实验原理】

 

三酰甘油的主要生理功能是储能和供能，主要分布在皮下、腹腔大网膜、肠系膜、内脏周围等脂肪组织中。在血清中，内源性三酰甘油主要以VLDL的形式运输，外源性三酰甘油主要以CM的形式运输。在正常成人空腹血脂中，三酰甘油的含量为0.11～1.69(均值为1.13)。血脂的含量受膳食、种族、性别、年龄、职业、运动状况、生理状态以及激素水平等多因素影响，波动范围较大。例如：青年人血浆胆固醇水平低于老年人，某些疾病时，血脂含量有很大变化，如糖尿病和动脉粥样硬化的患者，血脂一般都明显升高。因此，测定血脂的含量在临床上具有重要的意义。

 

用正庚烷-异丙醇联合抽提血中的三酰甘油，再用KOH皂化抽提液，生成甘油，然后用过碘酸钠氧化甘油，生成甲醛，最后甲醛与乙酰丙酮及氨缩合，生成带黄色荧光的3,5 —二乙酰—1,4—双氢二甲基吡啶。

 

 

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【 器材和试剂】

 

1.器材 试管及试管架、混匀器、恒温水浴箱、微量加样器、吸量管、吸耳球、可见光分光光度计 、比色杯、记号笔。

 

2.试剂

 

(1)新鲜血清。

 

(2)抽提剂为正庚烷—异丙醇(2∶3.5)(V／V)。

 

(3)0.04mol/L H2SO4溶液。

 

(4)异丙醇。

 

(5)皂化试剂： 6.0g/> KOH溶于60ml蒸馏水中，加异丙醇10ml混合，置棕色瓶中,室温

 

保存。

 

(6)氧化试剂：650mg过碘酸钠溶于约100ml蒸馏水中，加入 77g/>醋酸铵，溶解后再加

 

入60ml冰醋酸，加水至1000ml，置棕色瓶中室温保存。

 

(7)乙酰丙酮试剂：0.4ml乙酰丙酮加异丙醇至100ml，置棕色瓶中，室温保存。

 

(8)三酰甘油标准液：精确称取三酰甘油酯 1.00g/>于100ml容量瓶中，加抽提剂至刻度,此为储存标准液( 10g/>／L)。临用时，再以抽提剂稀释10倍，即得 1g/>/L应用液，冰箱保存。

 

 

 

【操作步骤】

 

1.取干试管3支，编号，按下表准确加入试剂：

 

试剂

 

空白管

 

标准管

 

测定管

 

血清（ml）

 

—

 

—

 

0.2

 

标准液（ml）

 

—

 

0.2

 

—

 

蒸馏水（ml）

 

0.2

 

—

 

—

 

抽提剂（ml）

 

2

 

2

 

2

 

0.04mol/LH2SO4(ml)

 

0.6

 

0.6

 

0.6

 

边加边摇，加毕剧烈振摇25min，然后静置分层。

 

2.另取3支同样编号的干试管，各加上层液0.3～0.5ml（三管液量相等），再加异丙醇

 

2ml及皂化剂0.4ml，立即摇匀，于 65℃/>保温5min。

 

3.各管加入氧化剂2ml及乙酰丙酮试剂2ml，充分混匀。至 65℃/>水浴保温15min，用

 

冷水冷却，以420nm波长或蓝色滤光片比色，以空白管校正零点，读取各管吸光度。

 

【计算】

 

血清三酰甘油mmol/L＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×0.2×100÷0.2×0.011

 

＝（测定管吸光度/标准管吸光度）×1.1

 

正常值=0.22～1.21mmol/L

 

【附注】

 

1.本试验受检者需空腹12～14小时。

 

2.乙酰丙酮的吸收峰在波长415nm左右。

 

3.计算公式中的0.11为mg/L换算成mmol/L的系数。

 

4.本法用廉价庚烷作为与异丙醇的混合抽提剂。此外，如辛烷或壬烷以及沸程在 98.4～ 150.70℃/>的石油醚均可采用。故抽提剂也可用汽油-异丙醇。

 

【思考题】

 

实验中，H2SO4的作用是什么？