细胞生理活动的实验观察

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【实验目的】
通过制片与观察加深理解细胞的运动、吞噬等生理活动。
【实验用品】
一、材料和标本 雄性蟾蜍、小白鼠、l％鸡血悬液、6％淀粉肉汤、草履虫。
二、器材和仪器 光镜、2ml注射器、载玻片、盖玻片、解剖器材、滴管、移液管、试管、玻璃片、黑纸。
三、试剂 0.3％台盼兰、1％刚果红。
【实验内容】
一、细胞的吞噬活动
(一)原理
白细胞是机体防御系统中能游走的单位。它分为粒细胞系、单核细胞系、淋巴系三类。它们有许多生理功能，如游走性、变形运动、趋化性、吞噬异物等。在白细胞中，以粒细胞、单核细胞的吞噬活动较强，故称此二类细胞为吞噬细胞。单核细胞由血液进入组织后逐渐演变成巨噬细胞。吞噬细胞主要靠吞噬来处理异物。吞噬细胞首先由于趋化作用而向异物游走，然后伸出伪足包围异物，并发生内吞作用形成吞噬泡将异物吞入细胞，继而溶酶体与吞噬泡融合消化异物。
(二)小白鼠腹腔巨噬细胞吞噬活动的观察
l．实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6％淀粉肉汤O．5～1ml(含O．3％台盼兰，起标记作用)，以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞(此步由教师在实验前进行完毕)。
2．实验时，每组取一只经上述处理的小鼠，腹腔注射1％鸡血悬液0．5～1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3．1小时后，用颈椎脱位法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹壁，向腹腔注入O．5ml～1ml生理盐水，用牙签轻轻搅拌使生理盐水与腹腔液混匀。
4．用注射器抽取腹腔液，滴片，然后盖上盖片。
5．镜检，高倍镜下画图记录所见结果。
二、暗视野观察细胞的纤毛和鞭毛运动
(一)原理
暗视野照明法是一种不使照射被检物体的光线直接进入物镜的照明方法。常常用它来观察没有染色的活体细胞或胶体粒子。利用此照明法，在镜检时不能直接看到通过标本的照明光线，只有被检物体反射或衍射的光线进入物镜可以提高分辨率，在暗视野中可以看到明亮的被检物体的存在和运动，但它们的内部结构却看不清楚。
(二)自制遮光板变普通显微镜为“简单的暗视野显微镜”。
步骤：
1．将显微镜聚光器调到最高位，用低倍镜调焦至清楚。
2．取下目镜，从镜筒中观察并调节光圈的大小，使其与镜筒中所见物镜的视野相等。
3．放一块透明玻璃于载物台透光孔上，用尺子测量光圈孔径。
4．按照图6--1的形状，用黑纸剪成与调节后光圈孔径一样大小的中央遮光板。
5．将中央遮光板放置在显微镜的滤光框上，即可进行标本的暗视野观察。
注：如果使用高倍镜观察标本时，应按高倍镜调焦的视野大小重新制作中央遮光板。

图6—1中央遮光板
a．光圈孔径
b．滤光片直径
(三)观察蟾蜍上颌粘膜上皮细胞的纤毛运动
步骤：
1．用捣毁脑脊髓的方法处死蟾蜍。
2．腹部向上将蟾蜍固定在蜡盘上。
3．沿蟾蜍二侧口角向后剪开约l厘米，将下颌翻转固定在腹部。
4．在上颌中线距喉头1厘米处放置腊屑，观察腊屑向什么方向移动？记录腊屑开始移动到消失的时间(见图6--2蟾蜍口腔内面图)。
5．然后，用眼科剪刀剪取咽头前部的上颌粘膜约2×2cm2小块，用牙签挑取剪下的粘膜，将纵切面贴于载片上。
6．加一滴生理盐水于载玻片标本上，加盖玻片，镜检。

图6—2 蟾蜍口腔内面图
结果：
1．在低倍镜下观察上颌粘膜细胞纤毛运动的现象。
2．换高倍镜仔细观察纤毛有规律的运动。
(四)暗视野观察蟾蜍精子的鞭毛运动