细胞爬片实验经验总结

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进实验室这么长时间了，每一天都好像过得很艰难，每一项实验的完成都很辛苦，其中的每一个细节都不能大意，不然做得一切都要前功尽弃。

实验室里没有人做细胞爬片，我连见都没见过，老板的实验却要求这个东西，只能自己摸索。查资料 搜信息，自己实践，终于做出了可以用来后期实验的细胞爬片。

总结经验如下：

首先是玻片的处理，普通的盖玻片用砂轮划成自己要的大小的小方块，先用洗衣粉洗干净，用水冲静烤干，然后泡酸过夜，捞酸后流水洗净，烤干，置于器皿中高压灭菌，然后再烤箱中大约8小时烤干备用。

爬片可以在培养皿 六孔板或24孔板中都可，我选择在培养皿中爬。一为节约经费(培养皿可以重复利用)二来觉得培养皿口大，操作比较方便。培养皿消毒同上，消毒时记得消两把镊子。

具体操作是：用胰酶消化好细胞，充分吹打，使之成单细胞悬液(注意：这一点很重要，关系到将来爬出来片子的质量)。

取出消毒的培养皿，可以先加少量培养基(以使玻片与培养皿紧密接触)，将玻片小心放入摆放其中，然后将单细胞悬液一滴一滴的滴到玻片上。最后盖上培养皿置于37度5%CO2的暖箱中培养，根据细胞生长状况，24小时或更长时间适时取出爬片。

爬片置于37度PBS 中洗三次，每次3到5秒钟，然后在4%多聚甲醛中固定15分钟，然后再用37度去离子水将甲醛冲干净，注意手法轻柔，要不然掉片很厉害。同时操作过程中注意玻片的正反面，要不然真的是前功尽弃。

将做好的爬片置于滤纸上晾干，然后用中性树胶粘在载玻片上。注意一定要等中性树胶彻底干了之后才能做后续实验，要不然玻片会掉下来的，就又是前功尽弃了 做好的细胞爬片可以放在-20保存备用，具体能保存多长时间不太清楚，当然尽量早用。