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选择合适的标记方法

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地高辛( DIG )产品选择指南 ―― 选择合适的标记方法

标记DNA 探针

如果您有足够量的高纯度模板,建议您采用随机引物标记方法的 DIG High Prime DNA Labeling and Detection Starter Kit I II 。这两个试剂盒包含了标记、封闭、杂交和 检测 所需要的所有试剂,是真正意义上的一站式服务的试剂盒。二者之间的差别在于检测方法的不同: Starter Kit I 采用了显色法,使用 显色底物 NBT/BCIP ;而 Starter Kit II 选用化学发光法底物 CSPD

如果您用来合成探针的 DNA 模板的量比较少或是质量不够高的时候,建议您使用 PCR DIG Probe Synthesis Kit 。该试剂盒专用于制备高灵敏度的杂交探针,例如单拷贝的基因。其另一个特点就是实验中无需定量斑点检测过程,通过定量凝胶 电泳 就可以快速确定 PCR 标记探针的效率。

用缺口平移法标记的DNA 探针,可以控制探针长度,一般多用于原位杂交。

标记RNA 探针

Northern blot 中即可以使用 DNA 探针,也可以使用 RNA 探针。通常, RNA 探针的特异性和灵敏度都会更高一些;当然如果对灵敏度和特异性没有特别严格的要求的话, DNA 探针会更方便操作。

如果您需要制备 RNA 探针的话,推荐您使用 Northern Starter Kit 。该试剂盒以线性的 DNA 为模板,通过 SP6, T7 或是 T3 RNA 聚合 的作用将 DIG-11-UTP 掺入到转录的 RNA 中,借助化学发光底物 CDP-Star 检测。另一个产品 DIG RNA Labeling Kit 也可用于 RNA 探针的标记。

末端标记寡核苷酸Oligonucleotide
如果您的探针模板非常短,量也比较少,您可以选择末端标记法标记寡核苷酸探针。

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