逆流色谱在中药质量控制中的应用

逆流色谱技术是一种不需要任何固态载体的液液分配分离技术，以轻巧的聚四氟乙烯螺旋管做分离柱，根据物质在两个互不混溶的溶剂相中的不同溶解度��分配系数来实现连续的分配、传递、分离过程。

   最早出现的液液分配装置是实验室里常用的分液漏斗。分配系数差异明显的物质，可以在分液漏斗中一次萃取实现分离，但实际遇到的问题往往是要分离性质极其相似的复杂混合物，这就需要进行多次萃取才能实现满意的分离。1944年发明了由大量试管组成的非连续式的逆流分溶装置，可实现分配分离，但仪器设备庞大复杂，溶剂系统容易乳化，溶剂消耗量大且操作时间太长。

   日本的Yoichiro Ito（伊东洋一郎）等发现了互不相溶的两相溶剂在绕成螺旋管的小孔径管子里分段割据，并能在重力场作用下实现两溶剂相之间的逆向对流。当螺旋管在离心力场内转动时，会形成更强的两相分割趋势和对流趋势，这种分割和对流的过程是连续进行的，在此基础上发展起来了逆流色谱技术（Countercurrent Chromatography, CCC），成为一个新兴的分离科学分支。

   逆流色谱的设备从非行星式的环形螺旋管离心仪、非同步行星式的非同步通流螺旋管行星式离心仪，发展到同步式的水平螺旋管行星式离心仪、角速度旋转螺旋管行星式离心仪，直至20世纪80年代出现的高速逆流色谱仪，使逆流色谱的分离能力和效率明显提高。高速逆流色谱设备与更为先进的外围设备，尤其是与蒸发光散射、示差、傅立叶红外光谱、质谱检测器的连接，为高速逆流色谱中药分离纯化领域的应用开辟了新的天地，为高速逆流色谱指纹图谱的研究提供了设备与技术基础。

   高速逆流色谱在分析分离上具有诸多优点：无固相载体，避免了待分离样品与固相载体表面产生化学反应而变性和不可逆吸附；分析/分离黏度较高和易被固定相吸附的样品方面具有明显优势；操作简单，样品不需严格的预处理；可从极复杂的粗制样品中一步分离得到高纯度的组分；能在一个流程中分离复杂样品中极性差异极大的各个组分；其仪器及耗材完全国产化，成本明显低于高效液相色谱，易于推广。

   我国是逆流色谱技术发展较早也较快的国家，因逆流色谱非常适合于分离有机小分子，结合我国特色，它的主要应用领域集中于中草药的分离纯化和质量控制，一方面可以利用高速逆流色谱制备高纯度的活性成分、杂质成分和有毒/有害成分，作为对照品；另一方面可以构建中药指纹图谱及数字化指纹谱，用于原药材、中间体和注射剂的质量控制。

   近年来利用HSCCC技术已从几十种天然植物中制备得到数百种单体化合物，包括生物碱类、黄酮类、醌类、萜类、木质素类、香豆素类、皂甙类等。北京新技术研究所制备了多种高纯度的单体化合物并获得了国家质量技术监督局的认证，作为国家实物标准。上海同田生化技术有限公司生产了数十种纯度超过98%的对照品供科研院所及企业用于质量监控。中国科学院过程工程研究所已从数种植物中制备了多种单体化合物，如：丹参酮I、丹参酮IIA、隐丹参酮、原儿茶酸、黄芩素、黄芩甙、灯盏乙素等。

   中科院过程工程研究所已初步建立了HSCCC法指纹图谱的方法，在此基础上提出并建立了HSCCC数字化指纹谱，包含了较丰富的化学信息，准确度较高，抵消了操作因素的影响，降低了保留值的波动性；样品不需要严格预处理，分析、分离高黏度及易造成固定相吸附的样品将表现出突出优势；仪器性价比较高，适于在药材产地推广使用。