鱼血量的测定

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鱼血量的测定

【目的】掌握测定鱼血量的原理和方法。

 

【原理】根据间接稀释原理测定鱼体循环血量。将一定量的物质注入静脉内，待该物质与血液混合达到平衡时，该物质的浓度与血液的量成反比，血量越多，该物质的稀释倍数就越大。试验中采用的定量物质必须是无毒，不容易被排泄，也不会扩散到体内其它体液，本试验采为51Cr.

 

【器材】鱼、液体闪烁测定仪、肝素、Na251CrO4、生理盐水、离心管、注射器、50ml容量瓶、恒温水浴槽、平底试管、微试管。

 

【步骤】

⒈51Cr标记红细胞。

⑴取鱼血1ml放入离心管内，用少量二素抗凝。

⑵加0.5mlNa251CrO4溶液（6ucl/ml0.

⑶在10~15℃ 的水浴中孵育1小时，每隔5分钟轻摇一次，这时大部分的51Cr进入红细胞，少量51Cr游离于血浆。

⑷将标记的血液离心（5500g ）2分钟，去除血浆。用冷却的生理盐水冲洗红细胞，再离心去除生理盐水，重复多次使冲洗液中放射强度小于红细胞放射性强度的1%为止。然后用生理盐水稀释红细胞，使之与原来的血液容量相等。

⒉注射51Cr标记的红细胞

精确地吸取0 .5ml标记红细胞悬浮液，从鱼的尾静脉注入体内，标记的红细胞在血液循环中大约经过30分钟就可以均匀地分布。

⒊标准样品的制备

精确吸取0 .5ml红细胞悬浮液，移入50ml容量瓶中，用蒸馏水稀释到刻度，充分均匀之后取3ml于平底试管中，加盖以备测定放射性强度。

⒋注射51Cr标记的红细胞30分钟以后，从鱼的尾静脉抽取1ml血样，精确吸取0.5ml血样移入平底试管，待测定放射性强度。同时用微试管取少量血样测定血细胞比容。

⒌用液体闪烁测定仪测定标准样品和试验样品的放射性强度，以CPM计，并减去本底。

 

【计算】

V为血液的红细胞量（容积）

V=Q/C

Q为注射到鱼体内标记红细胞的51Cr量，C为51Cr标记的红细胞在血液循环中均匀分布后的浓度（CPM/ml）

Q=

V1为注射的毫升数，Cs为标准样品的计数率，100为标准样品的稀释倍数。

C=

最后根据红细胞量和血细胞比容计算血量。

【注意事项】

标记的红细胞悬浮液在使用时必须摇匀。