吉满慢病毒载体与包装FAQ

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«介绍一下贵公司的慢病毒载体 ，有何特点?

本公司的慢病毒载体是在第三代慢病毒载体系统的基础上优化而成的，经过优化，我们的载体滴度高，安全性好，转染 高效。

«慢病毒 如何储存?

客户在收到慢病毒 液后，如果在很短的时间内就开展实验的话，可以将病毒置于4℃保存;如果长期保存可将病毒装入冻存管中置于-80℃冰箱(注意：病毒可以在-80℃保存6个月，如果 超过6个月，建议使用前重新测滴度)。

«反复冻融对病毒的滴度有影响吗?

反复冻融对病毒的滴度是有影响的，每次冻融会使病毒的滴度降低10%左右，所以尽量避免反复冻融，建议分装成小体积的方便每次使用。

«收到病毒后如何稀释?

客户如需稀释病毒，可以先将病毒冰浴融化，再用目的细胞或PBS 或无血清培养基稀释混匀后4℃保存，为保证病毒滴度，建议在3天内使用完毕。

«贵公司的慢病毒载体上有什么荧光标记?

目前我们的荧光标记有：ZsGreen 1，tdTomato，GFP，mcherry，GFP，FP635等。

«贵公司的慢病毒载体可以插入多大的目的片段?

我们采用独特的载体设计，最大可高效包装4kb的目的片段。

«贵公司的慢病毒的安全性如何?

我们的慢病毒载体经过了一系列的改造，病毒在感染细胞中并不能自我复制，从而大大降低了其危险性。尤其是我们使用了现在最新型第四代载体系统，是目前重组系数最低的一个慢病毒包装系统，至今为止未见重组报道。慢病毒对热、去垢剂、医用消毒水、福尔马林等均很敏感，但UV照射无法有效灭活。所以所有接触过病毒的器皿或枪头需要84消毒液浸泡半小时后用自来水冲洗然后丢弃或回收即可。

«如果在贵公司包装病毒，我们需要提供什么?

客户需要提供：(1)含有目标基因的质粒(包括测序图谱)，或目的基因的名称及序列;(2)所需要的病毒滴度及总量，病毒是否需要纯化;(3)实验目的及要求，是否需要对照病毒; 我们公司能提供滴度在1×10^8 TU/ml以上，体积为1ml的纯化病毒(根据客户需要，不同量有价格差异)。如果是RNAi用的病毒，我们公司将承诺提供能有效抑制目的基因的表达水平60%以上的病毒。

«包装好一个产品的周期大概需要多久呢?

一般而言载体构建及准备需要10-15个工作日，病毒包装及扩增需要20-30个工作日，滴度测定需要5-10个工作日，总计需要35-55个工作日。

«利用慢病毒载体的优势在于?

(1)对于一些较难转染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分化的细胞等,慢病毒能大大提高目的基因转导效率，而且目的基因整合到宿主细胞基因组的几率大大增加，这就为RNAi，cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径(2)可以进行稳转细胞株的筛选

«在进行病毒操作时我们应该注意些什么?

(1)病毒操作时最好使用生物安全柜。如果使用普通超净工作台操作病毒， 请不要打开排风机。(2)病毒操作时请穿实验服，带口罩和手套，也可带防护镜。(3)操作病毒时特别小心不要产生气雾或飞溅。如果操作时超净工作台有病毒污染，请立即用70%乙醇加1%的SDS 溶液擦拭干净。接触过病毒的枪头， 离心管，培养板，培养液请于84 消毒液或1%SDS 中浸泡过夜后弃去。(4)用显微镜观察细胞感染情况时应遵从以下步骤：拧紧培养瓶或盖紧培养板。用70%乙醇清理培养瓶外壁后到显微镜处观察拍照。离开显微镜实验台之前，用70%乙醇清理显微镜实验台。(5)如需要离心，应使用密封性好的离心管，或者用封口膜封口后离心， 而且尽量使用组织培养室内的离心机。(6)脱掉手套后，用肥皂和水清洗双手。

«慢病毒载体和其他常见病毒载体相比有哪些特点呢?

 

病毒表达系统	腺病毒表达系统	慢病毒表达系统	逆转录病毒
病毒基因组	双链DNA病毒	RNA病毒	RNA病毒
是否整合	病毒基因组游离于宿主基因组外，瞬时表达外源基因	病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因	病毒基因组整合于宿主基因组，长时间、稳定表达外源基因
感染细胞类型	感染分裂和不分裂细胞	感染分裂和不分裂细胞	感染分裂细胞，但在干细胞中表达效率低
表达丰度	高水平表达	高水平表达	高水平表达
表达时间	快（1-2 天）	慢（2-4 天）	快（1-2 天）
滴度	滴度高达1012 pfu/ml	最高可达109 －1010 TU/ml	最高可达109 －1010 TU/ml
克隆容量	可插入高达8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低	可插入不超过8kb的外源片段，滴度随插入片段长度增加而降低	可插入不超过6kb的外源片段
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性	低免疫原性
动物模型	不能得到转基因动物	可产生转基因动物，效率达50以上	可以，但很难
启动子	可以更换特异性启动子	可以更换特异性启动子	不需要启动子
能否用于 MIRCORNA	可以	可以	不可以
能否用于四环素诱导	不可以	TET-ON , TET-OFF	不可以