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微孔板实验如何减少"边缘效应"

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各位大虾,大家在用96-或/和384-微孔板做cell-based assay的时候,是否会遇到边缘效应(Edge Effect),表现出来的效应一般是边缘的一圈well读值异常,我观察和请教了周边的人,大家对这种效应的处理,一般有这几种方式:& K/ ]$ j9 {7 W  j$ D( C( d
1、周围一圈微孔放弃不用,不种细胞,而是铺上培养基或者水;
2、Microplate在CO2培养箱培养时,周围用加样槽或者其他容器装水,使得microplate周围的湿度加大;# U4 r  Z% I" k9 b- D, ^( @3 m
3、Microplate放入培养箱之前,先在室温平衡30min或者60min,待细胞贴壁之后再将microplate放入培养箱;
4、方法2和方法3的组合。
根据经验,不同的细胞类型,边缘效应的影响各异;对24h的实验来讲,边缘效应有些细胞可能影响极微,但是对有些细胞来讲,影响极大,甚至都不能开关培养箱门(这个见有人单独霸占一个培养箱,里面就放着他的几块96孔板);而对72h或者更长培养时间的实验,边缘效应一般很大,经常导致周围的一圈微孔不能使用。1 |- J( r3 n; ]  L  c# undefined J9 f7 X& m
那么,我一直很想知道,边缘效应的原因是什么,在上述方法2的理念里,是因为蒸发效应 ,导致培养基里水分减少,渗透压等理化因素变化,影响细胞的生长,所以在周围加水增加湿度,可以减少边缘效应。在上述方法3的理念里,是因为温度不平衡 ,骤然把微孔板从室温放入37度,那么周边孔更早升温,而这个时候细胞还在沉降,会向边缘的温度高的地方飘去降落,造成细胞密度局部加大,因为细胞的接触抑制,所以边缘的孔里面细胞生长速度减慢,所以造成边缘效应。' S; s( H6 h" W
我觉得两种说法都有道理,但是,在实际当中,边缘效应还是无法避免,只能降到一个差不多可以接受的水平(相对微孔板中央位置,差异10%以内。)
所以,我想请教大家,你们是怎么操作的?对于边缘效应的理论又是什么?谢谢!
附件中是一篇关于边缘效应的文章,供大家参考。A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays


(责任编辑:大汉昆仑王)
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