微孔板实验如何减少＂边缘效应＂

各位大虾，大家在用96-或/和384-微孔板做cell-based assay的时候，是否会遇到边缘效应（Edge Effect），表现出来的效应一般是边缘的一圈well读值异常，我观察和请教了周边的人，大家对这种效应的处理，一般有这几种方式：& K/ ]$ j9 {7 W  j$ D( C( d
1、周围一圈微孔放弃不用，不种细胞，而是铺上培养基或者水；
2、Microplate在CO2培养箱培养时，周围用加样槽或者其他容器装水，使得microplate周围的湿度加大；# U4 r  Z% I" k9 b- D, ^( @3 m
3、Microplate放入培养箱之前，先在室温平衡30min或者60min，待细胞贴壁之后再将microplate放入培养箱；
4、方法2和方法3的组合。
根据经验，不同的细胞类型，边缘效应的影响各异；对24h的实验来讲，边缘效应有些细胞可能影响极微，但是对有些细胞来讲，影响极大，甚至都不能开关培养箱门（这个见有人单独霸占一个培养箱，里面就放着他的几块96孔板）；而对72h或者更长培养时间的实验，边缘效应一般很大，经常导致周围的一圈微孔不能使用。1 |- J( r3 n; ]  L  c# undefined J9 f7 X& m
那么，我一直很想知道，边缘效应的原因是什么，在上述方法2的理念里，是因为蒸发效应 ，导致培养基里水分减少，渗透压等理化因素变化，影响细胞的生长，所以在周围加水增加湿度，可以减少边缘效应。在上述方法3的理念里，是因为温度不平衡 ，骤然把微孔板从室温放入37度，那么周边孔更早升温，而这个时候细胞还在沉降，会向边缘的温度高的地方飘去降落，造成细胞密度局部加大，因为细胞的接触抑制，所以边缘的孔里面细胞生长速度减慢，所以造成边缘效应。' S; s( H6 h" W
我觉得两种说法都有道理，但是，在实际当中，边缘效应还是无法避免，只能降到一个差不多可以接受的水平（相对微孔板中央位置，差异10%以内。）
所以，我想请教大家，你们是怎么操作的？对于边缘效应的理论又是什么？谢谢！
附件中是一篇关于边缘效应的文章，供大家参考。A Simple Technique for Reducing Edge Effect in Cell-Based Assays


(责任编辑：大汉昆仑王)