氨氮排泄率的测定

[目的与原理]
掌握水产动物氨氮排泄率的测定方法，并通过测定鱼类等水生动物的氨氮排泄率来计算蛋白质的代谢率。
水生生物在进行能量代谢时，消耗体内的蛋白质，蛋白质分解后大部分产物以氨氮形式排入水中，使水中氨氮含量增加，测定一定时间内水中氨氮含量的变化即为氨氮排泄率。
氨氮量的测定依据游离态的氨或铵离子与纳氏 试剂 反应，生成黄棕色络合物。该络合物的色度与氨氮的含量呈正比，可用分光光度计测定。
[ 试剂 与器材]
试剂：
1、0.35%的硫代硫酸钠：称取3.5g硫代硫酸钠（Na ₂ S ₂ O ₃ ·5H ₂ O）溶于水，稀释至1000ml。
2、25％的氢氧化钠溶液
3、 纳氏试剂：称取16g氢氧化钠溶于50ml水中，冷却至室温。称取7.0g碘化钾和10.0g碘化汞，溶于少量水中。然后将此溶液在搅拌下缓慢加入到氢氧化钠溶液中，用水稀释至100ml,于暗处静置24小时，倾倒出的上层清液，贮存于比色瓶中，在暗处存放。有效期可达一年。
4、50％的酒石酸钾钠溶液：称取50g酒石酸钾钠（KNaC ₄ H ₄ O ₆ ·4H ₂ O）溶于水中，煮沸除氨，冷却后用水稀释至100ml。
5、氯化氨标准贮备液：称取经100～110℃干燥2小时的氯化铵3.8190g溶于水，移入1000ml容量瓶中，稀释至标线，混合均匀。此溶液1.00ml含1.000mg氨态氮。
6、氯化铵标准溶液：吸取1.00ml氯化铵标准贮备液于1000ml容量瓶中，用水稀释至标线。此溶液1.00ml含0.010mg氨态氮。
器材：
水生动物呼吸室，及其耗氧率测定装置，分光光度计，比色管（50ml），比色管架，移液管，10mm比色杯，
[实验步骤]
1、安装呼吸室
2、测定实验开始时水中氨氮值（初氨氮量）及结束时水中氨氮值（末氨氮量），同时记录实验时间
3、水中氨氮测定方法
（1）取清洁水样或预处理后的澄清水样50ml于50ml比色管中，加入50％得酒石酸钾钠溶液1.0ml,混合均匀。再加入纳氏试剂1.0ml,摇匀。放置10分钟后进行比色。
（2）在一组50ml比色管中分别加入氯化氨标准溶液0、0.50、1.00、2.00、3.00、5.00、7.00、10.00ml，加水至标线，按步骤1.显色。
用10mm比色杯，在波长420nm处以水作参比，测定水样及标准系列的吸光度。同时以50ml水代替水样按与水样完全相同的操作步骤（包括预处理）进行空白试验，并测定其吸光度。
（3）绘制标准曲线，标准系列所测得的吸光度减去试剂空白（零浓度）的吸光度值，绘制吸光度对氨氮含量（μg）的标准曲线。
（4）结果计算：
C N (mg/L) = m/V
式中m------从标准曲线查得的水样氨氮含量（ug）
V------水体体积（ml）
4、氨氮排泄率的计算

[方法评估]
这是一种经典的方法，简便、易于操作。
[应用意义]
水产动物的排泄氮主要是氨氮，通过测定水产动物的排氨率，可以反映机体对蛋白质的排泄量；另外通过测定排氨率，结合食入氮、粪氮和体内沉积氮的测定，可以研究水产动物的氮收支。
[注意事项]
1、操作应在无氨的环境中进行。
2、氨氮含量大于2mg/L时，水样应先稀释再进行测定。
3、样品中含有悬浮物，余氯金属离子硫化物和有机物等对测定有干扰，处理方法如下：
（1）含有余氯的水样加入适量的硫代硫酸钠溶液，每0.5ml可除去0.25mg余氯。
（2）水样浑浊，有色或含硫化氢或易为碱沉淀的金属离子时，取100ml水样于具塞碘量瓶中，加0.3％硫酸锌溶液1ml和25％氢氧化钠溶液0.1～0.2ml，使水样pH值约为10.5，混合均匀，放置10分钟，用滤纸过滤，弃去2～5ml初滤液后，接取滤液备用。
（3）加50％酒石酸钾钠溶液络合掩蔽钙镁等金属离子以消除干扰。
（4）对污染严重的水样，或用凝聚沉淀及络合掩蔽后仍浑浊带色的水样，应采用 蒸馏 —纳氏试剂分光光度法。