鱼类肾小管的主动运输

鱼类肾小管的主动运输

【目的】

了解鱼类肾小管主动运输的特点，掌握观察肾小管主动运输的实验方法。

【原理】

物质进入细胞或通过膜的方式之一是主动运输，使物质从低浓度部位向高浓度部位运动（即逆浓度梯度）。本实验采用染色剂，使肾小管的颜色比周围环境的颜色深，从而证明染色剂被肾小管细胞主动转运。

【器材】

1、 实验鱼

淡水的鲤、鲫或海水的比目鱼均可。脊椎动物肾小管只在近球小管能显示染色剂的主动运输。因此，最适宜选用海水鱼类，因为它们的肾小管主要由近球小管组成。金鱼的肾小管，其中约10％的长度为近球小管，能够运输酚红，实验鱼在使用前2－3天不投喂，这样能较好的显示染色剂的主动运输。

2、 仪器

解剖剪、解剖刀、解剖针、解剖盘、显微镜、滴管、凹玻片、培养皿

3、 试剂

1） 生理盐溶液

NaCl <chmetcnv>5.8克</chmetcnv> （淡水鱼）或 <chmetcnv>7.8克</chmetcnv> （海水鱼）

KCl 0.19

CaCl _{2 ·} 2H ₂ O 0.22

MgCl _{2 ·} 6H ₂ O 0.20

NaHCO ₃ 1.26

NaH ₂ PO _{4 ·} H ₂ O 0.07

蒸馏 水 1000毫升

2)基本吸收介质:

在生理 盐溶液 中,每100毫升加入2.5毫克氯苯酚红。

3)低浓度的吸收介质：

在生理 盐溶液 中，每100毫升加入1.0毫克氯苯酚红。

4）缺钙的介质：

在基本吸收介质中不含CaCl _{2 ·} 2H ₂ O

5）缺钾的介质：

在基本吸收介质中不含KCl。

【步骤】

1、 肾小管碎片的制备：

将鱼的腹腔打开，迅速取出肾脏，放在盛有生理盐溶液的培养皿内。生理盐溶液需预先充气和预冷（放在冰箱内或放在冰块上。用解剖剪将肾脏剪成小片，再用解剖针将肾脏小片撕成宽度小于 <chmetcnv>1毫米</chmetcnv> 的碎片）。

2、 将少量肾小管碎片（2～3片）放在凹玻片的凹穴内，上面用盖玻片压住。按同样方法做成五份。

3、 观察肾小管对染色剂的运输：

分别取2－3滴下列溶液置于凹玻片的凹穴内，并在玻片上编号证明和记录加入溶液的时间。

（1） 生理盐溶液。

（2） 基本吸收介质

（3） 低浓度的吸收介质

（4） 缺钙的介质

（5） 缺钾的介质

注意防止玻片上水分的蒸发，这样可维持肾小管碎片存活数小时。每隔5，10，20，30，45，60分钟进行显微镜观察，检查肾小管碎片对染色剂的吸收情况。通常在5分钟开始有染色剂积累，30－60分钟到达吸收高峰。持续观察60分钟后停止实验。

4、 结果记录：