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鱼类肾小管的主动运输

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1912

鱼类肾小管的主动运输

【目的】

了解鱼类肾小管主动运输的特点,掌握观察肾小管主动运输的实验方法。

【原理】

物质进入细胞或通过膜的方式之一是主动运输,使物质从低浓度部位向高浓度部位运动(即逆浓度梯度)。本实验采用染色剂,使肾小管的颜色比周围环境的颜色深,从而证明染色剂被肾小管细胞主动转运。

【器材】

1、 实验鱼

淡水的鲤、鲫或海水的比目鱼均可。脊椎动物肾小管只在近球小管能显示染色剂的主动运输。因此,最适宜选用海水鱼类,因为它们的肾小管主要由近球小管组成。金鱼的肾小管,其中约10%的长度为近球小管,能够运输酚红,实验鱼在使用前2-3天不投喂,这样能较好的显示染色剂的主动运输。

2、 仪器

解剖剪、解剖刀、解剖针、解剖盘、显微镜、滴管、凹玻片、培养皿

3、 试剂

1) 生理盐溶液

NaCl 5.8克 (淡水鱼)或 7.8克 (海水鱼)

KCl 0.19

CaCl 2 · 2H 2 O 0.22

MgCl 2 · 6H 2 O 0.20

NaHCO 3 1.26

NaH 2 PO 4 · H 2 O 0.07

蒸馏 水 1000毫升

2)基本吸收介质:

在生理 盐溶液 中,每100毫升加入2.5毫克氯苯酚红。

3)低浓度的吸收介质:

在生理 盐溶液 中,每100毫升加入1.0毫克氯苯酚红。

4)缺钙的介质:

在基本吸收介质中不含CaCl 2 · 2H 2 O

5)缺钾的介质:

在基本吸收介质中不含KCl。

【步骤】

1、 肾小管碎片的制备:

将鱼的腹腔打开,迅速取出肾脏,放在盛有生理盐溶液的培养皿内。生理盐溶液需预先充气和预冷(放在冰箱内或放在冰块上。用解剖剪将肾脏剪成小片,再用解剖针将肾脏小片撕成宽度小于 1毫米 的碎片)。

2、 将少量肾小管碎片(2~3片)放在凹玻片的凹穴内,上面用盖玻片压住。按同样方法做成五份。

3、 观察肾小管对染色剂的运输:

分别取2-3滴下列溶液置于凹玻片的凹穴内,并在玻片上编号证明和记录加入溶液的时间。

(1) 生理盐溶液。

(2) 基本吸收介质

(3) 低浓度的吸收介质

(4) 缺钙的介质

(5) 缺钾的介质

注意防止玻片上水分的蒸发,这样可维持肾小管碎片存活数小时。每隔5,10,20,30,45,60分钟进行显微镜观察,检查肾小管碎片对染色剂的吸收情况。通常在5分钟开始有染色剂积累,30-60分钟到达吸收高峰。持续观察60分钟后停止实验。

4、 结果记录:

试验结果

试验开始后的时间(分钟)

5

10

20

30

45

60

试验结果

 

 

 

 

 

 

生理盐溶液

 

 

 

 

 

 

基本吸收介质

 

 

 

 

 

 

低浓度的吸收介质

 

 

 

 

 

 

缺钙的介质

 

 

 

 

 

 

缺钾的介质

 

 

 

 

 

 

 

用“+”号的多少表示染色剂在肾小管内积累的情况,+表示最少,++++表示最多。

 

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