胶原蛋白的分离

胶原蛋白是细胞外间质的主要成分，占人体总蛋白的1/3胶原蛋白具有广泛的生物活性，参与细胞增殖、运动、分化、以及肿瘤细胞的转移等病理过程。胶原提取物可作为某些特殊细胞培养的基质，模拟细胞的体内环境。胶原可以作为整形及美容的填充物材料，也可用于人造血管的预凝，在许多疾病的诊断与研究（肝硬化、肺纤维化、硬皮病等）中，胶原的提取及分析已成为必要的手段。
    目前已发现的胶原类型有13种，结构与功能较清楚的有Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型胶原。不同类型胶原在体内的分布不同。Ⅰ型胶原主要分布在筋腱、骨骼、牙齿和各种软组织器官中；Ⅱ型胶原主要在透明软骨和弹性软骨中；Ⅲ型胶原在各种软组织脏器内；与Ⅰ型胶原分布大致相同；Ⅳ型胶原在基膜里；Ⅴ型胶原在细胞外周。
    常用的胶原提取法为胃蛋白酶限制性降解法。在0.5mol/L乙酸中加入一定量的骨蛋白酶，于4℃作用于粉碎的组织，可将组织中的胶原蛋白提取出来，提取出的胶原，可按各型胶原析出的盐浓度不同而彼此分离。各种蛋白在酸性或中性的条件下被盐析沉淀所需的氯化钠的浓度。
操作方法：
所有操作需在0~4℃下进行。
1．  取皮肤小心刮去毛发，剔去皮下脂肪及结缔组织。
2．  丙酮中浸泡过夜，进一步去除残留脂肪，用冷 蒸馏 水清洗，除去丙酮。
3．  将组织切碎，倒入少量0.5mol/L乙酸（pH2.5），用打碎机打制成匀浆，加入胃蛋白
酶。酶量与湿组织量之比为1:100，再加入足量0.5mol/L乙酸，使溶液中酶的终浓度为2mg/ml。搅拌过夜。16,000r×45min离心，弃沉淀。
4．  留上清。沉淀重复3步，弃去沉淀。将2次上清合并。
5． 上清边搅拌边缓缓加入氯化钠粉末，使终浓度至0.7mol/L，放置过夜。16,000r×
45min离心，弃上清。
6． 沉淀用匀浆器匀浆，加0.5mol/L乙酸溶液，使溶液完全透明。
7． 边搅拌边缓慢加入氯化钠，使终浓度为0.7mol/L，放置过夜。
8． 16,000r×45min离心，弃上清。沉淀冷冻干燥，即得皮肤胶原制品。